Anticorpos secundários

Proteínas A, G e L

A proteína A é derivada do Staphylococcus aureus. A proteína G é derivada de uma espécie de Streptococcus. Ambas possuem sítios de ligação para a porção Fc da IgG de mamíferos. A afinidade dessas proteínas pela IgG varia de acordo com a espécie animal. A proteína G apresenta maior afinidade pela IgG de ratos, cabras, ovelhas e bovinos, bem como pela IgG1 de camundongos e pela IgG3 humana. A proteína A tem maior afinidade pela IgG de gatos e cobaias (Tabela 1). Além dos sítios de ligação à IgG Fc, a proteína G nativa contém sítios de ligação à albumina, à região Fab das Igs e a regiões de ligação à membrana, o que pode levar a uma coloração inespecífica. Esses problemas foram resolvidos com a criação de formas recombinantes da proteína. A Proteína G recombinante foi projetada para eliminar a região de ligação à albumina, e a Proteína G′ recombinante é uma proteína truncada que não possui os locais de ligação à albumina, Fab e à membrana, mantendo o local de ligação ao Fc, tornando-a mais específica para IgG do que a forma nativa.

A proteína L, proveniente de Peptostreptococcus magnus, apresenta afinidade pelas cadeias leves kappa (Tabela 2) de várias espécies. Ela detecta IgG, IgA e IgM monoclonais ou policlonais, bem como fragmentos Fab, F(ab′)2 e Fv de cadeia única recombinante (scFv) que contenham cadeias leves kappa. Ela também se liga à IgG de galinha. Nota: Espécies como bovinos, caprinos, ovinos e equinos, cujas Igs contêm quase exclusivamente cadeias lambda, não se ligam bem, ou quase nada, à Proteína L.

Reagentes de detecção

As proteínas A e G são utilizadas como reagentes gerais, não específicos para determinadas espécies, para a ligação de anticorpos primários ou IgG de superfície em tecidos de mamíferos. A proteína G é recomendada para a maioria das espécies, incluindo camundongos e ratos. A proteína A é recomendada para gatos e cobaias. Nenhuma delas é recomendada para a detecção de IgA ou IgM, para a detecção de fragmentos Fab ou para a detecção de IgG aviária. Quando ligadas a uma resina como a agarose, a proteína A e a proteína G podem ser utilizadas para a purificação por afinidade de imunoglobulinas a partir de soro ou líquido ascítico.

A proteína L é utilizada como reagente geral para a ligação de anticorpos primários de mamíferos ou aves ou de Igs de superfície de todas as classes. É especialmente útil para a detecção de fragmentos Fab, F(ab′)₂ e fragmentos scFv recombinantes, para a detecção de Igs ligadas a receptores Fc ou para a detecção de anticorpos monoclonais na presença de Igs bovinas. A sua utilização está limitada à detecção de Igs portadoras de cadeias leves kappa.

Resinas

A Proteína A e a Proteína G possuem sítios de ligação para a porção Fc da IgG de mamíferos. A capacidade dessas proteínas para IgG varia de acordo com a espécie. Em geral, as IgGs apresentam maior afinidade pela Proteína G do que pela Proteína A, e a Proteína G pode ligar-se à IgG de uma variedade mais ampla de espécies. A afinidade de várias subclasses de IgG, especialmente de camundongos e humanos, pela Proteína A varia mais do que pela Proteína G. A Proteína A pode, portanto, ser usada para preparar IgG isotípicamente pura de algumas espécies. A Proteína L é adequada para isolar anticorpos monoclonais de camundongos a partir de sobrenadantes de cultura celular sem contaminação por IgG bovina.