Cromatografia liquida a bassa pressione

Cromatografia adsorbente

Conosciuta anche come cromatografia liquido-solido, la cromatografia ad adsorbimento trattiene le sostanze chimiche adsorbendole e desorbendole sulla superficie del supporto, fase stazionaria. L'adsorbente forma la fase stazionaria e il soluto si lega ad essa tramite forze di van der Waal e interazioni steriche. Poiché i siti di adsorbimento si trovano solitamente sulla superficie esterna della fase stazionaria, come fase stazionaria vengono utilizzate particelle relativamente piccole. Silice, allumina, carbone, Florisil, poliammidi, celite e terra diatomacea sono gli adsorbenti comunemente utilizzati.

Cromatografia di partizione

La cromatografia di partizione separa i componenti distribuendoli tra due liquidi immiscibili. Uno è la fase mobile liquida, mentre l'altro è il liquido trattenuto in modo stazionario su un supporto solido. I materiali utilizzati come supporto solido includono gel di silice, terra diatomacea, cellulosa, politetrafluoroetilene (PTFE) e polistirene. Il supporto solido inerte fornisce un'ampia superficie per la fase stazionaria liquida.

Cromatografia di affinità

La cromatografia di affinità separa i costituenti mediante interazioni selettive e reversibili, come le coppie anticorpo-antigene, enzima-substrato o ormone-recettore, con uno degli agenti interagenti come fase stazionaria. Il "ligando di affinità" è la specie interagente immobilizzata su un supporto solido come perline acriliche, agarosio e resine Toyopearl, e funge da fase stazionaria per la colonna di affinità.

Cromatografia di filtrazione su gel

Conosciuta anche come cromatografia a esclusione dimensionale, separa molecole di dimensioni diverse, come proteine di varie dimensioni e forme oligomeriche. La fase stazionaria è una resina costituita da una matrice reticolata di perle contenenti pori di dimensioni specifiche. Le colonne di filtrazione su gel contengono perle di poliacrilammide, agarosio, destrano o una miscela di questi. Isola gli analiti più piccoli fornendo accesso parziale o totale al volume dei pori all'interno delle particelle di riempimento della colonna.

Cromatografia a interazione idrofobica (HIC)

La cromatografia a interazione idrofobica (HIC) separa le biomolecole in base alle differenze nella loro idrofobicità superficiale. Si basa sull'interazione di gruppi idrofobici non polari legati alla resina della colonna, come butile, ottile o fenile, con i gruppi idrofobici presenti sulle biomolecole. È ampiamente utilizzata per separare le proteine preservandone l'attività biologica, poiché utilizza condizioni e matrici meno denaturanti.

Cromatografia a scambio ionico (IEX)

La cromatografia a scambio ionico separa le molecole in base alle differenze nelle loro cariche superficiali nette. La superficie della matrice, come cellulosa, silice o stirene-divinilbenzene, è legata covalentemente a gruppi funzionali carichi. I gruppi di scambio ionico immobilizzati nella resina interagiscono con molecole che hanno cariche opposte. Nella cromatografia a scambio cationico, le specie caricate positivamente nella fase mobile si legano a una resina a scambio ionico caricata negativamente. Nella cromatografia a scambio anionico, le specie caricate negativamente nella fase mobile si legano alle cariche positive sulla resina a scambio ionico.

Sistema di cromatografia liquida a bassa pressione

Un sistema di cromatografia liquida a bassa pressione (LPLC) è tipicamente costituito da una colonna riempita con una fase stazionaria per la separazione, una pompa per erogare la fase mobile attraverso la colonna a portate controllate e un rilevatore per misurare l'eluente all'uscita dalla colonna.
I sistemi LPLC sono inoltre dotati di un sistema di iniezione per introdurre il campione nel flusso della fase mobile, garantendo un'introduzione precisa e riproducibile del campione. Alcune configurazioni includono un raccoglitore di frazioni per raccogliere i componenti separati per ulteriori analisi.