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# Sequenciamento
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A capacidade de determinar a composição e a ordem dos ácidos nucleicos em uma fita de DNA ou RNA tem implicações fundamentais no entendimento da genética moderna e em diversas áreas que são essenciais para a pesquisa de doenças e para um maior entendimento de todos os organismos. Além da capacidade de sequenciar ácidos nucleicos ser útil para decifrar o código genético de um organismo, ela também fornece uma ferramenta poderosa aos pesquisadores que, quando combinada com outras tecnologias moleculares, permite manipular sequencias de DNA facilmente e verificar tais alterações através do sequenciamento. Como o DNA codificante funciona como a fonte de informação codificada para proteínas, agora é possível para pesquisadores criarem proteínas recombinantes feitas sob medida, que contêm uma grande variedade de elementos funcionais e que podem ser amplamente utilizadas para responder a um número igualmente amplo de questionamentos científicos importantes. Para mais reagentes e guias de sequenciamento completo do genoma, visite o recurso de [](https://www.sigmaaldrich.com)[Sequenciamento de próxima geração](https://www.sigmaaldrich.com/BR/pt/applications/genomics/next-gen-sequencing).
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Visão geral
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Suporte
## Sequenciamento de Sanger
No início, os métodos de química analítica eram capazes de determinar a composição de ácidos nucleicos. No entanto, Fred Sanger e colaboradores desenvolveram métodos (que inicialmente utilizavam fragmentos digeridos marcados com radioisótopos e fracionamento bidimensional) para fornecer algumas das primeiras sequências nucleares completas. Os avanços na área continuaram por várias décadas, com cada novo avanço contribuindo para uma biblioteca de proteínas e genomas sequenciados cada vez maior. Esses avanços incluem a separação de nucleotídeos por comprimento usando eletroforese em gel seguida da eletroforese capilar. Além disso, a técnica moderna de sequenciamento de Sanger é definida pela incorporação de nucleotídeos com marcação fluorescente e análise computacional automatizada de cada fragmento de ácido nucleico.
## Metodologia de sequenciamento de DNA
Apesar dos métodos de sequenciamento de DNA virem se aprimorando desde a origem dessa tecnologia, vários componentes fundamentais ainda são necessários e utilizados pelas plataformas de sequenciamento de DNA modernas. O preparo do DNA geralmente inclui o isolamento e purificação do DNA a partir de um organismo hospedeiro. Outros componentes essenciais, incluindo bases de DNA livres, primers de DNA, bases de DNA modificadas contendo etiquetas fluorescentes (bases finalizadoras) e DNA polimerase, são todos adicionadas juntos em um único recipiente. Através de uma série de etapas de aquecimento e resfriamento, o recipiente contendo todos esses componentes irá produzir uma biblioteca de sequencias curtas de DNA relativas à sequência completa de DNA de interesse, cada uma delas terminando em uma base finalizadora com marcação fluorescente na extremidade. As novas fitas de DNA contendo os nucleotídeos com marcação fluorescente nas extremidades são separadas por comprimento, passadas por um tubo capilar e ordenadas por tamanho. Após isso, a base fluorescente em cada fita é excitada por um laser e o sinal resultante é captado por uma câmera. Por fim, a sequência completa de DNA é reconstruída por computador usando a informação coletada.
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