小鼠胚胎和ES细胞培养

转基因小鼠模型

转基因和基因敲除技术是研究基因功能的强大工具。产生转基因和敲除小鼠的常用方法包括通过囊胚注射或聚集技术将遗传修饰的胚胎干细胞引入早期小鼠胚胎。这些方法会导致产生嵌合体后代,如果ES细胞可分化成生殖细胞系,则遗传修饰可以传递给后代。

Merck提供了培养小鼠胚胎干细胞的广泛工具和技术,包括金标准的ESGRO/mLif 补充物,ESGRO完全细胞培养基和ESGRO2i无血清/无饲养层细胞培养基。我们还提供常用的小鼠胚胎培养基以及用于小鼠胚胎的储存、转移和扩增的EmbryoMAX™ MEF饲养层细胞。

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利用胚胎干细胞制备小鼠模型

 

Generating Mouse models

图1.  获得遗传修饰小鼠的一般步骤。多能ES细胞可自行购买或从小鼠胚泡分离。ES细胞基因组可通过两种方式进行修饰:1)在ES细胞中表达外源基因;2)破坏内源基因的表达。在这两种情况下,靶向载体含有与靶基因同源的序列,以及改变靶标和进行阳性/阴性筛选的序列。将修饰的ES细胞显微注射到胚泡中。新的CRISPR / Cas9基因组编辑系统提供了直接显微注射靶标mRNA和Cas9 mRNA至受精卵的选择。然后将胚泡注射到小鼠中产生嵌合体小鼠。这些小鼠与正常小鼠交配以产生具有所需遗传修饰的小鼠。

 小鼠胚胎干细胞培养

ESGRO® mLIF添加剂

维持多能性 十多年

十多年来,干细胞研究人员相信使用ESGRO®LIF补充物能够维持其小鼠ES细胞系的多能性状态。未分化小鼠ES细胞培养的金标准ESGRO®mLIF有如下特点:

  • 一致的ES细胞分化抑制,获得可靠的效果
  • 方便的包装规格,以活性单位/毫升形式提供
  • 无批间差异,获得更佳的重复性
  • 灵活; 支持无饲养层和基于饲养层的细胞培养
Alkaline Phosphatase staining


碱性磷酸酶染色表明,ESGRO®补充物可抑制mES细胞分化。
  ESGRO mLIF published articles

订购信息
 

货号 产品描述
ESG1106 ESGRO® Leukemia Inhibitory Factor (LIF), 1 million units/1 mL
ESG1107 ESGRO® Leukemia Inhibitory Factor (LIF), 10 million units/1 mL
L5158 Leukemia Inhibitory Factor Protein, Recombinant mouse
L5283 Leukemia Inhibitory Factor Protein, Recombinant human
L9545 Leukemia Inhibitory Factor human, animal component free

无血清和无饲养层培养基

ESGRO Complete™ PLUS培养基

ESGRO Complete™系统是第一个能够无血清、无饲养层培养小鼠ES细胞的系统。该系统的基础是ESGRO Complete™克隆级培养基,通过提供基本营养成分(在传统培养方法中,通常由血清和饲养层细胞提供)支持小鼠ES细胞的自我更新。这些营养成分包括激素、维生素、生长因子mLIF和BMP4,以及选择性GSK3β抑制剂,以在无血清条件下提高小鼠ES细胞生长和活力。

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ESGRO®-2i 培养基

基于使用LIF与GSK3β和Mek 1/2小分子抑制剂建立和维持ES细胞 “多能性基态1-3”状态的原理,ESGRO-2i培养基或补充物专用于维持“初始状态” 或“基态”培养条件,增强ES细胞的活力和易培养性,并可在没有血清和饲养层细胞的情况下增强维持多能性。

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Mouse ES cells grown in ESGRO®-2i medium
在ESGRO®-2i培养基中生长的小鼠ES细胞,表达多能性标记物Oct-4,Sox-2和SSEA1(从左至右)。

