A1978

Anticorpo anti-β-actina, monoclonal de camundongo

clone AC-15, purified from hybridoma cell culture

• Synonym(s): Antiβ-actina monoclonal
• NACRES: NA.41

Properties

• fonte biológica: mouse
• conjugado: unconjugated
• forma do anticorpo: purified immunoglobulin
• antibody product type: primary antibodies
• clone: AC-15, monoclonal
• forma: buffered aqueous solution
• peso molecular: antigen 42 kDa
• species reactivity: sheep, carp, feline, chicken, rat, mouse, Hirudo medicinalis, rabbit, canine, pig, human, bovine, guinea pig
• should not react with: Dictyostelium discoideum
• technique(s): immunocytochemistry: 10-40 μg/mL using human foreskin fibroblasts; immunohistochemistry (frozen sections): suitable; indirect immunofluorescence: suitable; microarray: suitable; western blot: 0.5-1 μg/mL using cell extract of human foreskin fibroblasts or chicken fibroblasts.
• Isotipo: IgG1
• nº de adesão UniProt: P60709
• application(s): research pathology
• enviado em: dry ice
• temperatura de armazenamento: −20°C
• Gene Information: human ... ACTB(60) ; mouse ... Actb(11461) ; rat ... Actb(81822)

Description

Descrição geral

Na coloração de criocortes de tecido ultrafinos da moela de frangos, o anticorpo marca os corpos densos e canais longitudinais que ligam corpos densos consecutivos que também são ocupados por desmina e a placa densa associada à membrana. Ele não cora músculos cardíacos e esqueléticos de adultos, exceto traços, devido a contaminações da amostra com células não musculares, ou se tecido embrionário estiver sendo usado.

O gene da ACTB (β-actina) é mapeado no cromossomo humano 7p22.1. βA β-actina é a proteína mais abundante no citoplasma. A ACTB é expressa de forma onipresente. A actina é uma das proteínas eucarióticas mais conservadas, ela é expressa em mamíferos e aves. Quatro das isoformas da actina representam os marcadores de diferenciação de tecidos musculares e duas são encontradas em quase todas as células. O anticorpo monoclonal anti-β-actina murino (isotipo de IgG1 de camundongo) é derivado de hibridoma AC-15 produzido pela fusão de células de mieloma e esplenócitos de camundongos BALB/c imunizados com um peptídeo N-terminal de b-actina citoplasmática ligeiramente modificada, Ac-Asp-Asp-Asp-Ile-Ala-Ala-Leu-Val-Ile-Asp-Asn-Gli-Ser-Gli-Lis, conjugado com KLH.
Na coloração de criocortes de tecido ultrafinos da moela de frangos, o anticorpo marca os corpos densos e canais longitudinais que ligam corpos densos consecutivos que também são ocupados por desmina e a placa densa associada à membrana. Ele não cora músculos cardíacos e esqueléticos de adultos, exceto traços, devido a contaminações da amostra com células não musculares, ou se tecido embrionário estiver sendo usado.

Especificidade

O anticorpo monoclonal de camundongo anti-β-actina 1, 2 reconhece um epítopo localizado na extremidade N-terminal da isoforma β da actina.

Imunogênio

Peptídeo N-terminal com β-actina citoplasmática ligeiramente modificada, Ac-Asp-Asp-Asp-Ile-Ala-Ala-Leu-Val-Ile-Asp-Asn-Gli-Ser-Gli-Lis, conjugado com KLH.

