Pyrogenprüfung
Die Prüfung auf Pyrogene ist ein entscheidender Schritt zur Gewährleistung der Sicherheit von parenteral verabreichten Medizinprodukten wie Arzneimitteln oder Biopharmazeutika. Sie ist Teil der vorgeschriebenen Freigabetests, um lebensbedrohliche Fieberreaktionen zu vermeiden, die durch pyrogene Substanzen ausgelöst werden. Der Monozyten-Aktivierungstest (MAT) kann sowohl Endotoxin- als auch Nicht-Endotoxin-Pyrogene in einem einzigen In-vitro-Test nachweisen.
Seit Juli 2025 ist der MAT gemäß dem Europäischen Arzneibuch die Methode der Wahl für den Nachweis von Endotoxinen und Nicht-Endotoxin-Pyrogenen und ersetzt damit den Kaninchen-Pyrogentest (RPT).
Monozyten-Aktivierungstest (MAT)
Der MAT dient zum Nachweis sowohl von Endotoxinen als auch von Nicht-Endotoxin-Pyrogenen in parenteralen Produkten wie Arzneimitteln und Biopharmazeutika und bietet gemäß den behördlichen Richtlinien eine In-vitro-Alternative zu herkömmlichen Tierversuchen.
Der Kaninchen-Pyrogen-Test und der Limulus-Amöbozyten-Lysat-Test (LAL-Test) werden häufig zum Nachweis von Pyrogenen eingesetzt. Beide Methoden erfordern den Einsatz von Tieren und weisen gewisse Einschränkungen auf. Der Kaninchen-Pyrogen-Test ist nicht ausreichend robust, da die Reaktion bei Tieren stark von der beim Menschen abweichen kann. Beim LAL-Test werden nur Endotoxine nachgewiesen, was ein Sicherheitsrisiko darstellt, da nicht-endotoxine Pyrogene, die in der getesteten Probe vorhanden sein könnten, unberücksichtigt bleiben.
Um diese Einschränkungen zu überwinden, wurde der Monozyten-Aktivierungstest (MAT) im Jahr 2010 als kompendiale Methode in das Europäische Arzneibuch aufgenommen, um den Kaninchen-Pyrogentest zu ersetzen (EP Kapitel 2.6.30), und in den FDA-Leitlinien für die Industrie erwähnt.
Bitte beachten Sie: Die Kommission des Europäischen Arzneibuchs hat beschlossen, den Kaninchen-Pyrogentest gemäß dem 3R-Prinzip einzustellen, da der MAT als beste Alternative angesehen wird. Ab Juli 2025 ist der Kaninchen-Pyrogentest (RPT) in Europa verboten, und das allgemeine Kapitel 2.6.8 über den Kaninchen-Pyrogentest wurde gestrichen.
PyroMAT®-In-vitro-Test zum Nachweis von Endotoxinen und nicht-endotoxischen Pyrogenen
Das PyroMAT®-System basiert auf der Mono-Mac-6-Zelllinie und der IL-6-Messung. Es bietet alle Vorteile des Monozyten-Aktivierungstests in Kombination mit den Vorteilen der Verwendung einer Zelllinie.
- Nachweis eines breiten Spektrums an Pyrogenen: Die Patientensicherheit ist gewährleistet, wenn das gesamte Spektrum an Pyrogenen getestet wird. Wie der Kaninchen-Pyrogentest (RPT) ist auch der MAT sowohl für den Nachweis von Endotoxin- als auch von Nicht-Endotoxin-Pyrogenen geeignet.
- Erweiterung des Spektrums der testbaren Produkte: Die am häufigsten angewandten Methoden – RPT, Bakterieller Endotoxintest (BET) oder LAL – sind hinsichtlich der Produkttypen, die sie testen können, eingeschränkt. Der MAT bietet mehr Flexibilität hinsichtlich seiner Anwendungsmöglichkeiten.
- In-vitro-Assay, der die menschliche Immunreaktion nachahmt: für ein robustes Vorhersagemodell, das den Tierverbrauch reduziert.
- Einhaltung internationaler Vorschriften und Richtlinien: im Einklang mit den ethischen Tendenzen der Industrie und der Aufsichtsbehörden, den Einsatz von Tierversuchen zu reduzieren.
