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MISSION esiRNA (endoribonucleaseprepared siRNA)はRNAiスクリーニングにおいて、シンプル、経済的で、確実な方法です。MISSION esiRNA はHuman 16,000以上、Mouse 9,500以上の遺伝子を対象とした製品です。ライブラリー、カスタムライブラリー、個別遺伝子でのご提供です。
製品特長と基本技術
特長
- 経済的なゲノムスケールのRNAiスクリーニングツール：
ゲノムワイドで、手頃な価格
- 個別の効果的なsiRNA を含みます：
迅速な一次スクリーニングが可能、ターゲットを絞り込めます。
- 効率的な遺伝子サイレンシングが可能：
mRNA 発現を70% 以上ノックダウン
- 低いオフターゲット効果：
同じmRNA に対するヘテロジーニアスなsiRNA ミックスです。
また特異的にマルチに作用するようデザインされています。
- 実績ある手法
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基本技術
Figure 1: MISSION esiRNA 製品概要(クリックで拡大)
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esiRNA(Endoribonuclease-prepared siRNAs)は、Escherichia coli RNase III.により、ロングdsRNA(double-stranded RNA)より生成したsiRNAの複合プールです。
PCR産物の生成
in vitro転写反応のテンプレートはRNAポリメラーゼプロモーター配列を含んだ、ターゲットに特異的なプライマーか、ベクターバックボーンに特異的なプライマーを用いたクローンからのcDNAのPCR増幅により生成する。PCR産物は配列検証済みで、増幅領域はDeqor siRNAデザインプログラムに基づいた高効率のsiRNAターゲット配列を含みます。MISSION esiRNAはターゲット遺伝子の様々な転写をカバーするようデザインされています。
In vitro 転写反応とロングdsRNAの作成
cDNAからin vitro 転写反応によってPCR産物を作成します。RNAポリメラーゼでdsRNAを作成し、2つの１本鎖RNAストランドを酵素消化前にアニールします。
酵素消化
ロングdsRNAは酵素消化によりショートdsRNAにします。この消化産物はsiRNAのような分子の複合プールになります。
消化されたdsRNAの精製
消化産物から多くのDNAテンプレート、不要な核酸、40bp以上の長いdsRNAを除去します。この精製により、MISSION esiRNAsは平均長さが21bpとなります。
MISSION esiRNA
MISSION esiRNAはヘテロジーニアスなsiRNAの混合物で、全てのターゲットは同じmRNA配列となります。マルチなRNAサイレンシングにより高いターゲット特異性と効果的なサイレンシングを実現します。
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価格/製品一覧
品質管理
- DEQORプライマーデザインプログラムによる効果的なsiRNA領域を含むcDNA増幅
- 転写されたPCR産物ライブラリーはゲル電気泳動とDNAシーケンシングによりテスト済み
- RNase III消化物(esiRNA)はQ-セファロースによるカラム精製、イソプロパノール沈殿、エタノール洗浄で精製済み。
- 精製産物はゲル電気泳動にて試験済み。
- OD260もしくは蛍光強度により濃度試験済み
基本仕様
- 溶液 ： nuclease-free TE buffer solution
- Humanターゲット ： 15,324遺伝子、16,121 esiRNAs
Mouseターゲット ： 8,607遺伝子、9,558 esiRNAs
- トランスフェクションに効果的な濃度は通常1-50nM
- ノックダウン効果は通常、24 時間程でご確認頂けます。
- 12回の再融解、再冷凍サイクル試験において、安定性を確認。
- 試験成績証明書（Certificate of Analysis） / テクニカルデータシート添付。（ライブラリー、プレートサービスにはCD-ROM添付）。
- 温度 ： 出荷時；冷凍（ドライアイス）、保管時；-20℃で2年安定試験済み。
- 個別esiRNAの予定納期は約1ヶ月。
製品一覧
製品の検索は、YFG検索エンジンで出来ます。ご興味ある遺伝子名、シンボル、RefSeqナンバーなどで検索してください。
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個別 |
カスタムプレート |
全ゲノムライブラリー |
esiFlex |
| 容量 |
20 µg (2 nmol) |
20 µg (2 nmol) |
1 µg (0.1 nmol) |
1 µg (0.1 nmol) |
| 50 µg (5 nmol) |
50 µg (5 nmol) |
2.5 µg (0.25 nmol) |
2.5 µg (0.25 nmol) |
| パッキング |
2 mL tube |
96-well plate |
384-well plate |
96-well plate |
| 濃度 |
200 ng/μL |
200 ng/μL |
50 ng/μL |
50 ng/μL |
| ご注文方法 |
型番にて通常注文 |
メールにてお問合せください。(E-mail：sialjpls@sial.com ) |
- カスタムプレート、esiFlexサービスは100遺伝子以上、5000遺伝子までのご注文より承ります。
- Well Plateは、左端のレーン、とD3, D4, D21, D22, M5, M6, M18, M19はブランクとなります。
個別esiRNA価格表
| Product Name |
CAT.NO. |
| Human 16112 種 |
EHUXXXXXX |
| Mouse 9527 種 |
EMUXXXXXX
（X は数字） |
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| Size |
価格(¥) |
| 20 µg |
¥28,000 |
| 50 µg |
¥50,000 |
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コントロール
- ネガティブコントロール ： RLUC, FLUC, eGFP をターゲットとしたesiRNA をご利用ください。
- ポジティブコントロール ： eg5 (KIF11) をターゲットとしたesiRNA をご利用ください。（有糸分裂での強発現/細胞生存に関わるフェノタイプ）
- eGFP をターゲットとしたesiRNA を発現確認用としてご利用頂く事も可能です。
