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Preparo de meios de cultura para microrganismos

Meio de cultura líquido sendo transferido para uma placa de Petri estéril

O preparo da meios de cultura para microrganismos é o processo de mistura de nutrientes, agentes para tamponamento e manutenção do equilíbrio osmótico, bem como inibidores ou indicadores seletivos para criar um ágar ou caldo que possibilite o crescimento e a diferenciação dos microrganismos. O preparo de meios de cultura para microrganismos é uma tarefa rotineira no monitoramento regular de deterioração e micróbios patogênicos em testes microbiológicos. 

Tipos de meio de cultura

Os meios de cultura para microrganismos devem fornecer condições ideais de crescimento para todos os tipos ou para tipos específicos de microrganismos. A composição precisa de um meio depende da espécie sendo cultivada e do objetivo da aplicação. O pH médio precisa ser ajustado dependendo dos microrganismos. Os meios de cultura para microrganismos são classificados com base em vários parâmetros, como componentes químicos, natureza física e função. Os tipos de meios definidos por esses parâmetros são descritos a seguir.


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Classificação dos meios de cultura para microrganismos por composição química

O meio sintético (definido) é um meio com composição química definida, comumente usado para cultivar organismos fotoautotróficos, como cianobactérias e protistas fotossintéticos. Ele é amplamente utilizado em pesquisa para estudar o metabolismo de microrganismos.

O meio complexo é um meio que contém componentes químicos não definidos, como peptona, extrato de carne e extrato de levedura, que atendem aos requisitos nutricionais de diferentes microrganismos. Este meio é usado para cultivar microrganismos difíceis, com requisitos nutricionais complexos.

Meios de cultura para microrganismos com base na natureza física

O meio sólido usa 1% a 7% de ágar-ágar ou 10% a 20% de gelatina para solidificar o caldo líquido. Os meios sólidos são usados para isolar diferentes microrganismos uns dos outros, estabelecer culturas puras, fazer culturas em ágar inclinado e pelo método de estriamento.

O meio líquido não contém nenhum agente solidificante. Após a inoculação e a incubação, as células tornam-se visíveis na forma de uma pequena massa ou caldo turvo.

Meios de cultura para microrganismos com base no método de preparo

O meio pronto para uso é um meio sólido ou líquido fornecido em placas, frascos, tubos ou outros recipientes, na forma pronta para uso ou pronta para uso após nova fusão e suplementação.

O meio preparado a partir de formulações comercialmente desidratadas é um meio seco que requer reidratação e processamento antes do uso, resultando em um meio completo ou em um meio incompleto ao qual suplementos são adicionados antes do uso.

O meio preparado a partir de componentes individuais é um meio produzido por um laboratório de microbiologia inteiramente a partir de seus ingredientes individuais.

O meio sob demanda é produzido por um sistema que mantém meio de cultura altamente concentrado e estéril disponível no laboratório durante vários dias. Diluindo-o com água estéril, ele pode produzir a quantidade necessária de meio pronto para uso sob demanda, sem a necessidade de autoclavagem.

Preparo de meios de cultura para microrganismos

O preparo dos meios a partir de formulações comerciais desidratadas deve ser realizado de acordo com as instruções do fabricante. A formulação de ingredientes básicos, como peptonas, extratos de levedura, ágar, substâncias tamponantes e antibióticos, é modificada para atingir a consistência do meio. A quantidade necessária de meio desidratado ou de ingredientes individuais é dissolvida em água destilada por agitação contínua, seguida por aquecimento (se necessário). Os meios contendo ágar devem ser adequadamente embebidos com agitação adequada antes do aquecimento. O pH deve ser ajustado e o meio é dispensado em recipientes apropriados para esterilização por calor úmido em uma autoclave. Substâncias termossensíveis (por exemplo, proteínas, enzimas) são esterilizadas usando filtros de membrana.

Os meios de cultura devem ser armazenados em temperaturas especificadas para evitar modificações na composição, e não se deve exceder a validade do produto. O preparo e o armazenamento assépticos são essenciais para proteger os meios de cultura contra infecções microbianas. A perda de água durante o armazenamento pode ser minimizada por embalagens impermeáveis e/ou armazenamento a 5 °C ± 3 °C. A degradação química, por exemplo, por oxidação ou perda antimicrobiana, pode ser retardada mantendo o meio ao abrigo de luz, calor e desidratação.




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