Preparação de meios de cultura microbiana

Tipos de meios de cultura

Os meios de cultura microbiana devem proporcionar condições ideais de crescimento para todos os tipos de microrganismos ou para tipos específicos. A composição precisa de um meio depende da espécie que está sendo cultivada e do objetivo da aplicação. O pH do meio precisa ser ajustado de acordo com os microrganismos. Os meios de cultura microbiana são classificados com base em vários parâmetros, como constituintes químicos, natureza física e função. Os tipos de meios definidos por esses parâmetros estão descritos abaixo.

Classificação de meios de cultura microbiana por composição química

Meio sintético (definido) é um meio com produtos químicos definidos, comumente usado para cultivar fotoautótrofos, como cianobactérias e protistas fotossintéticos. É amplamente utilizado em pesquisas para estudar o metabolismo de microrganismos.

Meio complexo é um meio que contém componentes químicos não definidos, como peptona, extrato de carne e extrato de levedura, que atendem às necessidades nutricionais de diferentes microrganismos. É usado para cultivar micróbios exigentes com exigências nutricionais complexas.

Meios de cultura microbiana baseados na natureza física

Meio sólido usa 1-7% de ágar-ágar ou 10-20% de gelatina para solidificar o caldo líquido. O meio sólido é usado para isolar diferentes micróbios uns dos outros, estabelecer culturas puras, fazer slants de ágar e fazer stabs de ágar.

Meio líquido não contém nenhum agente solidificador. Após a inoculação e a incubação, as células tornam-se visíveis na forma de uma pequena massa ou borramento do caldo.

Meios de cultura microbiana com base no método de preparação

Meio pronto para uso é um meio sólido ou líquido fornecido em placas, garrafas, tubos ou outros recipientes, na forma pronta para uso ou pronto para uso após refusão e suplementação.

Meio preparado a partir de formulações desidratadas comercialmente é um meio na forma seca que requer reidratação e processamento antes do uso, resultando em um meio completo ou em um meio incompleto ao qual são adicionados suplementos antes do uso.

Meio preparado a partir de componentes individuais é um meio produzido por um laboratório de microbiologia inteiramente a partir de seus ingredientes individuais.

Meio sob demanda é produzido por um sistema que mantém disponível em um laboratório um meio de cultura estéril e altamente concentrado durante vários dias. Por meio da diluição com água estéril, ele pode produzir uma quantidade necessária de meio pronto para uso sob demanda, sem a necessidade de autoclavagem.

Preparação de meios de cultura microbiana

A preparação do meio a partir de formulações comerciais desidratadas deve ser realizada seguindo as instruções do fabricante. A formulação dos ingredientes básicos, como peptonas, extratos de levedura, ágar, substâncias tamponantes e antibióticos, é modificada para obter a consistência do meio. A quantidade necessária de meio desidratado ou de ingredientes individuais é dissolvida em água destilada por meio de agitação contínua seguida de aquecimento (se necessário). Os meios que contêm ágar devem ser adequadamente embebidos com agitação apropriada antes do aquecimento. O pH deve ser ajustado, e o meio é distribuído em recipientes apropriados para esterilização por calor úmido em uma autoclave. As substâncias sensíveis ao calor (por exemplo, proteínas, enzimas) são esterilizadas com o uso de filtros de membrana.

Os meios de cultura devem ser armazenados em temperaturas especificadas para evitar a modificação da composição e não mais do que o prazo de validade do produto. A preparação e o armazenamento assépticos são essenciais para proteger os meios de cultura contra infecções microbianas. A perda de água durante o armazenamento pode ser minimizada por meio de um invólucro impermeável e/ou armazenamento a 5 °C ± 3 °C. A degradação química, por exemplo, a oxidação ou a perda antimicrobiana, pode ser retardada pela proteção contra a luz, o calor e a desidratação.