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 MEF饲养层细胞

PMEF细胞的EmbryoMax系列为研究人员提供了一种方便的ES细胞培养解决方案,无需进行耗时的MEF饲养层细胞分离和制备。这些细胞来源于第13天的胚胎,经过3次传代(每次传代有2次群体倍增)后冷冻于小瓶中。5瓶装供应,每个小瓶含有约5-6×106个成纤维细胞。
 

Product Description
Treatment Passage Qty/Pk Product No.
EmbryoMax® Primary Mouse Embryo
Fibroblasts Strain CF1
Not Treated

Not Treated

Mitomycin-C Treated

Irradiated
P1

P3

P3

P3
1 vial, 1 x 106 cells ea.

5 vials, 5-6 x 106 cells ea.

5 vials, 5-6 x 106 cells ea.

5 vials, 5-6 x 106 cells ea.
PMEF-CFL-P1

PMEF-CFL

PMEF-CF

PMEF-CFX
EmbryoMax® Primary Mouse Embryo
Fibroblasts Neo Resistant
Not Treated

Not Treated

Mitomycin-C Treated

Irradiated
P1

P3

P3

P3
1 vial, 1 x 106 cells ea.

5 vials, 5-6 x 106 cells ea.

5 vials, 5-6 x 106 cells ea.

5 vials, 5-6 x 106 cells ea.
PMEF-NL-P1

PMEF-NL

PMEF-N

PMEF-NX
EmbryoMax® Primary Mouse Embryo
Fibroblasts Hygro Resistant
Not Treated

Mitomycin-C Treated
P3

P3
5 vials, 5-6 x 106 cells ea.

5 vials, 5-6 x 106 cells ea.
PMEF-HL

PMEF-H

 小鼠胚胎培养基

在胚胎收集、操作和转移应用中,Merck可提供多种小鼠胚胎培养基和试剂,包括M2、改良的M16、FHM和专有的KSOM培养基配方。我们的培养基在小鼠胚胎上进行过测试,并使用最高质量的原料制造。许多经典配方都包含有液体和粉末形式的EmbryoMax培养基。

胚胎发育阶段

胚胎发育阶段

 

热门胚胎培养基

M2  |  M16  |  FHM  |  KSOM  |  HTF  |  Mineral Oil  |  BSA  |  透明质酸酶

 

新产品聚焦

EmbryoMax® 高级KSOM胚胎培养基          

高级KSOM胚胎培养基是原始KSOM配方的新型独特的缓冲液改良版:
  • 一种既可在大气条件下处理胚胎,又可在CO2培养箱中培养胚胎的培养基。
  • 在多个小鼠品系中具有较高的胚泡形成频率
  • 无需进行培养基预平衡步骤
立即订购
  Mouse Embryo Development

 小鼠基因分型

KOD Xtreme™ 热启动DNA聚合酶

用最少的步骤从困难的粗提样品进行DNA扩增

KOD Xtreme™热启动DNA聚合酶是您应对最困难PCR情况的首选,适用于:对来自粗提样品(如小鼠尾尖裂解物)的DNA进行扩增,对可抑制或造成PCR扩增数据偏倚的高GC含量或重复序列(T / A)进行扩增。

特性和优点:

  • 经过优化,可用最少的步骤对复杂的粗提样品成功进行PCR
  • 可高效扩增高达90%GC含量的模板
  • 具有高于Taq混合物十倍的保真度
  • 可扩增长达24kb的基因组靶标
  • 可扩增长达40kb的质粒/噬菌体靶标
  • 可避免引物错配或形成引物二聚体
  • 兼容自动化工作流程的方便的环境温度设置

用最少的步骤扩增来自粗提组织裂解物的DNA,从而节省时间并在保持高质量数据的同时最大限度降低成本。
 

The targeted locus genes   用多种PCR酶从经碱裂解制备的小鼠尾裂解物中扩增靶基因。KOD Xtreme™热启动DNA聚合酶成功扩增了两个靶基因(Tg和WT)。

立即订购KOD Xtreme

 

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