Anticorpi secondari

Proteine A, G e L

La proteina A deriva dallo Staphylococcus aureus. La proteina G deriva da una specie di Streptococcus. Entrambe presentano siti di legame per la porzione Fc delle IgG dei mammiferi. L'affinità di queste proteine per le IgG varia a seconda della specie animale. La proteina G presenta un'affinità maggiore per le IgG di ratto, capra, pecora e bovino, nonché per le IgG1 di topo e le IgG3 umane. La proteina A ha una maggiore affinità per le IgG di gatto e cavia (Tabella 1). Oltre ai siti di legame con la porzione Fc delle IgG, la proteina G nativa contiene siti di legame per l'albumina, la regione Fab delle Ig e regioni di legame con la membrana, che possono portare a una colorazione non specifica. Questi problemi sono stati risolti creando forme ricombinanti della proteina. La proteina G ricombinante è stata ingegnerizzata per eliminare la regione di legame con l'albumina, mentre la proteina G′ ricombinante è una proteina troncata priva dei siti di legame con l'albumina, il Fab e la membrana, pur conservando il sito di legame Fc, il che la rende più specifica per le IgG rispetto alla forma nativa.

La proteina L, derivata dal Peptostreptococcus magnus, presenta un’affinità per le catene leggere kappa (Tabella 2) di varie specie. È in grado di rilevare IgG, IgA e IgM monoclonali o policlonali, nonché frammenti Fab, F(ab′)2 e Fv a catena singola ricombinante (scFv) che contengono catene leggere kappa. Si lega inoltre alle IgG di pollo. Nota: specie quali bovini, caprini, ovini e equini, le cui Ig contengono quasi esclusivamente catene lambda, non si legano bene, se non del tutto, alla proteina L.

Reagenti di rilevamento

Le proteine A e G sono utilizzate come reagenti generici, non specifici per specie, per il legame degli anticorpi primari o delle IgG di superficie nei tessuti dei mammiferi. La proteina G è raccomandata per la maggior parte delle specie, compresi topi e ratti. La proteina A è raccomandata per gatti e porcellini d'India. Nessuna delle due è raccomandata per il rilevamento di IgA o IgM, per il rilevamento di frammenti Fab o per il rilevamento di IgG aviarie. Quando legate a una resina come l'agarosio, la proteina A e la proteina G possono essere utilizzate per la purificazione per affinità delle immunoglobuline dal siero o dal liquido ascitico.

La proteina L è utilizzata come reagente generico per il legame di anticorpi primari di mammiferi o avicoli o di Ig di superficie di tutte le classi. È particolarmente utile per il rilevamento di Fab, frammenti F(ab′)₂ e frammenti scFv ricombinanti, per il rilevamento di Ig legate a recettori Fc o per il rilevamento di anticorpi monoclonali in presenza di Ig bovine. L'uso è limitato al rilevamento di Ig che presentano catene leggere kappa.

Resine

La proteina A e la proteina G presentano siti di legame per la porzione Fc delle IgG dei mammiferi. La capacità di queste proteine di legare le IgG varia a seconda della specie. In generale, le IgG hanno un'affinità maggiore per la proteina G rispetto alla proteina A, e la proteina G è in grado di legare IgG provenienti da una più ampia varietà di specie. L'affinità delle varie sottoclassi di IgG, in particolare quelle di topo e umane, per la proteina A varia maggiormente rispetto a quella per la proteina G. La proteina A può quindi essere utilizzata per preparare IgG isotipicamente pure da alcune specie. La proteina L è adatta per isolare anticorpi monoclonali di topo dai supernatanti di colture cellulari senza contaminazione da IgG bovine.