Duolink® - 蛋白质相互作用检测新标准

绝大多数蛋白质会通过与其它蛋白质的相互作用来维持适当的生物活性。利用Duolink,您可以检测、定量以及可视化蛋白质-蛋白质的相互作用、单一目标蛋白质的表达水平以及翻译后修饰的过程。相较于传统蛋白质检测方法,Duolink技术的优势在于:能够充分利用抗体的选择性(特异性)与核酸扩增的灵敏性,在蛋白质的天然状态对其进行可视化检测。

  • 无需过表达蛋白质,可对单个相互作用进行可视化检测
  • 在内源水平定量检测微弱的和瞬时性的相互作用
  • 利用两个一抗的结合获得高特异性
  • 通过信号放大获得单分子级灵敏度
  • 可利用标准的免疫荧光仪器进行结果分析
  • 适用于细胞水平的高通量筛选


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蛋白-蛋白相互作用

许多重要的生物过程是由蛋白-蛋白相互作用所形成的蛋白质复合物所决定的,比如DNA复制、转录、翻译、剪接、分泌、细胞周期调控、信号转导,以及中间代谢等过程。与其他蛋白质的相互作用也可能会改变蛋白自身的功能和活性。基于对了解疾病相关信号通路的兴趣,研究人员开始研究蛋白质与多种细胞组分进行相互作用的原理,确定蛋白质-蛋白质相互作用是瞬时的还是稳定的则是至关重要的环节.。使用Duolink可以让你对稳定、微弱及瞬时的内源性蛋白质相互作用进行可视化研究。

翻译后修饰

蛋白质间的相互作用往往依赖一种或两种蛋白质的修饰状态。翻译后修饰(post-translational modifications, PTM)是指蛋白质在核糖体中翻译完成之后,在蛋白质合成过程中的共价及酶促修饰过程。涉及到调节功能和结构蛋白质组学研究的翻译后修饰过程包括:磷酸化、糖基化、酰化、硫酸盐化及泛素化。对翻译后修饰进行历史性分析需要用到多种技术,包括:凝胶电泳、质谱、高效液相色谱法和免疫组化。Duolink技术使您能够在固定的细胞和组织中,对内源性修饰过程进行可视化的研究。 了解更多关于翻译后修饰的内容请点击此处。

低丰度蛋白质

在真实的疾病生物学研究中,对天然状态的蛋白质进行研究至关重要。然而,给定样品中的蛋白质浓度会有一个宽动态变化范围。传统的做法是,如果需要在天然状态下对蛋白质进行研究,必需对目的蛋白质进行过表达、标记或遗传修饰。使用Duolink可以让你对单个蛋白质或蛋白质-蛋白质间相互作用的内源表达水平进行检测。

蛋白质定位

蛋白质定位涉及蛋白质在细胞中存在位置的计算预测。在亚细胞水平了解蛋白质的定位,有利于更好地了解蛋白质功能、蛋白质相互作用机制,以及细胞信号转导通路。研究内源蛋白质定位的传统技术经常会出现脱靶结合及与其他蛋白质的交叉反应。Duolink能够利用二抗系统,提高目的蛋白质的识别特异性和灵敏性。

 

 

数字化定量

在定量过程中,可以对细胞和组织的图像进行分析。通过细胞核的自动检测,以及细胞质大小的估算,研究者能够对组织或细胞群中的蛋白质表达水平进行单细胞统计学分析。另外,研究人员还可以自定义研究目的区域——这一特征对组织样品的研究特别适用。来源于奥林巴斯、徕卡、尼康或蔡司品牌显微镜的原始图片(TIFF或JPG格式)可以导入数据分析系统,数据结果可以非常轻松地输出为Microsoft Excel文件,以供进一步分析评估。
 

 

参考文献

  1. Phizicky E. M. and Fields S. (1995) Protein-protein interactions: Methods for detection and analysis. Microbiol Rev. 59, 94-123.
  2. Stadler, Charlotte, et al. (2012) Immunofluorescence and fluorescent-protein tagging show high correlation for protein localization in mammalian cells. Nature. doi:10.1038/nmeth.2377