Recuento celular y análisis de salud

Recuento celular manual

Las cámaras de recuento celular, como el hemocitómetro con rejillas de Neubauer, son dispositivos habituales para el recuento celular manual o visual. Se introduce una pequeña alícuota de suspensión celular en la cámara de un dispositivo de vidrio pulido con precisión y provisto de rejillas, donde se dispersa sobre la rejilla grabada por acción capilar. Las células se observan al microscopio y se cuentan utilizando un contador manual. El volumen predefinido de la cámara y el sistema de rejillas se utilizan para calcular la concentración celular. Existen sistemas basados en imágenes que automatizan el proceso de recuento.

Recuento celular automatizado

Muchos dispositivos de recuento celular automatizado utilizan los mismos colorantes y principios de recuento visual que se emplean en la hemocitometría. A diferencia de los contadores celulares automatizados que se basan en el reconocimiento de objetos, los dispositivos basados en el principio de Coulter han ganado popularidad por su facilidad de uso y precisión. Los contadores de Coulter bombean suspensiones celulares a través de un sensor que detecta las células basándose en un cambio en la resistencia eléctrica. Esto permite una detección más fiable de las células, incluso de las más pequeñas, y recuentos celulares de alta precisión. Los modelos portátiles que se manejan con la mano (similares a una pipeta) permiten realizar recuentos celulares directamente desde la campana de cultivo.

Ensayos de viabilidad celular

Síntesis de ADN: La monitorización de la síntesis activa de ADN en las células constituye la base de algunos ensayos de proliferación celular. La replicación del ADN puede medirse mediante la incorporación de nucleósidos modificados, como la 3H-timidina radiactiva o la bromodesoxiuridina (BrdU) no radiactiva, que se detecta con un anticuerpo.

Actividad metabólica: Los ensayos calorimétricos que miden la actividad metabólica son adecuados para analizar la proliferación celular, la viabilidad celular y la citotoxicidad. La reducción de sales de tetrazolio, como el MTT, el XTT y el WST-1, a compuestos de formazán coloreados solo se produce en células metabólicamente activas. La presencia de ATP también es un indicador de actividad metabólica. En el ensayo reportero con luciferasa de luciérnaga, el ATP producido por las células en división se utiliza para oxidar la D-luciferina, lo que genera una luz bioluminiscente como resultado.

Exclusión de colorante: La tinción con azul de tripano se utiliza habitualmente para el recuento de células viables. Este método se basa en el principio de que las células vivas no absorben el colorante, mientras que las células muertas sí lo absorben y aparecen azules al microscopio.

Ensayos fluorescentes de viabilidad celular: el marcaje con 5(6)-carboxifluoresceína diacetato N-succinimidil éster (CFSE) es una opción muy utilizada para medir el número de ciclos de división celular completados en una población celular. Otro colorante permeable a la membrana, la calceína-AM, no es fluorescente por sí mismo, pero emite una intensa fluorescencia verde una vez que se hidroliza en una célula viable. Por el contrario, el colorante nuclear yoduro de propidio (PI) solo puede llegar al núcleo atravesando la membrana dañada de las células muertas. Dado que tanto la calceína como el PI-ADN pueden excitarse con luz de 490 nm, es posible realizar un seguimiento simultáneo de células vivas y muertas con un microscopio de fluorescencia de excitación única.