よくいただく質問

• ペプチド合成から抗ペプチドポリクローナル抗体作製までの一貫サービスはありますか？
• 抗ペプチド抗体作製で、シグマアルドリッチ製合成ペプチド以外の抗原を使うことはできますか？
• ウサギ以外の動物を利用できますか？
• ニワトリIgY抗体を作製してもらえますか？
• 免疫期間および延長の有無を教えて下さい。
• ELISAは標準で付きますか？
• MAPs(Multiple Antigenic Peptides) とは何ですか？
• キャリアタンパク質には何がありますか？
• キャリアタンパク質への結合方法には何がありますか？
• 抗体の精製方法には何がありますか？
• 力価が上がらない、あるいは、力価が高いにもかかわらず実サンプルに使用できない場合、どのような対応をしてもらえますか？

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Q1. ペプチド合成から抗ペプチドポリクローナル抗体作製までの一貫サービスはありますか？

A1. はい、ございます。抗原ペプチドの合成から、ウサギ1 or 2羽でのポリクローナル抗体作成までをパッケージ化した「スタンダード抗体作製サービス」をご用意いたしております。免疫計画などをご自分でカスタマイズしたい場合は、「フレキシブル抗体作製サービス」をご利用下さい。

Q2. 抗ペプチド抗体作製で、シグマ製合成ペプチド以外の抗原を使うことはできますか？

A2.　はい、可能です。「フレキシブル抗体作製サービス」をご利用下さい。タンパク質、合成高分子、バクテリア、菌類など、お客様で調製した抗原を使用することができます。また、他社受託メーカー様で製造された合成ペプチドも使用可能です。その場合はメーカー添付の品質データのご提出をお願いいたします。なお、弊社以外でキャリアコンジュゲーションを行ったペプチドはお引き受けできません。

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Q3. ウサギ以外の動物を利用できますか？

A3. はい、ご利用可能です。「フレキシブル抗体作製サービス」をご利用下さい。他にマウス、ニワトリ、ラット、モルモット、ヤギ、などからお選びいただけます。

Q4. ニワトリIgY抗体を作製してもらえますか？

A4. はい、いたします。「フレキシブル抗体作製サービス」をご利用下さい。ニワトリIgY抗体の場合、下記のようなメリットがあります。

1. 哺乳類と系統が離れているので、哺乳類に保存性が高い配列でも、高力価の抗体を産生できる可能性が高い。
2. 卵黄より大量のIgY抗体を採取可能。

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Q5. 免疫期間および延長の有無を教えて下さい。

A5. 免疫期間は「スタンダード抗体作製サービス」では、49日 / 77日、「シンプル抗体作製サービス」では77日となります、延長はできません。「フレキシブル抗体作製サービス」では免疫期間をご自由に設定できます。中間採血時の力価を見て免疫期間を延長することも可能です。延長のご指示は最終採血予定の7日以前までに必要です。免疫スケジュールは宿主動物の健康状態によって中断、または免疫作業のスキップをする場合があります。この場合は、作業報告書においてご報告いたします。

各種サービスの免疫スケジュール

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Q6. ELISAは標準で付きますか？

A6. 「フレキシブル抗体作製サービス」では、標準サービスとなります。中間採血時および最終採血時にELISAを行います。 「スタンダード抗体作製サービス」、「シンプル抗体作製サービス」ではオプションとなります。免疫前コントロール、中間日および最終日に採取した血清を用いて、最終採血後に一括でELISAを行います。

Q7. MAPs (Multiple Antigenic Peptides) とは何ですか？

A7. Lys 7個よりなる骨格に計8個の目的ペプチド(20merまで。21mer以上は、4-branch MAPsになります)を導入します。キャリアタンパク質に結合させる必要がないため、1)高濃度な抗原が得られる、2)キャリアタンパク質に対する抗体ができない　などの長所がある反面、抗体価の上昇が著しく低い場合がある等の欠点もあります。Lysコアに合成されたペプチドには、完全長のもの、合成が途中で止まったものなど様々なものを含みますので、精製は脱塩のみでHPLC精製およびMS分析を行うことはできません。そのため、MAPsでの免疫は、通常お奨めしておりません。したがいまして、弊社抗体作製サービスにおけるELISAでの製品保証の対象外となります。何卒、ご容赦下さい。

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Q8. キャリアタンパク質には何がありますか？

A8. 標準でKLH(Keyhole Limpet Hemocyanin)、あるいは、BSA(Bovine Serum Albumin)からご指定いただけますが、抗原性刺激の強いKLHをお奨めします。ブロッキング試薬にBSAを用いる実験系では、キャリアタンパク質にBSAを選ぶことはできません。また、他のキャリアタンパク質を選択することも可能です。詳しくは、お問い合わせ下さい。

Q9. キャリアタンパク質への結合方法には何がありますか？

A9.標準でMBS法 (m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)およびEDC法（1-ethy-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride）からご指定いただけます。 MBS法ではカップリングにSH基を利用しますので、シーケンス中にCysが含まれていない場合は、N-末端またはC-末端にCys残基を導入します。可能であればＮ-末端側に導入することをお勧めいたします。その理由は、

1. Cys をC-末端にして化学合成する場合、ラセミ化防止のための特殊なレジンを使用しなければならず、コスト高や収量の低下などの問題が生じやすい。
2. N-末端にCys を導入するようにデザインされたペプチドをMBS 法でコンジュゲートすることにより、不完全長のペプチドはキャリアタンパク質と架橋反応が起きない、等によります。

EDC法は、カルボジイミドにより活性化された、ペプチドのC-末端のカルボキシル基がキャリアタンパク質の一級アミンと反応します。ペプチドにAspやGluが含まれていると、これらの側鎖と副反応を引き起しますので、酸性アミノ酸が多く含まれているペプチドにはEDC法は不向きであると言えます。

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Q10. 抗体の精製方法には何がありますか？

A10. 各種精製オプションを取り揃えております。

• 精製後の抗体は、不安定になることがありますので、いずれの方法も一度に全量を精製することはお勧めいたしません。
• 精製後の抗体はBSAなどを安定剤として加えることが有効な場合があります。
• 無償にて硫安塩析による簡易精製も承っております。ご希望の場合は、ご注文時にお申し付けください。また、硫安塩析でのお届けの場合、脱塩カラム(PD-10)を無償で同梱させていただいております。添付のプロトコールに従って脱塩処理を行ってください。なお、フレキシブル　/ スタンダード / シンプルの全てのサービスで、生血清状態でのお届けを標準としています。（防腐剤としてプロクリンを添加）

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Q11. 力価が上がらない、あるいは、力価が高いにもかかわらず実サンプルに使用できない場合、どのような対応をしてもらえますか？

A11.弊社で行っております抗体作製サービスでは、通常高力価の抗血清が得られますが、ごく稀に宿主動物の体調などにより高力価が得られない場合がございます。このような著しく低力価の抗体の場合には製品保証をいたします。保証内容の詳細は下記よりご確認いただけます。
ポリクローナル抗体作製サービスの製品保証
高い力価が得られているにもかかわらず、実サンプルに反応しない場合は、抗原としたペプチドに対する抗体は正しく作製されたが、選択した抗原配列が実サンプルのエピトープと一致していなかったということが考えられます。この場合は、保証の対象外となります。

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