Molekulare Klonierung und Proteinexpression

Das Ziel der molekularen Klonierung ist es, das Zielgen (GOI) in einen Plasmidvektor einzufügen, ein ringförmiges DNA-Molekül, das verschiedene Elemente enthält, um die Klonierung, die Klonauswahl und die Proteinexpression zu erleichtern. Forscher verwenden häufig DNA-Restriktionsenzyme und Ligase, um das GOI in-frame in den Expressionsvektor einzufügen, damit anschließend die Proteinexpression erfolgen kann. Dieser Vektor wird dann in eine Zelle eingeführt, die das vom GOI kodierte Protein exprimiert, oder die Proteinexpression wird mithilfe von zellfreien Proteinsynthesesystemen durchgeführt.
Sobald das Protein exprimiert ist, kann seine Funktion untersucht werden, da es die Zellsignalisierung, die Morphologie oder andere Aspekte innerhalb der Zelle beeinflusst. Alternativ kann das Protein in großen Mengen exprimiert, gereinigt und in zahlreichen nachgelagerten Anwendungen verwendet werden. Weitere Informationen finden Sie in unserem umfassenden Angebot an zuverlässigen Reagenzien und Ressourcen, die für den gesamten Klonierungs- und Expressions-Workflow für Proteinexpressionssysteme von Insekten, Bakterien und Säugetieren verfügbar sind.
Produkte
RNA- und DNA-modifizierende Enzyme
Bei der molekularen Klonierung verwenden Forscher häufig Restriktionsenzyme zum Schneiden von DNA sowie andere Enzyme wie RNA- und DNA-modifizierende Enzyme, um chemische Gruppen an Nukleinsäuren hinzuzufügen, zu entfernen oder zu verändern. Um den vielfältigen Forschungsanforderungen gerecht zu werden, bieten wir ein umfassendes Sortiment dieser essenziellen Enzyme an, darunter alkalische Phosphatase, Protease, T7-RNA-Polymerase, Pyrophosphatase, Ribonuklease A und T4-DNA-Ligase. Unsere Reagenzien sorgen in Kombination mit speziell formulierten Puffern für hohe Effizienz und Zuverlässigkeit bei der DNA- und RNA-Manipulation.
Novagen® pET-System, Simplicon®-Vektoren und UCOE®-Proteinexpressionssysteme
Unsere E. coli-, Insekten- und Säugetier-Expressionsvektoren vereinfachen die Selektion positiver Transformanten. Zu den herausragenden Produkten gehören:
- Das Novagen® pET-System gilt als Standard für das Klonieren und die Expression rekombinanter Proteine in bakteriellen Systemen.
- Das Simplicon® In-vivo-Proteinexpressionssystem bietet ein nicht-genomintegrierendes, anpassbares und synthetisches, sich selbst replizierendes RNA-basiertes Expressionssystem. Die Simplicon®-Expression erzeugt eine sofortige, hochgradig anhaltende Proteinexpression mehrerer Gene in transfizierten menschlichen Zellen ohne das Risiko einer Genomintegration.
- Die UCOE®-Expressionsvektor-Technologie (Ubiquitous Chromatin Opening Element) erzielt in weniger als 30 Tagen Gramm-Mengen an Protein in stabil transfizierten Säugetierzellen. Die UCOE®-Expressionstechnologie verhindert das Silencing von Transgenen und sorgt für eine konsistentere, stabilere und höhere Genexpression (bis zu 20-fach) als herkömmliche Vektoren, unabhängig vom Ort der chromosomalen Integration.
Reagenzien für die Transformation von Bakterien und Hefen
Bei der bakteriellen Transformation wird fremde DNA mithilfe von Methoden wie Hitzeschock und Elektroporation in Bakterien eingeführt. Unser Portfolio an kompetenten Zellen ist für eine optimale Plasmid- und Proteinexpression ausgelegt, selbst unter anspruchsvollen Versuchsbedingungen. Zu den Highlights gehören:
- NovaBlue®-kompetente Zellen sind auf Effizienz und Plasmidkonservierung optimiert und ermöglichen so eine hervorragende Bibliothekspräparation und Plasmidstabilität.
- Die Systeme Rosetta™, Origami™ und Overnight Express™ verbessern die korrekte Proteinfaltung und erhöhen die Löslichkeit oder Expression zytotoxischer Proteine.
Für die Hefetransformation bieten wir einfache Protokolle und skalierbare Produkte, die sich nahtlos in Protein-Expressions-Workflows integrieren lassen.
Für die Forschung an Säugetierzellen finden Sie weitere Optionen auf unserer Seite zur Transfektion.
Plasmidvektoren von BCCM/GeneCorner
Entdecken Sie unser erweitertes Angebot an Plasmidvektoren von BCCM/GeneCorner – einer einzigartigen, ISO-zertifizierten Plasmidbank, die vom Institut für Biomedizinische Molekularbiologie der Fakultät für Naturwissenschaften der Universität Gent (UGent) betrieben wird. Diese vielfältige Sammlung umfasst eine Vielzahl von Klonierungs- und rekombinanten Proteinexpressionsplasmiden in einer Reihe von Wirtsorganismen und unterstützt damit die moderne Forschung in der Molekular- und Proteinbiologie.
Jeder Produktverkauf unterliegt den Allgemeinen Geschäftsbedingungen von Sigma-Aldrich für den Verkauf an Endverbraucher, die Produkte von Drittanbietern erwerben, sowie allen gesetzlichen, behördlichen oder sonstigen gesetzlich auferlegten Beschränkungen.
- Sie dürfen die Produkte nur auf rechtmäßige Weise für Forschungs-, Lehr- oder Qualitätskontrollzwecke verwenden. Jede kommerzielle Nutzung der Produkte bedarf der vorherigen schriftlichen Genehmigung des Anbieters und kann einer schriftlichen Vereinbarung unterliegen. Eine solche Genehmigung wird nicht ohne triftigen Grund verweigert. Unter kommerzieller Nutzung versteht man die Nutzung der Produkte zu Gewinnzwecken (wie z. B. den Weiterverkauf, die Vermietung, den Tausch, die Lizenzierung oder sonstige Übertragung der Produkte zu Gewinnzwecken sowie jede Nutzung der Produkte zur Erbringung von Dienstleistungen zu Gewinnzwecken).
- Sie versichern und garantieren, dass der Kauf der Produkte ausschließlich für den Eigengebrauch erfolgt. Jeder Kauf für andere Zwecke (wie z. B. der Kauf der Produkte als Zwischenhändler) bedarf der vorherigen schriftlichen Genehmigung des Anbieters.
- Sie erklären sich damit einverstanden, den Anbieter in allen Veröffentlichungen als Verkäufer der Produkte sowie die auf das Produkt bezogene Katalognummer des Anbieters anzugeben.
Weiterführende Ressourcen
- Brochure: Molecular Essentials Guide
Learn how our comprehensive molecular tools and reagents provide precise, ready-to-use solutions for your workflows.
- Article: Cell-Free Protein Synthesis or Expression
Cell-free protein synthesis rapidly produces recombinant proteins without cells, utilizing translation machinery from different cell types for efficiency.
- Article: Competent Cell Selection & E. coli Markers Guide
Select competent cells by application, transformation efficiency, and genotype. We also present a list of E. coli markers for reference.
- Article: Simplicon™ in vivo Protein Expression System
Simplicon: A non-genome integrating, tunable and sustained protein expression system in human cells, based on a single, polycistronic, and self-replicating synthetic RNA.
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