[Přejít k obsahu](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs) Produkty Nákupní košík0 CZCS Produkty ProduktyAplikaceSlužbyZdrojePodpora [Přihlášení / Registrovat se](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Dohledání objednávky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/order-lookup) [Rychlá objednávka](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/quick-order) Nákupní košík0 [Domů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs)[Značení a detekce nukleových kyselin](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/applications/genomics/nucleic-acid-labeling-and-detection)Metody značení digoxigeninem (DIG) # Metody značení digoxigeninem (DIG) __Přehled sekcí__ - [Značení digoxigeninem (DIG) a protilátkou proti DIG](https://www.sigmaaldrich.com#Digoxigenin) - [značení DNA DIG pomocí PCR](https://www.sigmaaldrich.com#DIG-DNA) - [DIG Random Primed DNA Labeling](https://www.sigmaaldrich.com#DIG-Random) - [Nickovo translační značení dsDNA pro *In Situ*&.nbsp;sondy](https://www.sigmaaldrich.com#Nick) - [Transkripční značení RNA sond](https://www.sigmaaldrich.com#Transcriptional) - [Oligonukleotidové značení 5' konců, 3' konců a 3' chvostů](https://www.sigmaaldrich.com#DIG-Oligonukleotid) - [Odhad výtěžnosti sondy postupem přímé detekce](https://www.sigmaaldrich.com#Odhad) - [DIG-Related Downloads and Resources](https://www.sigmaaldrich.com#DIG-Related) ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Značení digoxigeninem (DIG) a protilátky proti DIG Systém DIG je neradioaktivní technologie volby pro značení a detekci nukleových kyselin pro různé aplikace. Systém je založen na steroidu izolovaném z rostlin digitalisu (Digitalis purpurea a Digitalis lanata). Tyto rostliny jsou jediným přírodním zdrojem digoxigeninu, takže protilátka anti-DIG se neváže na jiný biologický materiál, což zajišťuje specifické značení. Díky této vysoké specifičnosti je ve srovnání s radioaktivním značením potřeba méně materiálu, což činí systém DIG ideálním pro nukleovou hybridizační analýzu. Imobilizované nukleové kyseliny se hybridizují se sondou značenou DIG a následná detekce se provádí pomocí vysoce afinitních [protilátek proti digoxigeninu](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/11093274910), spojených buď s alkalickou fosfatázou (AP), křenovou peroxidázou (HRP), fluoresceinem nebo rhodaminem pro kolorimetrickou a chemiluminiscenční nebo fluorescenční detekci.  __Obrázek 1.__Příklad detekce nukleových kyselin značených DIG pomocí chemiluminiscenčních substrátů.  ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Značení DNA pomocí PCR Značení pomocí PCR je preferovanou metodou přípravy sond značených DIG, pokud je templát k dispozici pouze v omezeném množství, je částečně přečištěný nebo je velmi krátký. Vyžaduje méně optimalizace než jiné metody a poskytuje vysoký výtěžek značené sondy. Při značení PCR termostabilní polymeráza inkorporuje DIG-dUTP při amplifikaci specifické oblasti templátové DNA. Výsledkem je vysoce značená, specifická a extrémně citlivá hybridizační sonda. ### Princip reakce Během standardní reakce PCR se digoxigenin-11-dUTP inkorporuje do nově syntetizované DNA. Jediným předpokladem je, že k syntéze vhodných primerů je zapotřebí určitá informace o sekvenci cílové sekvence. Neradioaktivní systém DIG používá digoxigenin, steroidní hapten, ke značení DNA, RNA nebo oligonukleotidů pro hybridizaci a následnou barevnou nebo luminiscenční detekci. Digoxigenin je spojen s dUTP prostřednictvím alkalicky značené esterové vazby. Značený dUTP lze snadno inkorporovat enzymatickou syntézou nukleových kyselin pomocí DNA polymeráz. Kombinace neradioaktivního značení s PCR je účinným nástrojem pro analýzu produktů PCR a pro přípravu značených sond z malých množství příslušné cílové sekvence. Metody značeníZnačení DIG Reagencie Ostatní značkovací činidla značeníPCR Sady pro značení - [Souprava pro syntézu sondPCR DIG](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11636090910) - [PCR ELISA, značení DIG](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11636120910)   Směsi pro značení bez enzymů - [.PCR DIG směs pro značení](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11585550910) - [PCR DIG Labeling