Anticorps secondaires

Protéines A, G et L

La protéine A est dérivée du Staphylococcus aureus. La protéine G est dérivée d'une espèce de Streptococcus. Toutes deux possèdent des sites de liaison pour la partie Fc de l'IgG des mammifères. L'affinité de ces protéines pour l'IgG varie selon l'espèce animale. La protéine G présente une affinité plus élevée pour l'IgG de rat, de chèvre, de mouton et de bovin, ainsi que pour l'IgG1 de souris et l'IgG3 humaine. La protéine A présente une affinité plus élevée pour les IgG de chat et de cobaye (tableau 1). Outre les sites de liaison à la partie Fc des IgG, la protéine G native contient des sites de liaison à l'albumine, à la région Fab des Ig et à la membrane, ce qui peut entraîner une coloration non spécifique. Ces problèmes ont été résolus par la création de formes recombinantes de la protéine. La protéine G recombinante a été modifiée pour éliminer la région de liaison à l'albumine, et la protéine G′ recombinante est une protéine tronquée qui ne possède pas les sites de liaison à l'albumine, au Fab et à la membrane tout en conservant le site de liaison au Fc, ce qui la rend plus spécifique pour les IgG que la forme native.

La protéine L, issue de Peptostreptococcus magnus, présente une affinité pour les chaînes légères kappa (tableau 2) de diverses espèces. Elle permet de détecter les IgG, IgA et IgM monoclonales ou polyclonales, ainsi que les fragments Fab, F(ab′)2 et les fragments Fv à chaîne unique recombinants (scFv) contenant des chaînes légères kappa. Elle se lie également aux IgG de poulet. Remarque : les espèces telles que les bovins, les chèvres, les moutons et les chevaux, dont les Ig contiennent presque exclusivement des chaînes lambda, ne se lieront pas bien, voire pas du tout, à la protéine L.

Réactifs de détection

Les protéines A et G sont utilisées comme réactifs généraux, non spécifiques à une espèce, pour la liaison des anticorps primaires ou des IgG de surface dans les tissus mammifères. La protéine G est recommandée pour la plupart des espèces, y compris la souris et le rat. La protéine A est recommandée pour le chat et le cobaye. Aucune des deux n'est recommandée pour la détection des IgA ou des IgM, pour la détection des fragments Fab, ni pour la détection des IgG aviaires. Lorsqu'elles sont liées à une résine telle que l'agarose, la protéine A et la protéine G peuvent être utilisées pour purifier par affinité les immunoglobulines à partir du sérum ou du liquide d'ascite.

La protéine L est utilisée comme réactif général pour la liaison d'anticorps primaires de mammifères ou d'oiseaux ou d'Ig de surface de toutes les classes. Elle est particulièrement utile pour la détection de fragments Fab, F(ab′)₂ et de fragments scFv recombinants, pour la détection d'Ig liées à des récepteurs Fc, ou pour la détection d'anticorps monoclonaux en présence d'Ig bovines. Son utilisation est limitée à la détection d'Ig portant des chaînes légères kappa.

Résines

La protéine A et la protéine G possèdent des sites de liaison pour la partie Fc des IgG de mammifères. La capacité de ces protéines à se lier aux IgG varie selon les espèces. En général, les IgG ont une affinité plus élevée pour la protéine G que pour la protéine A, et la protéine G peut se lier aux IgG provenant d'une plus grande variété d'espèces. L'affinité des différentes sous-classes d'IgG, en particulier celles de souris et d'origine humaine, pour la protéine A varie davantage que pour la protéine G. La protéine A peut donc être utilisée pour préparer des IgG isotypiquement pures à partir de certaines espèces. La protéine L convient pour isoler des anticorps monoclonaux de souris à partir de surnageants de culture cellulaire sans contamination par des IgG bovines.