- Validated human MISSION esiRNAのLAMIN A, PLK4, AURKBをポジティブコントロール、トランスフェクション最適化のコントロールとしていただく事も可能です。
バリデート済みの製品
下記リストはバリデート済みの製品の一部をリスト化しています。随時、バリデート終了次第、製品リストに追記されていきます。 詳細はYFG検索の結果をご参照ください。
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References
MISSION esiRNA — Proven RNAi Screening Tool
- Slabicki M., et al. (2010) A Genome-Scale DNA Repair RNAi Screen Identifies SPG48 as a Novel Gene Associated with Hereditary Spastic Paraplegia. PLoS Biol 8(6): e1000408. doi:10.1371/journal.pbio.1000408. Paper (2.22 Mb PDF)
- Collinet, et al. Systems survey of endocytosis by multiparametric image analysis. Nature 464, 243-249 (2010). Abstract
- Theis, M. et al. Comparative profiling identifies C13orf3 as a component of the Ska complex required for mammalian cell division. EMBO J. 28, 1453-65 (2009). Abstract
- Ding, L. et al. A Genome-Scale RNAi Screen for Oct4 Modulators Defines a Role of the Paf1 Complex for Embryonic Stem Cell Identity. Cell Stem Cell. 9, 403-15 (2009). Abstract
- Kittler, R. et al. Genome-scale RNAi profiling of cell division in human tissue culture cells. Nat. Cell Biol. 9, 1401-12 (2007). Abstract
- Kittler, R. et al. An endoribonuclease-prepared siRNA screen in human cells identifies genes essential for cell division. Nature 432, 1036-40 (2004). Abstract
Additional esiRNA Literature References
- Stewart, G. S. et al. The RIDDLE syndrome protein mediates a ubiquitin-dependent signaling cascade at sites of DNA damage. Cell 136, 420-34 (2009). Abstract
- Lawo, S. et al. HAUS, the 8-Subunit Human Augmin Complex, Regulates Centrosome and Spindle Integrity. Curr Biol., 19, 816-26 (2009). Abstract
- Fazzio, T. G. et al. An RNAi screen of chromatin proteins identifies Tip60-p400 as a regulator of embryonic stem cell identity. Cell 2008 134, 162-74 (2008). Abstract
- Konstantinova, I. et al. EphA-Ephrin-A-mediated beta cell communication regulates insulin secretion from pancreatic islets. Cell 129, 359-70 (2007). Abstract
- Nikolova, G. et al. The vascular basement membrane: a niche for insulin gene expression and Beta cell proliferation. Dev Cell. 10, 397-405 (2006). Abstract
- Kittler, R. et. al. RNA interference rescue by bacterial artificial chromosome transgenesis in mammalian tissue culture cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 2396-401 (2005). Abstract
- Liu, W. Y. et al. Efficient RNA interference in zebrafish embryos using synthesized with SP6 RNA polymerase. Dev. Growth Differ. 47(5), 323-31 (2005). Abstract
- Yang, D. et al. Short RNA duplexes produced by hydrolysis with Escherichia coli RNase III mediate effective RNA interference in mammalian cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 9942-7 (2002). Abstract
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シグマ アルドリッチ ジャパン株式会社
ライフサイエンス事業部
〒140-0002 東京都品川区東品川2-2-24 天王洲セントラルタワー4F
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TEL：03-5796-7330 ／ FAX：03-5796-7335 ／ E-mail：sialjpts@sial.com
■ 在庫紹介・ご注文方法に関するお問合せは、弊社カスタマーサービスへ
TEL：03-5796-7320 ／ FAX：03-5796-7325
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