Cromatografia líquida de baixa pressão

Cromatografia de adsorção

Também conhecida como cromatografia líquido-sólido, a cromatografia de adsorção retém substâncias químicas por meio da adsorção e dessorção na superfície do suporte, fase estacionária. O adsorvente forma a fase estacionária, e o soluto se liga a ele por forças de van der Waal e interações estéricas. Como os locais de adsorção geralmente estão na superfície externa da fase estacionária, partículas relativamente pequenas são usadas como fase estacionária. Sílica, alumina, carvão vegetal, Florisil, poliamidas, celite e terra diatomácea são os adsorventes comumente usados.

Cromatografia de partição

A cromatografia de partição separa os componentes distribuindo-os entre dois líquidos imiscíveis. Um deles é a fase móvel líquida, enquanto o outro é o líquido mantido estacionário em um suporte sólido. Os materiais usados como suporte sólido incluem sílica gel, terra diatomácea, celulose, politetrafluoroetileno (PTFE) e poliestireno. O suporte sólido inerte fornece uma grande área de superfície para a fase estacionária líquida.

Cromatografia de afinidade

A cromatografia de afinidade separa os constituintes por interações seletivas e reversíveis, como pares de anticorpo-antígeno, enzima-substrato ou hormônio-receptor, com um dos agentes interativos como fase estacionária. O “ligante de afinidade” é a espécie interativa imobilizada em suporte sólido, como esferas acrílicas, agarose e resinas Toyopearl, e serve como fase estacionária para a coluna de afinidade.

Cromatografia de Filtração em Gel

Também conhecida como cromatografia de exclusão por tamanho, ela separa moléculas de tamanhos diferentes, como proteínas de tamanhos variados e formas oligoméricas. A fase estacionária é uma resina composta por uma matriz reticulada de esferas contendo poros de um tamanho específico. As colunas de filtração em gel contêm esferas de poliacrilamida, agarose, dextrano ou uma mistura de qualquer um desses. Ela isola analitos menores, fornecendo acesso parcial ou total ao volume dos poros dentro das partículas de enchimento da coluna.

Cromatografia de interação hidrofóbica (HIC)

A cromatografia de interação hidrofóbica (HIC) separa biomoléculas com base nas diferenças em sua hidrofobicidade superficial. Ela se baseia na interação de grupos hidrofóbicos não polares ligados à resina da coluna, como butil, octil ou fenil, com os grupos hidrofóbicos nas biomoléculas. É amplamente utilizada para separar proteínas, preservando sua atividade biológica, uma vez que utiliza condições e matrizes menos desnaturantes.

Cromatografia de troca iônica (IEX)

A cromatografia de troca iônica separa moléculas com base nas diferenças em suas cargas superficiais líquidas. A superfície da matriz, como celulose, sílica ou estireno-divinilbenzeno, é ligada covalentemente a grupos funcionais carregados. Os grupos de troca iônica imobilizados na resina interagem com moléculas que têm cargas opostas. Na cromatografia de troca catiônica, as espécies carregadas positivamente na fase móvel se ligam a uma resina de troca iônica carregada negativamente. Na cromatografia de troca aniônica, as espécies carregadas negativamente na fase móvel se ligam às cargas positivas na resina de troca iônica.

Sistema de cromatografia líquida de baixa pressão

Um sistema de cromatografia líquida de baixa pressão (LPLC) consiste normalmente numa coluna preenchida com uma fase estacionária para separação, uma bomba para fornecer a fase móvel através da coluna a caudais controlados e um detetor para medir o eluente à medida que sai da coluna.
Os sistemas LPLC também possuem um sistema de injeção para introduzir a amostra no fluxo da fase móvel, garantindo uma introdução precisa e reproduzível da amostra. Algumas configurações incluem um coletor de frações para reunir os componentes separados para análise posterior.