[Passa al contenuto](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it) Prodotti Carrello0 CHIT Prodotti ProdottiApplicazioniServiziRisorseSupporto [Login / Registrati](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Ricerca di ordini](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/order-lookup) [Ordine rapido](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/quick-order) Carrello0 [Home](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it)[Applicazioni](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/applications)[Genomica](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/applications/genomics)Applicazioni della reazione a catena della polimerasi # Applicazioni della reazione a catena della polimerasi (PCR)  La reazione a catena della polimerasi (PCR) è una potente tecnica di biologia molecolare di base che rappresenta un metodo efficiente e rapido *in vitro* per l'amplificazione enzimatica di specifiche sequenze di DNA o RNA da varie fonti. Una PCR standard consiste in un DNA bersaglio, una serie di primer oligonucleotidici sintetici che affiancano la sequenza di DNA bersaglio, una DNA polimerasi termostabile (di solito la Taq polimerasi) e nucleotidi. Utilizzando i termociclatori, ogni ciclo di amplificazione prevede tre fasi: la denaturazione del DNA a doppio filamento (dsDNA) in DNA a singolo filamento separato, l'annealing dei primer sulla sequenza di DNA bersaglio e l'estensione, in cui la DNA polimerasi estende il DNA dai primer, creando un nuovo dsDNA con un filamento vecchio e un filamento nuovo. I filamenti sintetizzati in un ciclo servono come modello nel successivo, con il risultato di aumentare di milioni di volte la quantità di DNA in soli 20 cicli. * * * ## Prodotti correlati Slide 1 of 9 1 of 2 [ \ Roche \ RNAINH-RO \ Protettore inibitore di RNasi](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/product/roche/rnainhro) Visualizzazione rapida [ \ Sigma-Aldrich \ AMPD1 \ DNase I](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/product/sigma/ampd1) Visualizzazione rapida [ \ Sigma-Aldrich \ RDRT \ ReadyScript® cDNA Synthesis Mix](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/product/sigma/rdrt) Visualizzazione rapida [ \ Sigma-Aldrich \ STR1 \ Enhanced Avian First Strand Synthesis Kit](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/product/sigma/str1) Visualizzazione rapida [ \ Roche \ FSUPMMRO \ Sonda Universale Master FastStart (Rox)](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/product/roche/fsupmmro) Visualizzazione rapida [ \ Roche \ FSUSGMMRO \ Master mix FastStart Universal SYBR Green Master (Rox).](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/product/roche/fsusgmmro) Visualizzazione rapida [ \ Roche \ FSSGMMRO \ Master mix Fast Start SYBR Green](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/product/roche/fssgmmro) Visualizzazione rapida [ \ Roche \ FSTMPMMRO \ FastStart TaqMan® Probe Master](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/product/roche/fstmpmmro) Visualizzazione rapida [ \ Roche \ EAGLETMMRO \ EagleTaq Universal Master Mix (ROX)](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/product/roche/eagletmmro) Visualizzazione rapida * * * ## Categorie in evidenza [](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/products/molecular-biology-and-functional-genomics/cloning-and-expression/molecular-cloning-and-protein-expression) [Clonazione molecolare ed espressione di proteine](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/products/molecular-biology-and-functional-genomics/cloning-and-expression/molecular-cloning-and-protein-expression) Metodi di clonazione molecolare e di espressione proteica e protocolli per il clonaggio affidabile e l'espressione robusta di proteine da vettori di espressione proteica di insetti, batteri e mammiferi. 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Elimina la necessità del noioso processo di purificazione dell'mRNA richiesto dalle tecniche di clonazione convenzionali. Con la RT-PCR, oltre ai reagenti standard della PCR, si utilizzano la trascrittasi inversa e un campione di RNA. La miscela di reazione viene riscaldata a 37 ˚C, il che consente la produzione di copie di cDNA complementari dal campione di RNA da parte della trascrittasi inversa. Questo cDNA si annealizza quindi a uno dei primer, portando alla sintesi del primo filamento. Da qui segue la PCR standard che genera il dsDNA. La RT-PCR è spesso combinata con la PCR in tempo reale (qPCR), ampiamente utilizzata per la quantificazione dei livelli di trascrizione in cellule e tessuti. ## Hot Start PCR Hot Start PCR è una tecnologia che inibisce l'avvio a caldo della Taq polimerasi o l'incorporazione di dNTP modificati durante la preparazione della reazione fino a quando non si verifica una fase di attivazione termica. Sono disponibili vari metodi per arrestare l'attività della polimerasi ad avvio caldo, tra cui la modifica chimica, i metodi mediati da anticorpi e aptameri.  ## Endpoint PCR per l'amplificazione di target lunghi e accurati Endpoint PCR è spesso utilizzata per rilevare la presenza di target e l'abbondanza relativa al termine della reazione. La lunghezza limitata delle sequenze prodotte durante la PCR standard, circa 5 kb, viene in parte superata con l'incorporazione di fattori aggiuntivi che forniscono attività di "correzione". La PCR lunga e accurata (LA) incorpora l'uso di una seconda polimerasi termostabile con esonucleasi 3′→5′ per riparare le scorrettezze nucleotidiche terminali, ottenendo una fedeltà significativamente maggiore e la capacità di amplificare bersagli di DNA fino a 40 kb di lunghezza. [](https://www.sigmaaldrich.com/documents-search) [Cercate informazioni più specifiche?](https://www.sigmaaldrich.com/documents-search) Visita la nostra ricerca di documenti per schede tecniche, certificati e documentazione tecnica. [Trova i documenti](https://www.sigmaaldrich.com/documents-search) ## Articoli correlati - [Troubleshooting PCR and RT-PCR Amplification](https://www.sigmaaldrich.com/CH/en/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/troubleshooting-pcr-and-rt-pcr-amplification) This page shows PCR and RT-PCR amplification troubleshooting. - [Digital PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CH/en/technical-documents/protocol/genomics/pcr/digital-pcr) Digital PCR enables absolute quantification and detection of minority sequences against similar majority sequences, such as somatic mutations. - [Ethidium Bromide](https://www.sigmaaldrich.com/CH/en/technical-documents/technical-article/genomics/nucleic-acid-labeling-and-detection/ethidium-bromide) Ethidium bromide is a well-known and widely used fluorescent dye in biotechnology research. - [Polymerase Chain Reaction](https://www.sigmaaldrich.com/CH/en/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/polymerase-chain-reaction) Polymerase chain reaction is one of the most widely used techniques in molecular biology with 3 main steps: denature, anneal, and extend. - [Hot Start PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CH/en/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/hot-start-pcr) The purpose of Hot Start PCR is to inhibit the PCR reaction in order to reduce nonspecific amplification, prevent the formation of primer dimers, and increase product yields. - [Vedi tutti (61)](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) ## Protocolli correlati - [Protocollo standard per la PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CH/it/technical-documents/protocol/genomics/pcr/standard-pcr) Impara le fasi standard del protocollo PCR e consulta gli elenchi dei reagenti o i parametri di ciclo. 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