Nucleasi (DNasi e RNasi)

Endonucleasi di restrizione

Nucleasi per la digestione di DNA e RNA 

Le nostre nucleasi variano per specificità di clivaggio e per proprietà come il pH ottimale, consentendo allo sperimentatore di scegliere l'enzima digestivo più adatto alle esigenze sperimentali.La deossiribonucleasi I da fonti di mammifero, ad esempio, produce prodotti con il terminale 5' P1 da Penicillium citrinum - degrada il DNA e l'RNA a singolo filamento, ma non il DNA a doppio filamento. La ribonucleasi A idrolizza l'RNA che contamina campioni di proteine o preparazioni di DNA plasmidico. Molti di questi enzimi hanno altri usi in biologia molecolare. Ad esempio, la DNasi I "intacca" il DNA per consentire l'incorporazione di basi marcate. La RNasi A è uno strumento del saggio di protezione RNasi che misura l'abbondanza di specifici mRNA.

Desossiribonucleasi I e Deossiribonucleasi II DNase Enzimi<

La deossiribonucleasi I catalizza il clivaggio endonucleolitico del DNA a doppio e singolo filamento per ottenere i prodotti finali 5'-fosfodinucleotide e 5'-fosfoligonucleotide. Il prodotto dell'idrolisi è una miscela complessa di mononucleotidi e oligonucleotidi 5'-fosfati. In presenza di ioni magnesio, la DNasi I attacca ciascun filamento di DNA in modo indipendente e i siti di clivaggio sono casuali. In presenza di manganese (II), la DNasi I taglia entrambi i filamenti di DNA approssimativamente nello stesso sito. La maggior parte dei protocolli utilizza lo ione magnesio con la DNasi I, ma per scopi specifici si utilizza il manganese. Inoltre, la desossiribonucleasi II catalizza la scissione endonucleolitica del DNA a doppio e singolo filamento per produrre nucleosidi 3'-fosfati e prodotti finali 3'-fosfoligonucleotidi. L'intervallo di pH per l'attività è compreso tra 4,0 e 6,5, con solo il 15% circa a pH 6,5, con un optimum a pH 5,0. La stabilità ottimale dell'enzima è a pH 5 - 5,5, con una rapida inattivazione a pH 8,5 e a 30 °C. Offriamo un'ampia collezione di enzimi DNasi per supportare una varietà di tipi di campioni e applicazioni. Sia in forma liofilizzata che liquida, alcune delle nostre DNasi includono concentrazioni significativamente basse di RNasi o proteasi per proteggere il campione da digestioni indesiderate.

Ribonucleasi A, Ribonucleasi H, e Ribonucleasi T₁ RNase Enzimi

La ribonucleasi A catalizza la scissione endonucleolitica dell'RNA per produrre nucleosidi 3'-fosfati e 3'-fosfoligonucleotidi terminanti in Cp o Up. Gli attivatori della RNasi A includono sali di potassio e di sodio. La temperatura ottimale per l'attività è 60 °C, anche se l'enzima mostra attività a partire da 15-70 °C. Il pH ottimale è 7,6, con un intervallo di attività da 6 a 10. L'attività più elevata si manifesta con RNA a singolo filamento. L'RNasi A è un enzima molto stabile e può resistere a temperature fino a 100 °C. A 100 °C, la RNasi A è più stabile tra pH 2,0 e 4,5. La ribonucleasi H idrolizza specificamente i legami fosfodiestere dell'RNA nei duplex RNA:DNA per generare prodotti con estremità 3'-idrossile e 5'-fosfato. Inoltre, la ribonucleasi T₁ catalizza la scissione endonucleolitica in due fasi dell'RNA per produrre nucleosidi 3'-fosfati e 3'-fosfoligonucleotidi che terminano principalmente in Gp. Nella reazione, la scissione avviene tra il gruppo 3'-fosfato di un ribonucleotide guanidinico e il 5'-idrossile del nucleotide adiacente. Il prodotto iniziale è un nucleoside fosfato ciclico 2':3' che viene idrolizzato al corrispondente 3'-nucleoside fosfato. In soluzione, è resistente al calore (100 °C per 10 minuti a pH 6) e agli acidi, ma instabile in soluzione alcalina (pH 9). Si noti che la reazione catalizzata dall'enzima non può essere arrestata riscaldando la miscela di reazione a 100 °C. Offriamo un'ampia collezione di enzimi RNasi, per supportare la varietà di tipi di campioni e applicazioni. Che siano liofilizzate o in forma liquida, alcune delle nostre RNasi includono concentrazioni significativamente basse di proteasi per proteggere il campione da una scissione proteica indesiderata.