[Přejít k obsahu](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs) Produkty Nákupní košík0 CZCS Produkty ProduktyAplikaceSlužbyZdrojePodpora [Přihlášení / Registrovat se](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Dohledání objednávky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/order-lookup) [Rychlá objednávka](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/quick-order) Nákupní košík0 [Domů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs)[Průtoková cytometrie](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/applications/protein-biology/flow-cytometry)Průvodce průtokovou cytometrií # Průvodce průtokovou cytometrií Průtoková cytometrie je laboratorní technika, která se používá k analýze buněk. Přehled základů průtokové cytometrie, metod imunodetekce, klíčových kroků protokolu průtokové cytometrie a správných kontrol pomáhá zajistit přesnou průtokovou cytometrickou analýzu. Čtěte dále a odhalte tipy, díky nimž bude váš příští experiment s průtokovou cytometrií úspěšný. - [Co je průtoková cytometrie?](https://www.sigmaaldrich.com#whatis) - [Jak to funguje](https://www.sigmaaldrich.com#howit) - [Součásti tradičního průtokového cytometru](https://www.sigmaaldrich.com#componentsof) - [Imunodetekce průtokovou cytometrií](https://www.sigmaaldrich.com#immunodetekce) - [Klíčové kroky protokolu průtokové cytometrie](https://www.sigmaaldrich.com#keyflow) - [Vhodné kontroly](https://www.sigmaaldrich.com#proper) ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Co je to průtoková cytometrie? Průtoková cytometrie je výkonná technika pro charakterizaci a/nebo třídění heterogenních suspendovaných buněčných populací na základě jejich fyzikálních a fluorescenčních vlastností. Lze ji považovat za formu jednobuněčné analýzy, protože průtoková cytometrie se dobře hodí pro experimenty, kde jsou požadovány kvantitativní informace na úrovni jedné buňky pro velké množství buněk současně. Lze tak získat informace o počtu buněk daného typu a množství specifického proteinu v buňce. Mezi výhody průtokové cytometrie patří rychlá analýza, upozornění na rozdíly v subpopulacích buněk při zkoumání heterogenních buněčných populací a analýza subpopulací heterogenních buněčných populací. Průtoková cytometrie se běžně používá v imunofenotypizačních a imunoonkologických výzkumných aplikacích k analýze hematologických rozdílů v krvi, kostní dřeni a dalších typech vzorků. ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Jak to funguje Průtoková cytometrie funguje tak, že se spoléhá na hydrodynamické zaostření vzorku buněčné suspenze, čímž se vytvoří proud jednotlivých buněk, který prochází před laserem. Způsob, jakým buňka rozptyluje dopadající světlo, se používá k určení velikosti a vnitrobuněčné složitosti buněk rychlostí tisíců částic za sekundu. Vytvořená analogová data se poté převedou na digitální údaje, které lze kvantifikovat a vykreslit. Z průtokových cytometrických měření lze definovat specifické populace buněk a podskupiny v rámci těchto buněk a fyzicky je izolovat pomocí třídění buněk, kdy se na základě fluorescenčních charakteristik manipuluje s buněčným nábojem, aby bylo možné elektrostaticky vychýlit částice. Přesnější identifikace subpopulací vyžaduje použití sond. Touto technikou lze také analyzovat adherentní buňky a pevné tkáně, pokud je lze úspěšně disociovat a vytvořit tak suspenzi jednotlivých buněk.  __Obrázek 1.__Schéma typické průtokové cytometrické analýzy. ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Komponenty tradičního průtokového cytometru Pro průtokovou cytometrickou analýzu jsou i základní jednolaserové průtokové cytometry obvykle vybaveny minimálně dostatečným počtem filtrů, které umožňují detekci čtyř fluoroforů současně. A v současné době je možné v rámci jednoho experimentu rozlišit až 18 vlnových délek světla. Mezi součásti tradičního průtokového cytometru patří: ### Fluidika pro zpracování vzorků a třídění buněk - Průtoková komora: Buňky ve vzorku jsou hydrodynamicky soustředěny a předloženy laseru. ### Optika pro detekci fluorescence - Světlo se pohybuje přes systém zrcadel a filtrů. - Buňky lze měřit na základě jejich velikosti, vnitřní složitosti a intenzity signálu. ### Elektronika pro zpracování signálů, počítačové zobrazení a analýzu - Fotonásobič převádí světlo na elektrické signály. - Signál je zesílen a digitalizován. ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Imunodetekce průtokovou cytometrií Stejně jako u jiných aplikací imunodetekce existuje několik přístupů k použití protilátek k sondování specifických buněčných částí pomocí průtokové cytometrie. Běžně se používají dvě hlavní metody: přímá detekce a nepřímá detekce. ### Přímá detekce Přímá detekce se vztahuje na proces barvení v jednom kroku, při kterém se používá primární protilátka, která se specificky váže na epitop zájmu a která je přímo konjugována s molekulou, jež umožňuje vizualizaci nebo jinou detekci vazebného děje. Při sondování antigenů lokalizovaných na povrchu buněk se nedoporučuje fixace buněk, protože tento proces znemožňuje přístup k antigenům, které jsou předmětem zájmu, sondám protilátek. Proto je důležité udržovat nefixované buňky životaschopné až do ukončení sběru dat. Chcete-li najít protilátky pro přímou detekci, [vyhledejte náš nástroj Antibody Explorer](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/protein-biology/antibodies#explorer) nastavením vyhledávání v rámci "Pouze primární protilátky" a výběrem aplikace "průtoková cytometrie". ### Přímá detekce Při metodě nepřímé detekce následuje inkubace s purifikovanou protilátkou umožňující vazbu na zájmový antigen, po které následuje sekundární protilátka konjugovaná s fluoroforem specifickým pro izotyp hostitelské primární protilátky, čímž se vytvoří primárně-fluoreskující lešení sekundární protilátky. Zvýšené modularity v knihovně protilátek lze dosáhnout použitím purifikovaných primárních protilátek a sekundárních protilátek konjugovaných s fluoroforem v různých vlnových délkách (nebo barvách) a specifických pro hostitelské izotypy, v nichž jsou primární protilátky chovány. Chcete-li najít protilátky pro nepřímou detekci, vyhledejte v tabulce produktů na naší [straně Sekundární protilátky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/protein-biology/antibodies/secondary-antibodies) a vyfiltrujte techniku na "průtoková cytometrie". Zjistěte více o detekci fluorochromů v průtokové cytometrii s našimi průvodci na [.výběr správného fluorochromu](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/protein-biology/flow-cytometry/how-to-select-flow-cytometry-dyes) pro váš experiment průtokové cytometrie a [sestavení optimálního panelu pro vícebarevnou analýzu](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/protein-biology/flow-cytometry/multicolor-flow-cytometry-tips).  __Obrázek 2.__Metody přímé detekce vs. nepřímé detekce pro průtokovou cytometrii. ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Klíčové kroky protokolu průtokové cytometrie Čtyři hlavní kroky protokolů průtokové cytometrie jsou:   - __Příprava vzorku:__ Jednobuněčné suspenze by měly být připraveny pomocí metod mechanické disociace a technik oddělování, například pomocí enzymatických roztoků nebo činidel pro chelataci vápníku. - __Blokování:__ Na suspendované buňky se obvykle aplikuje ředění protilátky anti-Fc, aby se zabránilo nespecifické vazbě primární protilátky. - __Inkubace protilátek:__ Inkubace při průtokové cytometrii může zahrnovat různé komponenty, jako jsou primární protilátky, sekundární protilátky, streptavidin a fluorochromy. - __Sběr dat:__ Většina průtokových cytometrů je doplněna potřebným softwarem pro získávání a transformaci signálů z charakteristik buněk. Uživatel pak nastaví specifické parametry softwaru pro svůj experiment. Podrobnější informace o těchto krocích naleznete v našem [článku Klíčové kroky v protokolu průtokové cytometrie](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/protocol/protein-biology/flow-cytometry/key-steps-in-flow-cytometry-protocols), nebo si prohlédněte tipy pro řešení problémů v našem [Průvodce řešením problémů průtokové cytometrie](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/protein-biology/flow-cytometry/flow-cytometry-troubleshooting-guide). ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Vhodné kontroly Kromě zájmových buněk by měl každý experiment průtokové cytometrie obsahovat následující kontroly: - Aspoň jeden nebarvený vzorek, který byl inkubován s pufrem v každém kroku současně s testovanými vzorky, aby se optimalizovaly průtokové rychlosti a napětí v experimentu. - Vhodný negativní kontrolní vzorek, který bude identický s testovanými vzorky s výjimkou nahrazení primární protilátky izotypovou kontrolou, která je vypěstována ve stejném hostitelském druhu jako primární protilátka. Tím se kontroluje nespecifická vazba sekundární protilátky. Chcete-li najít izotypové kontroly, projděte si tabulku na naší [Stránce protilátek pro průtokovou cytometrii](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/protein-biology/antibodies/flow-cytometry-antibodies). V tabulce můžete vyhledávat podle klíčového slova, například "kontrola". - Pokud je to možné, je k dispozici pozitivní kontrola, která se skládá z buněk, o nichž je známo, že exprimují každý antigen, který vás zajímá, koinkubovaných s testovanými vzorky a testovaných pouze jednou barvou. ## Související produkty Litujeme, vyskytla se neočekávaná chyba. Response not successful: Received status code 500 __Související články__ - [How to Choose a Secondary Antibody](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/technical-article/protein-biology/western-blotting/secondary-antibody-selection) - [Průvodce protokolem: Imunofluorescenční barvení celých organoidů pomocí protilátek](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/protocol/cell-culture-and-cell-culture-analysis/3d-cell-culture/organoid-antibody-staining) - [Multicolor