Anticorpos secundários

Proteínas A, G e L

A proteína A é derivada de Staphylococcus aureus. A proteína G é derivada de uma espécie de Streptococcus. Ambas têm sítios de ligação para a porção Fc da IgG de mamíferos. A afinidade dessas proteínas com a IgG varia dependendo da espécie animal. A proteína G tem maior afinidade com a IgG de rato, cabra, ovelha e bovina, bem como com a IgG1 de camundongo e a IgG3 humana. A proteína A tem maior afinidade com a IgG de gato e porco-da-índia (Tabela 1). Além dos sítios de ligação Fc da IgG, a proteína G nativa contém sítios de ligação para albumina, a região Fab das Igs, e regiões de ligação à membrana, o que pode causar coloração inespecífica. Esses problemas foram resolvidos criando formas recombinantes da proteína. A proteína G recombinante foi modificada para eliminar a região de ligação à albumina, e a proteína G′ recombinante é uma proteína truncada que não tem os sítios de ligação à albumina, Fab e membrana, mantendo o sítio de ligação Fc, o que a torna mais específica para a IgG do que a forma nativa.

A proteína L, de Peptostreptococcus magnus, tem afinidade com cadeias leves kappa (Tabela 2) de diversas espécies. Ela detecta IgG, IgA e IgM monoclonais ou policlonais, bem como fragmentos Fab, F(ab′)2 e Fv de cadeia única (scFv) recombinante que contêm cadeias leves kappa. Ela também se liga à IgG de galinha. Observação: Espécies como bovinos, caprinos, ovinos e equinos, cujas Igs contêm quase que exclusivamente cadeias lambda, fazem poucas ou nenhuma ligação com a proteína L.

Reagentes para detecção

As proteínas A e G são usadas como um reagente geral, não específico para determinadas espécies, para ligar anticorpos primários ou IgG de superfície em tecidos de mamíferos. A proteína G é recomendada para a maioria das espécies, incluindo camundongos e ratos. A proteína A é recomendada para gatos e porcos-da-índia. Nenhuma delas é recomendada para a detecção de IgA ou IgM, para a detecção de fragmentos Fab ou para a detecção de IgG de aves. Quando ligadas a uma resina como a agarose, a proteína A e a proteína G podem ser usadas para purificar por afinidade imunoglobulinas de soro ou líquido ascítico.

A proteína L é usada como um reagente geral para ligar anticorpos primários de mamíferos ou aves ou Igs de superfície de todas as classes. Ela é particularmente útil para a detecção de fragmentos Fab, F(ab')₂ e fragmentos scFv recombinantes, para detecção de Igs ligadas a receptores de Fc, ou para a detecção de anticorpos monoclonais na presença de Igs bovinas. Seu uso é limitado à detecção de Igs com cadeias leves kappa.

Resinas

A proteína A e a proteína G têm sítios de ligação para a porção Fc da IgG de mamíferos. A capacidade de ligação dessas proteínas à IgG varia de acordo com a espécie. Em geral, as IgGs têm uma maior afinidade pela proteína G do que pela proteína A, e a proteína G pode se ligar à IgG de uma variedade maior de espécies. A afinidade de várias subclasses de IgG, especialmente de camundongos e humanos, pela proteína A varia mais do que pela proteína G. Dessa forma, a proteína A pode ser usada para preparar IgG isotipicamente pura de algumas espécies. A proteína L é adequada para isolar anticorpos monoclonais de camundongos de sobrenadantes de cultura celular, sem contaminação por IgG bovina.