Solução de problemas em cultura celular

Identificação incorreta de linhagens celulares

Estudos recentes estimam que a identificação incorreta possa afetar até um terço de todas as linhagens celulares em uso. Essas descobertas têm o potencial de colocar em dúvida os resultados publicados sobre sistemas biológicos baseados em modelos de linhagens celulares. Os fatores que levam à identificação incorreta ou contaminação cruzada de linhagens celulares incluem:

• Contaminação por linhagens celulares agressivas: A análise de isoenzimas demonstrou que muitas linhagens celulares compartilham uma isoforma enzimática rara com as células HeLa. Desde então, ficou comprovado que a HeLa é a linhagem celular invasiva mais comum em estoques de cultura.
• Práticas de documentação e rotulagem: frascos de cultura celular, placas, criotubos e compartimentos de congeladores devem ser claramente rotulados, e os registros de armazenamento em nitrogênio líquido devem ser rigorosamente mantidos para refletir a adição, retirada e realocação de estoques celulares.
• Empréstimo de linhagens celulares: o compartilhamento de células entre laboratórios vizinhos é uma prática comum que leva a erros na identificação das linhagens celulares. As linhagens celulares devem ser obtidas apenas de bancos de células confiáveis, como a ECACC (Coleção Europeia de Culturas Celulares Autenticadas) da Public Health England.

Informe-se sobre as causas comuns de contaminação cruzada de linhagens celulares e sobre como proteger seu trabalho contra suas consequências.

Contaminação microbiana de culturas celulares

Os meios de cultura celular e as condições de incubação proporcionam o ambiente ideal para as células, bem como para contaminantes bacterianos, fúngicos e virais. Para garantir o cumprimento rigoroso das técnicas de cultura asséptica, as culturas devem ser examinadas regularmente ao microscópio em busca de indícios de intrusos bacterianos e fúngicos. Alguns contaminantes microbianos onipresentes escapam à detecção visual; estima-se que até 30% de todas as culturas estejam contaminadas com micoplasma. Reagentes e kits projetados para a detecção de micoplasmas invisíveis geralmente se baseiam na amplificação por PCR, que também pode ser usada para detectar contaminantes virais.

Saiba como manter suas culturas livres de contaminantes biológicos e químicos.

Crescimento celular insuficiente

É frustrante quando células em cultura, que de outra forma parecem saudáveis, não conseguem atingir a confluência. Quando se descarta a presença de contaminantes, algumas possíveis barreiras à duplicação celular saudável incluem:

• Condições e qualidade dos meios de cultura/congelamento
• Qualidade e adequação dos suplementos à aplicação
• Contagem imprecisa de células durante o congelamento ou a passagem

Quando as células parecem viáveis, mas não conseguem se expandir, descubra o que você pode fazer para melhorar as condições de cultura e obter um crescimento ideal antes de voltar ao nitrogênio líquido.

Descolamento de fenótipos de células aderentes

As células aderentes podem se desprendê-las espontaneamente em cultura, individualmente ou em camadas. Quando as culturas aderentes não permanecem assim, saiba o que verificar e como restaurar a coesão na cultura.

Agregamento celular

As células em suspensão simulam as condições in vivo, apresentando-se isoladas. Quando as células começam a se aglomerar, isso pode ser causado por ácidos nucleicos viscosos, presentes nos meios de cultura quando as culturas estão sob estresse. O que há nos meios de cultura que pode fazer com que as células se aglomerem? Leia mais aqui sobre como eliminar a aglomeração das culturas.

Morte celular em cultura

Quando as células morrem em cultura, deve-se primeiro descartar a contaminação por microrganismos. Outros fatores que podem contribuir para a saúde celular precária ou para um comportamento inconsistente com o fenótipo incluem:

• Condições do estoque congelado
• Número de passagens celulares/superconfluência
• Estresse ambiental
• Digestão excessiva com enzimas de dissociação

Equipamentos adequados, reagentes qualificados e protocolos especializados são fundamentais para resolver resultados inesperados em culturas celulares.

Precipitados em meios de cultura

Se não se tratar de contaminação, as partículas presentes nos meios de cultura costumam ter uma explicação inorgânica. Entenda o que são tampões equilibrados e os componentes dos meios de cultura, e saiba mais sobre como manter esses componentes em suspensão.