- Standardisierte Reaktivität und hohe Sensitivität (0,05 EU/ml). Die einfache Handhabung einer gebrauchsfertigen Zelllinie reduziert den Arbeitsaufwand im Labor und macht ein Zellkulturlabor überflüssig.
- Qualifizierte Zellen: Die Mono-Mac-6-Zellen werden nicht nur in der internationalen Validierung von MAT zitiert, sondern sind auch für die Expression aller oberflächlichen Toll-Like-Rezeptoren (TLRs) qualifiziert, um den Nachweis eines breiten Spektrums an Pyrogenen zu gewährleisten.
Endotoxin-freie Pyrogen-Positivkontrollen
Europäisches Arzneibuch, Kapitel 2.6.30 (Monozyten-Aktivierungstest): „Die Vorversuche müssen die Validierung des Testsystems unter Verwendung von mindestens zwei Nicht-Endotoxin-Liganden für Toll-like-Rezeptoren umfassen, z. B. Peptidoglykane, Lipoteichosäuren, synthetische bakterielle Lipoproteine, Flagellin und rohen bakteriellen Ganzzellextrakt, von denen mindestens einer der zu untersuchenden Zubereitung zugesetzt werden muss. Die Auswahl der verwendeten endotoxinfreien Pyrogene sollte die wahrscheinlichsten Kontaminanten der zu untersuchenden Zubereitung widerspiegeln.
Um dieser Anforderung gerecht zu werden, bieten wir ein erweitertes Sortiment an Positivkontrollen an:
- Diese spiegeln verschiedene Arten von Kontaminanten wider, die üblicherweise in pharmazeutischen Produktionsprozessen vorkommen (gramnegative und grampositive Bakterien, Viren und Mykoplasmen).
- die auf mehrere monozytäre Toll-like-Rezeptoren (TLR) abzielen
Ligand | Ziel-TLR | Art der nachgewiesenen Verunreinigung |
|---|---|---|
HKSA | TLR2 | Grampositive Bakterien |
Flagellin | TLR5 | Grampositive und gramnegative Bakterien |
PAM3CSK4 | TLR2/1 | Grampositive und gramnegative Bakterien |
Resiquimod | TLR7/8 | Virus |
FSL1 | TLR2/6 | Mycoplasma |
Vergleich von Pyrogentests an Kaninchen, LAL- und MAT-Tests | ||||
|---|---|---|---|---|
| Kaninchen | LAL | MAT (PyroMAT®-System) | ||
| Testart | In vivo | Ex-vivo | In vitro (monozytäre Zelllinie) | |
| Verzehr durch Tiere | ++ | + | - | |
| Nachweis von Kontaminanten | Endotoxine, z. B. LPS aus gramnegativen Bakterien | + | + | + |
| Grampositiv (LTA) | + | - | + | |
| Hefen und Schimmelpilze | + | - | + | |
| Viren | +/- | - | + | |
| Anwendung | Arzneimittel | + | + | + |
| Biologika | + | +/- | + | |
| Zelltherapeutika | - | +/- | + | |
Wir unterstützen Sie beim Übergang von Tierversuchen zu In-vitro-Tests
Machbarkeitsstudien, Methodenentwicklung, Validierung und Schulungen zur Unterstützung Ihrer Einführung von Pyrogen-Tests – sprechen Sie mit unseren Experten für Pyrogen-Tests.
Weiterführende Ressourcen
- Broschüre: PyroMAT®-System
Das MAT-Verfahren dient zum Nachweis einer breiten Palette von Pyrogenen in parenteralen Produkten wie Arzneimitteln, Biopharmazeutika oder Medizinprodukten und bietet gemäß den behördlichen Richtlinien eine In-vitro-Alternative zu herkömmlichen Tierversuchen.
- Datenblatt: Endotoxin- und pyrogenfreie Positivkontrollen
Erfüllen Sie die behördlichen Anforderungen für den Monozyten-Aktivierungstest (MAT) mit unseren endotoxinfreien Pyrogen-Kontrollen, die speziell für das PyroMAT®-System entwickelt wurden.
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