Concentración de proteínas y cambio de tampones

Concentración de proteínas

Existen diversos métodos para la concentración de proteínas, entre ellos, la filtración con membranas de filtración porosas, la diálisis en disoluciones hiperosmóticas y la precipitación con o sin sal. La ultrafiltración proporciona un método cómodo en el que se utilizan membranas semipermeables para concentrar las proteínas a presión o fuerza centrífuga con desnaturalización, desactivación y degradación mínima de las proteínas. Utilizando esta técnica, el exceso de líquido atraviesa el filtro mientras que la proteína deseada es retenida, aumentando así la concentración proteica al disminuir el volumen de la muestra. 

Enriquecimiento proteico

En el enriquecimiento proteico, se concentran grupos o tipos específicos de proteínas en una muestra biológica para su ulterior análisis. Los métodos de enriquecimiento de proteínas se utilizan para aislar proteínas poco abundantes y reducir la complejidad de la muestra. En el enriquecimiento se separan y concentran las proteínas deseadas para mejorar el análisis proteómico consecutivo. La ultrafiltración suele utilizarse en el enriquecimiento de proteínas para separar las clases de proteínas en función de su peso molecular.

Cambio de tampones y desalado

Las proteínas purificadas a menudo tienen que ser transferidas a un tampón adecuado para su posterior análisis. El cambio de tampones, el desalado y la eliminación de detergentes pueden llevarse a cabo utilizando métodos como:

• Diálisis: Moléculas permeables pequeñas como las sales, los detergentes, los disolventes y otras impurezas se eliminan en función de su capacidad para atravesar una membrana.
• Cromatografía en columna: Las sales se eliminan utilizando columnas de filtración en gel en las que se emplea la exclusión por tamaño para la separación .
• Diafiltración: Las sales, los detergentes y otras impurezas se eliminan en función de su tamaño molecular utilizando membranas de ultrafiltración porosas a presión o fuerza centrífuga.