Clonazione molecolare ed espressione proteica
Lo scopo della clonazione molecolare è quello di inserire il gene di interesse (GOI) in un vettore plasmidico, un frammento circolare di DNA che contiene vari elementi volti a facilitare la clonazione, la selezione dei cloni e l'espressione proteica. I ricercatori utilizzano spesso enzimi di restrizione del DNA e ligasi per inserire il GOI in fase all'interno del vettore di espressione per la successiva espressione proteica. Questo vettore viene quindi inserito in una cellula che esprimerà la proteina codificata dal GOI oppure l'espressione proteica viene realizzata utilizzando sistemi di sintesi proteica senza cellule.
Una volta che la proteina è stata espressa, è possibile studiarne la funzione in quanto influisce sulla segnalazione cellulare, sulla morfologia o su altri aspetti all'interno della cellula. In alternativa, la proteina può essere espressa in grandi quantità, purificata e utilizzata in numerose applicazioni a valle. Per ulteriori informazioni, esplora la nostra offerta completa di reagenti e risorse affidabili disponibili per l'intero flusso di lavoro di clonazione ed espressione per sistemi di espressione proteica di insetti, batteri e mammiferi.
Prodotti
Enzimi che modificano l'RNA e il DNA
Durante la clonazione molecolare, i ricercatori utilizzano frequentemente enzimi di restrizione per tagliare il DNA e altri enzimi, come quelli che modificano RNA e DNA, per aggiungere, rimuovere o alterare gruppi chimici sugli acidi nucleici. Per soddisfare le diverse esigenze di ricerca, offriamo una gamma completa di questi enzimi essenziali, tra cui fosfatasi alcalina, proteasi, RNA polimerasi T7, pirofosfatasi, ribonucleasi A e DNA ligasi T4. I nostri reagenti, combinati con tamponi appositamente formulati, contribuiscono a garantire un'elevata efficienza e affidabilità nella manipolazione del DNA e dell'RNA.
Sistema Novagen® pET, vettori Simplicon® e sistemi di espressione proteica UCOE®
I nostri vettori di espressione in E. coli, insetti e mammiferi semplificano la selezione dei trasformanti positivi. Alcuni prodotti di spicco includono:
- Il sistema Novagen® pET è riconosciuto come il gold standard per la clonazione e l'espressione di proteine ricombinanti in sistemi batterici.
- Il sistema di espressione proteica in vivo Simplicon® offre un sistema di espressione basato su RNA sintetico, autoreplicante, regolabile e senza integrazione genomica. L'espressione Simplicon® genera un'espressione proteica immediata e altamente sostenuta di più geni in cellule umane trasfettate senza il rischio di integrazione genomica.
- La tecnologia del vettore di espressione Ubiquitous Chromatin Opening Element UCOE® consente di ottenere grammi di proteine in meno di 30 giorni in cellule di mammiferi trasfettate in modo stabile. La tecnologia di espressione UCOE® impedisce il silenziamento del transgene e garantisce un'espressione genica più coerente, stabile e di livello superiore (fino a 20 volte) rispetto ai vettori convenzionali, indipendentemente dal sito di integrazione cromosomica.
Reagenti per la trasformazione di batteri e lieviti
La trasformazione batterica comporta l'inserimento di DNA estraneo nei batteri utilizzando metodi quali lo shock termico e l'elettroporazione. Il nostro portafoglio di cellule competenti è progettato per un'espressione ottimale di plasmidi e proteine, anche in condizioni sperimentali difficili. Tra i prodotti di punta figurano:
- Le cellule competenti NovaBlue® sono ottimizzate per l'efficienza e la conservazione dei plasmidi, favorendo una preparazione superiore delle librerie e la stabilità dei plasmidi.
- I sistemi Rosetta™, Origami™ e Overnight Express™ migliorano il corretto ripiegamento delle proteine e aumentano la solubilità o l'espressione delle proteine citotossiche.
Per la trasformazione del lievito, forniamo protocolli semplici e prodotti scalabili che si integrano perfettamente nei flussi di lavoro di espressione proteica.
Per la ricerca sulle cellule di mammifero, consulta la nostra pagina Trasfezione per ulteriori opzioni.
Vettori plasmidici da BCCM/GeneCorner
Scoprite la nostra offerta ampliata di vettori plasmidici di BCCM/GeneCorner, un archivio di plasmidi unico e certificato ISO, ospitato dal Dipartimento di Biologia Molecolare Biomedica della Facoltà di Scienze dell’Università di Gand (UGent). Questa collezione diversificata include una varietà di plasmidi per la clonazione e l’espressione di proteine ricombinanti in una vasta gamma di organismi bersaglio, a supporto della ricerca modernizzata nel campo della biologia molecolare e proteica.
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Risorse correlate
- Brochure: Molecular Essentials Guide
Learn how our comprehensive molecular tools and reagents provide precise, ready-to-use solutions for your workflows.
- Article: Cell-Free Protein Synthesis or Expression
Cell-free protein synthesis rapidly produces recombinant proteins without cells, utilizing translation machinery from different cell types for efficiency.
- Article: Competent Cell Selection & E. coli Markers Guide
Select competent cells by application, transformation efficiency, and genotype. We also present a list of E. coli markers for reference.
- Article: Simplicon™ in vivo Protein Expression System
Simplicon: A non-genome integrating, tunable and sustained protein expression system in human cells, based on a single, polycistronic, and self-replicating synthetic RNA.
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