Nucleases (DNases e RNases)

Endonucleases de restrição

Nucleases para digestão de DNA e RNA 

Nossas nucleases variam de acordo com a especificidade de clivagem e com propriedades como o pH ideal, permitindo que o pesquisador escolha a enzima digestiva mais adequada às necessidades experimentais.A  desoxirribonuclease I de fontes de mamíferos, por exemplo, produz produtos com terminal 5' P1 de Penicillium citrinum - degrada DNA e RNA de fita simples, mas não DNA de fita dupla. A ribonuclease A hidrolisa qualquer RNA que contamine amostras de proteína ou preparações de DNA de plasmídeo. Muitas dessas enzimas têm usos adicionais em biologia molecular. Por exemplo, a DNase I "corta" o DNA para permitir a incorporação de bases marcadas. A RNase A é uma ferramenta no ensaio de proteção de RNase que mede a abundância de mRNAs específicos.

Enzimas DNase I e DNase IIase

A desoxirribonuclease I catalisa a clivagem endonucleolítica de DNA de fita dupla e simples para produzir produtos finais de 5'-fosfodinucleotídeo e 5'-foscoligonucleotídeo. O produto da hidrólise é uma mistura complexa de mononucleotídeos e oligonucleotídeos de 5'-fosfato. Na presença de íons de magnésio, a DNase I ataca cada fita de DNA de forma independente e os locais de clivagem são aleatórios. Na presença de manganês (II), a DNase I cliva as duas fitas de DNA aproximadamente no mesmo local. A maioria dos protocolos usa o íon magnésio com a DNase I, mas para fins específicos, o manganês é usado. Além disso, a desoxirribonuclease II catalisa a clivagem endonucleolítica de DNA de fita dupla e simples para produzir nucleosídeos 3'-fosfatos e produtos finais 3'-foscoligonucleotídeos. A faixa de pH para atividade é de 4,0 a 6,5, com apenas cerca de 15% em pH 6,5, com um ótimo de pH 5,0. A estabilidade ideal da enzima é em pH 5 - 5,5, com rápida inativação em pH 8,5 a 30 °C. Oferecemos uma ampla coleção de enzimas DNase para dar suporte a uma variedade de tipos de amostras e aplicações. Seja na forma liofilizada ou líquida, algumas de nossas DNases incluem concentrações significativamente baixas de RNase ou proteases para proteger sua amostra contra digestão indesejada.

Ribonuclease A, Ribonuclease H e Ribonuclease T₁ RNenzimas

A Ribonuclease A catalisa a clivagem endonucleolítica do RNA para produzir nucleosídeos 3'-fosfatos e 3'-fosfoligonucleotídeos terminados em Cp ou Up. Os ativadores da RNase A incluem sais de potássio e sódio. A temperatura ideal para a atividade é de 60 °C, embora a enzima apresente atividade entre 15 e 70 °C. O pH ideal é 7,6, com uma faixa de atividade de 6 a 10. A atividade mais alta é exibida com RNA de fita simples. A RNase A é uma enzima muito estável e pode suportar temperaturas de até 100 °C. A 100 °C, a RNase A é mais estável entre pH 2,0 e 4,5. A ribonuclease H hidrolisa especificamente as ligações fosfodiéster do RNA em duplexes de RNA:DNA para gerar produtos com extremidades de 3'-hidroxila e 5'-fosfato. Ela degrada apenas o componente de RNA do híbrido de DNA-RNA (RNA que está ligado por hidrogênio a uma fita de DNA complementar).

Além disso, a ribonuclease T₁ catalisa a clivagem endonucleolítica de dois estágios do RNA para produzir nucleosídeos 3'-fosfatos e 3'-foscoligonucleotídeos que terminam principalmente em Gp. Na reação, a clivagem ocorre entre o grupo 3'-fosfato de um ribonucleotídeo de guanidina e o 5'-hidroxil do nucleotídeo adjacente. O produto inicial é um nucleosídeo de fosfato cíclico 2':3' que é hidrolisado para o fosfato de 3'-nucleosídeo correspondente. Em solução, é resistente ao calor (100 °C por 10 minutos em pH 6) e ao ácido, mas instável em solução alcalina (>pH 9). Deve-se observar que a reação catalisada pela enzima não pode ser interrompida pelo aquecimento da mistura de reação a 100 °C. Oferecemos uma ampla coleção de enzimas RNase para dar suporte a uma variedade de tipos de amostras e aplicações. Seja na forma liofilizada ou líquida, algumas de nossas RNases incluem concentrações significativamente baixas de proteases para proteger sua amostra contra a clivagem indesejada de proteínas.