MixPLUS](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11835289910)[/a>](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11835289910) [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11835289910)   Nukleotidy pro značení__/td>__ - [Digoxigenin-11-dUTP, alkalický__/a>__](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DIUTPSRO)[](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DIUTPSRO) __[](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DIUTPSRO)[Digoxigenin-11-dUTP, alkalilabilní](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DIUTPRO) [Sada deoxynukleosidtrifosfátů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DNTPRO)__ - [Fluorescein-12-dUTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11373242910) - [TetramethylRhodamine-5-dUTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11534378910) Enzymy - [Expand High FidelityPLUS PCR System](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/EHIFIPRO) - [Expand High FidelityPLUS PCR System](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/EHIFIPRO) ### Vlastnosti a výhody značení DNA pomocí PCR __Podmínky PCR__ - Před pokusem o začlenění DIG optimalizujte parametry amplifikace PCR (podmínky cyklu, koncentrace templátu, sekvence primerů a koncentrace primerů) pro každý templát a sadu primerů v nepřítomnosti DIGdUTP. __Šablona__ - Pro dosažení nejlepších výsledků použijte jako šablonu klonované inzerty. Použití genomické DNA může být obtížnější. - Koncentrace šablony je pro úspěšnou výrobu specifických sond klíčová. __Značkování__ Při PCR [.DIG Probe Synthesis Kit](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/11636090910) vyžaduje méně optimalizace než většina metod značení, protože obsahuje směs Expand High Fidelity Enzyme Blend. Mezi výhody této enzymové směsi patří: - Může efektivně používat jako templát oblasti bohaté na GC - Pro většinu templátů nevyžaduje optimalizaci koncentrace MgCl2 a značkovací reakce budou fungovat se standardními koncentracemi 1.5 mM MgCl2 ## [](https://www.sigmaaldrich.com)DIG Random Primed DNA Labeling Metoda "random primed" značení DNA je založena na hybridizaci směsi všech možných hexanukleotidů k templátu DNA. Ve směsi hexanukleotidových primerů jsou zastoupeny všechny kombinace sekvencí, což vede ke statistické vazbě primeru na templátovou DNA. Je tak zaručen stejný stupeň značení po celé délce templátové DNA. Komplementární vlákno se syntetizuje z 3´ OH konců náhodného hexanukleotidového primeru pomocí enzymu Klenow, značení stupně. Modifikované deoxyribonukleosidtrifosfáty (\[32P]-, \[35S]-, \[3H]-, \[125I]-, digoxigeninem nebo biotinem značené) přítomné v reakci jsou inkorporovány do nově syntetizovaného komplementárního vlákna DNA. Tyto značené sondy jsou vhodné zejména pro detekci jedné kopie genu na genomových Southernových blotech, screeningu rekombinantních knihoven, dot/slot blotech a northern blotech. Protože každý primer má jinou šestibázovou sekvenci, produkt značené sondy bude tvořit soubor fragmentů různé délky. Značená sonda se tedy na gelu objeví spíše jako šmouha než jako jedinečný pás. Rozložení velikosti značené sondy závisí na délce původního templátu. Metody značeníZnačení DIG ReagencieOstatní značení Reagencie Náhodný priming Sady pro značení a detekci - [Startovací sada pro značení a detekci DIG High Prime I](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11745832910) - [Startovací sada pro značení a detekci DIG High Prime II__./a>__](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11585614910)[](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11585614910) __[](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11585614910)[DIG DNA Labeling and Detection Kit](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11093657910)__   Soupravy pro značení - [Souprava pro značení DNA DIG](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11175033910) - [Sada pro značení náhodných primerů DNA](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11004760001) - [DIG-High Prime](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11585606910) - [Směs pro značení DNA DIG](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11277065910) - [High Prime__/a>__](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11585592001) [__Biotin-High Prime Fluorescein-High