Clonagem molecular e expressão de proteínas
O objetivo da clonagem molecular é inserir o gene de interesse (GOI) em um vetor plasmídeo, um fragmento circular de DNA que contém vários elementos para facilitar a clonagem, a seleção de clones e a expressão da proteína. Os pesquisadores costumam usar enzimas de restrição de DNA e ligase para inserir o GOI em-quadro dentro do vetor de expressão para a subsequente expressão da proteína. Esse vetor é então inserido em uma célula que expressará a proteína codificada pelo GOI, ou a expressão da proteína é realizada usando sistemas de síntese de proteínas sem células.
Uma vez que a proteína é expressa, sua função pode ser estudada, pois ela afeta a sinalização celular, a morfologia ou outros aspectos dentro da célula. Alternativamente, a proteína pode ser expressa em grandes quantidades, purificada e utilizada em inúmeras aplicações posteriores. Para obter informações adicionais, explore nossa oferta abrangente de reagentes e recursos confiáveis, disponíveis em todo o fluxo de trabalho de clonagem e expressão para sistemas de expressão de proteínas de insetos, bactérias e mamíferos.
Produtos
Enzimas modificadoras de RNA e DNA
Durante a clonagem molecular, os pesquisadores frequentemente utilizam enzimas de restrição para cortar o DNA e outras enzimas, como as enzimas modificadoras de RNA e DNA, para adicionar, remover ou alterar grupos químicos nos ácidos nucleicos. Para atender às diversas necessidades de pesquisa, oferecemos uma gama abrangente dessas enzimas essenciais, incluindo fosfatase alcalina, protease, RNA polimerase T7, pirofosfatase, ribonuclease A e DNA ligase T4. Nossos reagentes, combinados com tampões especialmente formulados, ajudam a garantir alta eficiência e confiabilidade na manipulação de DNA e RNA.
Sistema Novagen® pET, vetores Simplicon® e sistemas de expressão de proteínas UCOE®
Nossos vetores de expressão em E. coli, insetos e mamíferos simplificam a seleção de transformantes positivos. Alguns produtos em destaque incluem:
- O Sistema Novagen® pET é reconhecido como o padrão-ouro para clonagem e expressão de proteínas recombinantes em sistemas bacterianos.
- O Sistema de Expressão de Proteínas In Vivo Simplicon® oferece um sistema de expressão baseado em RNA auto-replicante, sintético, ajustável e que não se integra ao genoma. A expressão Simplicon® gera expressão proteica imediata e altamente sustentada de múltiplos genes em células humanas transfectadas, sem o risco de integração no genoma.
- A tecnologia do vetor de expressão UCOE® (Ubiquitous Chromatin Opening Element) alcança gramas de proteína em menos de 30 dias em células de mamíferos transfectadas de forma estável. A tecnologia de expressão UCOE® previne o silenciamento do transgene e proporciona uma expressão gênica mais consistente, estável e de nível mais elevado (até 20 vezes) do que os vetores convencionais, independentemente do local de integração cromossômica.
Reagentes de transformação de bactérias e leveduras
A transformação bacteriana envolve a inserção de DNA estranho em bactérias usando métodos como choque térmico e eletroporação. Nosso portfólio de células competentes foi projetado para a expressão ideal de plasmídeos e proteínas, mesmo em condições experimentais desafiadoras. Os destaques incluem:
- As células competentes NovaBlue® são otimizadas para eficiência e preservação de plasmídeos, proporcionando preparações de bibliotecas superiores e estabilidade dos plasmídeos.
- Os sistemas Rosetta™, Origami™ e Overnight Express™ aprimoram o dobramento adequado das proteínas e aumentam a solubilidade ou a expressão de proteínas citotóxicas.
Para a transformação de leveduras, fornecemos protocolos simples e produtos escaláveis que se integram perfeitamente aos fluxos de trabalho de expressão de proteínas.
Para pesquisa com células de mamíferos, consulte nossa página de Transfecção para opções adicionais.
Vetores de plasmídeos da BCCM/GeneCorner
Explore nossa oferta ampliada de vetores plasmídeos da BCCM/GeneCorner — um repositório de plasmídeos exclusivo e certificado pela ISO, mantido pelo Departamento de Biologia Molecular Biomédica da Faculdade de Ciências da Universidade de Ghent (UGent). Esta coleção diversificada inclui uma variedade de plasmídeos de clonagem e expressão de proteínas recombinantes em uma gama de organismos-alvo, apoiando a pesquisa modernizada em biologia molecular e de proteínas.
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Recursos relacionados
- Brochure: Molecular Essentials Guide
Learn how our comprehensive molecular tools and reagents provide precise, ready-to-use solutions for your workflows.
- Article: Cell-Free Protein Synthesis or Expression
Cell-free protein synthesis rapidly produces recombinant proteins without cells, utilizing translation machinery from different cell types for efficiency.
- Article: Competent Cell Selection & E. coli Markers Guide
Select competent cells by application, transformation efficiency, and genotype. We also present a list of E. coli markers for reference.
- Article: Simplicon™ in vivo Protein Expression System
Simplicon: A non-genome integrating, tunable and sustained protein expression system in human cells, based on a single, polycistronic, and self-replicating synthetic RNA.
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