Tampões para HPLC

Tampões de fase móvel

A escolha do tampão apropriado, em termos de espécie de tamponamento, força iônica e pH, é a etapa mais importante no desenvolvimento de método de RP-HPLC para analitos iônicos. A retenção de analitos iônicos na RP-HPLC é fundamentalmente afetada pelo pH da fase móvel. Desse modo, o controle do pH da fase móvel em RP-HPLC é um dos parâmetros mais importantes para a separação eficaz de analitos.

A faixa típica de pH para separações de fase reversa em colunas à base de sílica é de 2 a 8. O tampão deve ter uma constante de acidez (pKa) próxima do pH desejado, uma vez que tampões controlam melhor o pH em sua pKa. Como regra geral, é ideal optar por um tampão com um valor de pKa < 2 unidades do pH desejado para a fase móvel. Oferecemos tampões de grau HPLC para uma ampla faixa de pH para todos os requisitos cromatográficos de seu laboratório.

Fatores a serem considerados na escolha de um tampão para HPLC

Pureza química

A qualidade dos aditivos de fase móvel (tampões, sais, ácidos e bases) e os solventes orgânicos utilizados em um experimento de HPLC devem ser ajustados à sensibilidade do detector e ao protocolo de eluição. Solventes e reagentes de alta qualidade são recomendados para uma cromatografia ideal.

Compatibilidade química

A composição do tampão, bem como o pH da fase móvel, devem ser escolhidos em conformidade com o material da armação da coluna e a natureza da fase estacionária. Isso impede danos ao leito e ao equipamento da coluna.

Solubilidade do tampão

O ideal é que o tampão seja completamente solúvel em água e que não precipite. A concentração do tampão deve ser escolhida cuidadosamente para evitar precipitação em concentrações maiores, quando o tampão é misturado com o solvente orgânico. Se isso for ignorado, pode gerar problemas operacionais nas bombas e causar bloqueio da coluna de HPLC.

Potência do tampão

Um eluente que demonstra interação fraca com a fase estacionária é capaz de eluir da coluna apenas analitos ligados fracamente, ao passo que uma interação forte causa a eluição das moléculas fortemente ligadas da amostra. A potência de eluição ou a força do solvente de vários solventes depende do tipo de fase estacionária usada. Depois da potência de eluição, a viscosidade e absorbância de UV do tampão têm um papel importante em termos de adequação para uso em análises por HPLC.