Prime__](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11585592001) [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11585592001) Nukleotidy pro značení ./td> - [Digoxigenin-11-dUTP, alkalický](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DIUTPSRO) - [Digoxigenin-11-dUTP, alkalilabilní](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DIUTPRO) - [Směs hexanukleotidů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11277081001) - [Biotin-16-dUTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11093070910) - [Fluorescein-12-dUTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11373242910) - [TetramethylRhodamin 5-dUTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11534378910) Enzymy - Klenow Enzyme, značkovací třída - Klenow Enzyme, značkovací třída Další produkty - [Primer "random"](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11034731001) - [Primer "random"](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11034731001) ### Princip reakce Při náhodném značení Klenowův enzym kopíruje DNA templát v přítomnosti hexamerových primerů a alkalilabilního DIG-11-dUTP. Enzym vkládá v průměru jednu část DIG do každého úseku o délce 20-25 nukleotidů. Výsledný značený produkt je homogenně značená, citlivá hybridizační sonda schopná detekovat pouhých 0,10-0,03 pg cílové DNA. ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Nickovo translační značení dsDNA pro i*n situ*. sondy Metoda nick translace je založena na schopnosti DNázy I zavádět náhodně rozmístěné zářezy do DNA při nízkých koncentracích enzymu v přítomnosti Mg2+. *E. coli* DNA polymeráza I syntetizuje DNA komplementární k intaktnímu vláknu ve směru 5´ - 3´ s použitím 3´-OH konců niklu jako primeru. Exonukleolytická aktivita 5´ - 3´ DNA polymerázy I současně odstraňuje nukleotidy ve směru syntézy. Aktivita polymerázy postupně nahrazuje odstraněné nukleotidy izotopově značenými nebo haptenově značenými deoxyribonukleosidtrifosfáty. Při nízké teplotě (+15 °C) je tak neznačená DNA v reakci nahrazena nově syntetizovanou značenou DNA. Pro *in situ* hybridizační postupy by délka značených fragmentů získaných tímto postupem měla být přibližně 200-500 bází. Metody značeníZnačení DIG<.br> ReagencieOstatní značení Reagencie Nick Translation Soupravy pro značení  - [Nick Translation Kit](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/10976776001) Sestavy pro značení bez enzymů - [DIG-Nick Translation Mix](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11745816910) - [Nick-Translation Mix](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/10976776001) - [Biotin-Nick Translation Mix](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11745824910) Nukleotidy pro značení - [Digoxigenin-11-dUTP, alkalický](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DIUTPSRO) - [Digoxigenin-11-dUTP, alkalilabilní](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DIUTPRO) - [Sada deoxynukleosidtrifosfátu](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DNTPRO)   Enzymy - DNA polymeráza I - [DNase I recombinant, bez RNázy](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/04716728001) - DNA polymeráza I - [Rekombinantní DNA polymeráza I, bez RNázy](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/04716728001) ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Transkripční značení sond RNA Pro některé aplikace je RNA značená DIG účinnější hybridizační sondou než DNA značená DIG. Například sondy RNA značené DIG mohou detekovat vzácné mRNA v nanogramových množstvích celkové RNA. Tyto označené sondy RNA se vytvářejí *in vitro* přepisem z předlohy DNA. Při metodě transkripce RNA se DNA klonuje do vícenásobného klonovacího místa transkripčního vektoru mezi promotory pro různé RNA polymerázy (například T7, SP6 nebo T3 RNA polymerázu). Templát je poté linearizován štěpením vektoru v jedinečném místě (v blízkosti inzertu). RNA polymeráza přepisuje vloženou DNA do antisense kopie RNA v přítomnosti směsi ribonukleotidů (včetně DIG-UTP). Během reakce může být DNA přepsána mnohokrát (až stokrát), aby se vytvořilo velké množství kopií RNA plné délky značených DIG (10-20 μg RNA z 1 μg DNA ve standardní reakci). DIG se do RNA začlení přibližně každých 25-30 nukleotidů. Metody značeníOznačovací činidla DIGOstatní značkovací činidla *In Vitro* Transkripce Soupravy pro značení - [Souprava Northern Starter Kit