Restriction Enzyme Double Digest Buffer Guide

Sigma Life Science’s restriction enzyme collection has been optimized for digestion using five unique buffers. When using two restriction enzymes at once, first check the enzyme activities in each buffer, using table on of the Restriction Enzyme Buffer Reference. If they both have 100% activity in the same buffer, you can proceed with your double digestion protocol.

Alternatively, optimal buffer can be determined from the chart below of common double digestions. In some cases, sequential digestion is recommended due to buffer incompatibility.

  BamHI (R0260) Bgl II (R6377) Bln I (R3131) Cla I (R7763) Dpn I (R8381) Eco RI (R6265) Eco RV (R2756) Hind III (R1137) Kpn I (R1258) Nco I (R8761) Nde I (R5509) Nhe I (R5634) Not I (R8506) Pst I (R7023) Pvu I (R1508) Pvu II (R2631) Sac I (R5268) Sal I (R0754) Sfi I (R8256) Sma I (R4503) Spe I (R5257) Sph I (R7135) Xba I (R7260) Xho I (R6759)
BamHI (R0260)
Bgl II (R6377) SM
Bln I (R3131) SB SH
Cla I (R7763) SB SH SH
Dpn I (R8381) SA SA SH SA
Eco RI (R6265) SA SH SH SH SA
Eco RV (R2756) SB SB SH SB SB SB
Hind III (R1137) SB SB SH SB SB SB SB
Kpn I (R1258) SL SA SEQ SA SA SA SEQ SA
Nco I (R8761) SB SH SH SH SH SH SH SH SL
Nde I (R5509) SB SH SH SH SH SH SH SB SEQ SH
Nhe I (R5634) SM SA SA SM SA SA SM SM SL SL SM
Not I (R8506) SB SH SH SH SH SH SH SH SEQ SH SH SEQ
Pst I (R7023) SH SH SH SH SH SH SH SH SEQ SH SH SM SH
Pvu I (R1508) SB SH SH SH SH SH SB SB SL SH SH SA SH SH  
Pvu II (R2631) SM SM SH SM SM SM SM SM SM SM SM SM SH SM SM
Sac I (R5268) SA SA SA SA SA SA SA SA SL SA SM SL SEQ SA SA SM
Sal I (R0754) SH SH SH SH SH SH SH SH SEQ SH SH SEQ SH SH SH SH SEQ
Sfi I (R8256) SM SM SM SM SM SM SM SM SL SM SM SM SM SM SM SM SL SH
Sma I (R4503) SA SA SA SA SA SA SA SA SA SA SA SA SEQ SA SA SA SA SEQ SA
Spe I (R5257) SM SH SH SH SH SH SH SM SL SH SH SM SH SH SH SM SA SH SM SA
Sph I (R7135) SM SM SH SM SM SM SB SM SA SH SH SM SH SH SH SM SM SH SM SA SM
Xba I (R7260) SA SH SH SH SA SH SB SB SA SH SH SA SH SH SH SM SA SH SM SA SH SM
Xho I (R6759) SB SH SH SH SH SH SB SM SL SH SH SM SH SH SH SH SA SH SM SA SH SH SH

 

Key:
SA Buffer SA B7531
SB Buffer SB B7881
SL Buffer SL B3782
SM Buffer SM B3158
SH Buffer SH B3657
SEQ Sequential digestion recommended