Eletroforese em gel de ácidos nucleicos
A eletroforese em gel de ácidos nucleicos é uma técnica de biologia molecular para a separação, identificação e purificação de fragmentos de DNA e RNA com base no tamanho e carga. Nessa técnica, as moléculas de DNA e RNA são separadas com a aplicação de um campo elétrico para mover os ácidos nucleicos com carga negativa através de uma matriz de gel de agarose ou poliacrilamida.
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A matriz de gel age como uma peneira, permitindo que moléculas mais curtas passem mais rapidamente através dos poros de gel que as moléculas mais longas.
- Géis de agarose são usados mais comumente para eletroforese de DNA e RNA e são capazes de separar fragmentos de DNA que variam de 50 pares de base (50 pb) a 50.000 pb com o uso de técnicas eletroforéticas padrão.
- Géis de poliacrilamida têm uma faixa menor de separação e conseguem separar fragmentos de DNA com menos de cerca de 500 pb com uma resolução muito alta.
- Tanto os géis de agarose quanto de poliacrilamida podem ser usados também em ensaios de desvio de mobilidade eletroforética (EMSA) para caracterizar interações proteína-ácido nucleico.
Após a eletroforese, as moléculas de DNA e RNA podem ser visualizadas por meio do uso de corantes ou luz UV, extraídas e purificadas do gel ou transferidas para blotting. Esses métodos são técnicas comuns de preparo em aplicações e fluxos de trabalho de clonagem, PCR, espetrometria de massa, sequenciamento de próxima geração (NGS) e Northern e Southern blotting.
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