Preparação do meio

Preparação de meios de
cultura

Os meios de cultura comerciais são fornecidos na forma desidratada ou em pó, como concentrado líquido ou como soluções de trabalho. Os meios desidratados para culturas em caldo devem ser preparados por dissolução em água destilada e ajuste do pH final antes da esterilização. Os meios em pó para culturas em ágar devem ser dissolvidos em água destilada, agitados e, em seguida, fervidos ou submetidos à autoclave antes de serem vertidos em placas de Petri estéreis, utilizando técnicas assépticas. Os meios de cultura fornecidos como concentrados líquidos devem ser diluídos assepticamente em água destilada, ter seu pH ajustado e ser transferidos para recipientes estéreis para armazenamento. Os meios de cultura fornecidos como soluções de trabalho estão prontos para uso após a adição de qualquer soro ou outros suplementos necessários, sob filtração estéril e/ou condições assépticas, e aquecimento até a temperatura adequada para o crescimento celular.

Esterilização de meios de
cultura

Os meios de cultura preparados a partir de pós devem ser esterilizados por filtração, aquecimento ou autoclavagem antes do uso. Embora os meios líquidos sejam frequentemente fornecidos estéreis e na concentração pronta para uso, recomenda-se a filtração estéril, especialmente se for necessário adicionar soros ou outros suplementos antes do uso. Após a esterilização, devem ser utilizadas técnicas assépticas ao manusear os meios de cultura para evitar a contaminação cruzada ou o crescimento de microrganismos indesejados.

Suplementos para meios de cultura

Certos suplementos necessários para o cultivo ou a regulação celular são instáveis ou termolábeis; portanto, devem ser adicionados pelo usuário ao meio de cultura basal esterilizado por calor antes do uso. O soro, normalmente derivado de fontes bovinas (FBS), é um suplemento comum utilizado em meios de cultura de células animais. Hormônios, fatores de crescimento e moléculas de sinalização específicas podem ser necessários para o crescimento de certos tipos de células. Aditivos como o IPTG são utilizados para induzir a expressão de proteínas. Antibióticos também podem ser adicionados aos meios de cultura para controlar o crescimento de contaminantes bacterianos e fúngicos, embora a contaminação possa ser bem controlada com o manuseio e armazenamento adequados dos meios.

Armazenamento e uso de meios de
cultura

Meios de cultura comerciais e preparados na forma líquida, em ágar derramado ou como soluções de trabalho são normalmente armazenados a 4 °C no escuro para suprimir o crescimento de microrganismos oportunistas e para evitar a degradação dos componentes dos meios de cultura induzida pela luz. Antes da inoculação com culturas, os meios devem ser aquecidos até uma temperatura adequada para o crescimento celular.