Merck

Cromatografia líquida de baixa pressão

Colunas empacotadas de LPLC com diferentes meios para a aplicação cromatográfica específica.

Sistemas de cromatografia líquida de baixa pressão (LPLC) forçam a fase móvel através da coluna sob baixa pressão. LPLC foi realizada em colunas abertas usando a gravidade para “bombear” o solvente através da coluna. Este tipo de LPLC é conhecido como "cromatografia líquida de coluna aberta". Hoje em dia, a LPLC é realizada tipicamente com instrumentos acionados por bomba.

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A LPLC é uma técnica altamente seletiva usada sobretudo no estudo de biomoléculas, como proteínas, peptídeos e anticorpos monoclonais. A LPLC é principalmente uma técnica preparativa e não destrutiva, o que a torna ideal para separação de biomoléculas e purificação de proteínas recombinantes marcadas. A LPLC também é usada para purificar insumos farmacêuticos ativos, remover pesticidas de amostras e purificar moléculas pequenas.

Instrumentação para LPLC

A LPLC é um sistema composto por uma coluna, bomba de baixa pressão (geralmente peristáltica), injetor, detector e coletor de fração. A bomba cilíndrica peristáltica simples remove a fase móvel do reservatório a uma taxa de vazão fixa e a transfere para a coluna.

O solvente (fase móvel), em seguida, passa por um injetor contendo a amostra para levá-la à coluna para separação. Os componentes da amostra são separados à medida que atravessam a coluna e atingem o detector com velocidades diferentes. Um detector de UV-Vis ou de índice de refração (IR) em linha monitora o efluente da coluna, permitindo que amostras sejam coletadas usando um coletor de fração. As amostras coletadas são organizadas por tempo de eluição.

Adsorventes e instrumentos de LPLC

O material de matriz da coluna deve ter uma boa estabilidade mecânica e química, deve conter grupos funcionais para facilitar a ligação ao analito e ser inerte. Os materiais dos instrumentos da coluna geralmente são feitos de vidro e materiais plásticos inertes, dependendo do solvente usado.


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