Aplicação

A actina em células de várias espécies e tecidos de diferentes origens é muito semelhante em suas propriedades imunológicas e físicas. Como consequência, foi difícil produzir antissoros potentes a essa proteína. Portanto, a disponibilidade de anticorpos monoclonais anti-β-actina oferece uma ferramenta específica e útil no estudo da distribuição intracelular da β-actina e dos aspectos estáticos e dinâmicos do citoesqueleto.
O anticorpo monoclonal antibeta-actina pode ser usado para análises por microarranjo, imunofluorescência indireta e imuno-histoquímica. Além disso, o produto foi usado para imuno-histoquímica em concentração de 10-40 μg/ml usando fibroblastos de prepúcio humano. O anticorpo também foi usado para western blot na concentração de 0,5-1 μg/ml usando extrato celular de fibroblastos de prepúcio humano ou fibroblastos de galinha.
O anticorpo pode ser usado para corar cortes congelados fixados em acetona, preparados para ME e experimentos de microinjeção. Soluções de B5, metacam ou de Bouin podem ser usadas como fixadores. O epítopo reconhecido pelo anticorpo é resistente à fixação com formalina e ao embebimento em parafina.
Ela foi utilizada em análise por imunoblot.

O anticorpo monoclonal antiactina de camundongo foi usado como controle de carregamento para análise por western blot de lisados de proteínas do fígado de ratos.

O anticorpo monoclonal antiactina de camundongo foi usado como controle de carregamento para análise por western blot de proteínas imunoprecipitadas de coculturas de gânglio da raiz dorsal de ratos.

O anticorpo monoclonal antibeta-actina pode ser usado para análises por microarranjo, imunofluorescência indireta e imuno-histoquímica. Além disso, o produto foi usado para imuno-histoquímica em concentração de 10-40 μg/ml usando fibroblastos de prepúcio humano. O anticorpo também foi usado para western blot, na concentração de 0,5-1 μg/ml, usando extrato celular de fibroblastos de prepúcio humano ou fibroblastos de galinha.
O anticorpo pode ser usado para corar cortes congelados fixados em acetona, preparados para ME e experimentos de microinjeção. Soluções de B5, metacam ou de Bouin podem ser usadas como fixadores. O epítopo reconhecido pelo anticorpo é resistente à fixação com formalina e ao embebimento em parafina.

Ações bioquímicas/fisiológicas

As duas principais proteínas citoesqueléticas envolvidas na motilidade celular são actina e miosina. A actina e a miosina são componentes de vários tipos celulares e estão envolvidas em diversos processos celulares, inclusive locomoção, secreção, transmissão citoplasmática, fagocitose e citocinese.
A ACTB (β-actina) é essencial para a organogênese, especialmente para o desenvolvimento do cérebro, rins e coração. Ela é responsável por manter a proliferação, migração e o formato celulares. A proteína actina é essencial para a formação de plaquetas maduras. β−A actina desempenha um papel importante no desenvolvimento embrionário. O aumento da expressão (upregulation) da β-actina estimula protrusões de membrana e auxilia a motilidade celular. A proteína codificada β-actina media a migração de fibroblastos em camundongos e, desse modo, controla a tensão no tecido conjuntivo.
A actina é uma proteína citoesquelética que regula a motilidade, a secreção, a fagocitose e a citocinese celulares. A terminação NH2 da actina pode funcionar como um antígeno Essa terminação também pode modular as interações da actina e pode se associar a proteínas, como a miosina.

forma física

Solução em solução salina tamponada com fosfato 0,01 M, pH 7,4, contendo azida sódica 15 mM.

Nota de preparo

Armazenamento e estabilidade: Para uso contínuo, armazene a 2-8 °C por até um mês. Para armazenamento prolongado, congele em alíquotas a –20 ºC. Não é recomendado congelar e descongelar repetidamente, nem armazenar em congeladores do tipo “frost-free”. Se houver leve turbidez após o armazenamento prolongado, clarifique a solução por centrifugação antes do uso. As amostras de diluição de trabalho devem ser descartadas se não utilizadas no prazo de 12 horas.

Outras notas

Para visualizar um guia de seleção de anticorpos de actina acesse: www.sigmaaldrich.com/actin.

Exoneração de responsabilidade

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Safety Information

• Código de classe de armazenamento: 10 - Combustible liquids
• WGK: WGK 3
• Ponto de fulgor (ºF): Not applicable
• Ponto de fulgor (ºC): Not applicable