Flow Cytometry | Tips for Building Flow Cytometry Panels](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/technical-article/protein-biology/flow-cytometry/multicolor-flow-cytometry-tips) - [Flow Cytometry Troubleshooting Guide](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/technical-article/protein-biology/flow-cytometry/flow-cytometry-troubleshooting-guide) - [Prestige Antibody® Immunofluorescence](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/protocol/protein-biology/flow-cytometry/immunofluorescence-procedure) - [Klíčové kroky v protokolech průtokové cytometrie](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/protocol/protein-biology/flow-cytometry/key-steps-in-flow-cytometry-protocols) - [Zobrazit více](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) __Související kategorie výrobků__ - [Protilátky pro průtokovou cytometrii](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/protein-biology/antibodies/flow-cytometry-antibodies) - [Rekombinantní protilátky pro výzkumné účely](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/protein-biology/antibodies/zoomab-antibodies) - [Sekundární protilátky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/protein-biology/antibodies/secondary-antibodies) Nejvyšší __Chcete-li pokračovat, musíte se přihlásit.__ Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet. Přihlásit__Nemáte účet?__Registrovat Toto je strojově přeložená stránka. Podpora[Zákaznická podpora](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/support/customer-support)[Kontaktujte nás](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/collections/offices)[ČASTO KLADENÉ DOTAZY](https://maestro.my.site.com/knowledgeportal/s/)[Bezpečnostní listy (SDS)](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/documents-search?tab=sds)[Certifikáty (COA/COO)](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/documents-search?tab=coa)[Kvalita a regulace](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/quality-and-regulatory-management)[Kalkulačky a aplikace](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/support/calculators-and-apps)[Webové semináře](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/collections/webinars) Objednávky[Vyhledávání objednávek](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/order-lookup)[Rychlá objednávka](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/quick-order)[Vlastní produkty](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/services/custom-products)[Řešení pro elektronické obchodování](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/ecommerce/ecommerce-solutions) Společnost[O nás](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/about-us)[Odpovědnost](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/ssbi)[Události](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/collections/events)[Tiskové zprávy](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/collections/press)[Programy](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/partnership-programs)[Kariéra](https://careers.merckgroup.com/global/en)[Kanceláře](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/collections/offices) Sociální média [](https://www.linkedin.com/company/merck-life-science) [](https://x.com/Merck_lifesci) [](https://www.facebook.com/Merck.lifescience) [](https://www.instagram.com/mercklifescience/) [](https://www.youtube.com/@MerckLifeScience/featured) Merck __Výzkum. Vývoj.__ Jsme předním dodavatelem pro světový průmysl Life Science s řešeními a službami pro výzkum, vývoj a výrobu biotechnologií a vývoj a výrobu farmaceutických léčiv. [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs) [Sigma-Aldrich® Roztoky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/sigma-aldrich)[BioReliance® Řešení](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/bioreliance)[Millipore® Roztoky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/millipore)[SAFC® Řešení](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/safc)[Milli-Q® Roztoky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/milliq)[Supelco® Řešení](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/supelco) © 2026 Merck KGaA, Darmstadt, Německo a/nebo její pobočky. Všechna práva vyhrazena, včetně vytěžování textu a dat pro trénink umělé inteligence a podobných technologií. Reprodukce jakýchkoli materiálů z těchto stránek je bez povolení přísně zakázána. [Podmínky používání webu](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/legal/site-use-terms)|[Zásady ochrany osobních údajů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/legal/privacy-statement)|[Všeobecné podmínky prodeje](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/legal/terms-and-conditions)|[Souhlas s autorskými právy](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/legal/copyright-consent)|[Mapa stránek](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/site-map)