DIG](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/12039672910) - [.DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7)](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11175025910) - [SP6/T7 Transcription Kit](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/10999644001)[/a>](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/10999644001) [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/10999644001) Sestavy pro značení bez enzymů - [Směs pro značení RNA DIG](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/digutpro) - [Směs pro značení RNA biotinem ./a>](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/digutpro)[](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/digutpro) - [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/digutpro)[Směs pro značení RNA fluoresceinem](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11685619910) - [Digoxigenin-11- UTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/digutpro) - [Biotin-16-UTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11388908910) - [Fluorescein-12-UTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11685619910) - [Biotin-11-CTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/04739205001) Enzymy - [SP6 RNA Polymerase](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RPOLSP6RO) - [T3 RNA polymeráza](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RPOLT3RO) - [T7 RNA polymeráza](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RPOLT7RO) - [SP6 RNA Polymeráza](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RPOLSP6RO) - [Polymeráza RNA](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RPOLT3RO)T3 RNA polymeráza - [T7 RNA polymeráza](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RPOLT7RO) Další produkty - [Inhibitor RNázy Protector](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RNAINHRO) - [Inhibitor RNázy Protector](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RNAINHRO) ### Princip reakce Templát DNA, který má být přepsán, se klonuje do polylinkového místa vhodného transkripčního vektoru, který obsahuje promotory pro SP6 a nebo T3 a T7 RNA polymerázy. Po linearizaci ve vhodném místě se RNA přepisuje v přítomnosti DIG-11-UTP. Za standardních podmínek se z 1 μg templátu přepisuje přibližně 10 μg RNA značené DIG v plné délce. Pro úspěšné značení sond RNA jsou rozhodující následující tipy: ### RNázy RNázy jsou všudypřítomné a ke své aktivitě nevyžadují žádné kofaktory. Pokud chcete být úspěšní, proveďte veškerá možná opatření, abyste zabránili kontaminaci RNázami. Například: - Doporučuje se používat jednorázové plastové nádobí, skleněné nádobí vypalované v troubě nebo plastové nádobí, které bylo dekontaminováno RNázou ZAP nebo podobnými činidly. - Všechny roztoky připravujte s vodou, která byla ošetřena diethylpyrokarbonátem (DEPC) nebo dimethyldikarbonátem (DMDC), a roztoky autoklávujte. - Po celou dobu postupu používejte rukavice. - Účinnost značení značně závisí na čistotě templátu DNA. Templát by měl být vysoce přečištěný. - Konečný templát musí být linearizován, extrahován fenolem/chloroformem a vysrážen etanolem. ### Sekvence templátu - Některé oblasti primerů a/nebo polylinkerů v templátech DNA jsou homologní s částmi ribozomálních 28s a 18s sekvencí RNA. Značené sondy proto mohou generovat specifické, ale nežádoucí signály ve vzorcích, které obsahují tyto výrazné RNA. Chcete-li tento efekt minimalizovat, odstraňte ze svého templátu co nejvíce polylinkerových sekvencí. - Použijete-li k vytvoření templátu DNA PCR, produkt reakce Expand High Fidelity obsahuje některé fragmenty s jedním převisem 3´ A. V případě, že se vám podařilo vytvořit DNA templát, bude produkt reakce Expand High Fidelity obsahovat některé fragmenty s jedním převisem 3´ A. Tento převis může v reakci transkripčního značení vytvářet obalové produkty. ### Délka šablony - Optimální délka šablony je přibližně 1 kb - Minimální délka by měla být alespoň 200 bp ### Skladování sondy - Pro dlouhodobou stabilitu by měly být sondy RNA alikvotovány a skladovány při -20 °C nebo -70 °C - Sondy RNA značené digitálním číslem jsou stabilní nejméně 1 rok při -20 °C nebo -70 °C v ethanolu ### Citlivost sondy - - Pro rychlé stanovení citlivosti antisense RNA sondy značené DIG připravte odpovídající sense RNA (neznačenou) pomocí *in vitro* transkripce. Poté použijte purifikovaný smyslový transkript v různých koncentracích jako cíl na northern blotu. Z výsledku blotu můžete snadno určit nejnižší množství cíle (smyslový transkript), které lze detekovat značenou sondou (antisense transkript). ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Oligonukleotid DIG značený 5' koncem, 3' koncem a 3' koncem. Tail Labeling Pro některé aplikace, jako je *hybridizace in situ* , je nejlepší hybridizační sondou syntetický oligonukleotid značený DIG. Kromě *hybridizace in situ*  lze oligonukleotidy značené DIG použít jako hybridizační sondy v mnoha aplikacích, včetně dot/slot blotů, screeningu knihoven, detekce opakovaných genových sekvencí na Southern blotech a detekce hojných mRNA na northern blotech. Pro značení oligonukleotidů pomocí DIG je k dispozici několik metod, které jsou shrnuty níže. ### Značení 5´ konce oligonukleotidu pomocí DIG-NHS-Esteru . Metody značeníReagencie pro značení DIG 5'-koncové značení Potřebný nukleotid: 100 nmol Potřebný čas a teplota: přes noc, +15 až +25 °C - Vyžaduje pouze malé množství templátu Další produkty - [Digoxigenin-3-Omethylkarbonyl ε-aminokaproová kyselina N-hydroxysukcinimid ester](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11333054001) ### Oligonukleotidové značení na 3´ konci pomocí DIG-ddUTP Metody značeníZnačení digitálními značkami Reagencie.Ostatní značkovací činidla 3'-koncové značení Potřebný nukleotid: 100 pmol Potřebný čas a teplota: 15 minut, +37 °C Lze detekovat: 10 pg DNA - Potřebuje pouze malé množství  templátu - Značené sondy lze použít bez purifikace /li> - Reakci lze rozšířit na neomezeně dlouhou dobu, pokud  prodloužíte dobu inkubace na 1 hodinu Sady pro značení - [Sada pro značení oligonukleotidů DIG 3'-konců , 2. generace](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/03353575910) - [DIG Gel Shift Kit, 2. generace](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/03353591910)   Nukleotidy pro značení - [Digoxigenin-11 ddUTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11363905910) - [Biotin-16-ddUTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11427598910) Enzymy - [Terminální transferáza](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RTTRO) - [Terminální transferáza](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RTTRO) ### Přidání 3´ ocasu DIG-dUTP a dATP (přibližně 40-50 zbytků)  __Obrázek 2.__Neradioaktivní oligonukleotidové chvosty a detekce. Metody značeníReagencie pro značení digitálními značkamiOstatní značkovací činidla Tailing Potřebný nukleotid: 100 pmol Potřebný čas a teplota: 15 minut, +37 °C Lze detekovat: 1 pg DNA - Vyžaduje pouze malé množství templátu - Vytváří citlivější sondy než koncové značení - Vyžaduje pouze malé množství templátu - Vytváří citlivější sondy než koncové značení - Značené sondy lze použít bez purifikace - Reakci lze neomezeně škálovat Nukleotidy pro značení - [Digoxigenin-11-dUTP, alkalický](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DIUTPSRO) - [Digoxigenin-11-dUTP, alkalilabilní](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/DIUTPRO) - [Biotin-16-dUTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11373242910) - [Fluorescein-12-UTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11534378910) - [TetramethylRhodamin 5-dUTP](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11534378910) Enzymy - [Terminální transferáza](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RTTRO) - [Terminální transferáza](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/RTTRO) ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Odhad výtěžku sondy postupem přímé detekce Chcete-li přidat správné množství sondy k hybridizaci, musíte nejprve určit množství sondy značené DIG, které vzniklo ve značkovací reakci. Zde uvedený postup přímé detekce porovnává množství značky DIG v sérii ředění připravených ze značené sondy se známou koncentrací kontrolní nukleové kyseliny značené DIG. Poznámka: Pokud značíte sondu DNA pomocí PCR, nemusíte k vyhodnocení výtěžnosti provádět přímou detekci. Pro sondy značené pomocí PCR použijte metodu vyhodnocení pomocí gelové elektroforézy. Přímá detekce zahrnuje následující kroky: - Příprava sériových ředění značené sondy a jejich nanesení na nylonovou membránu (potřebný čas: 15 minut) - Detekce DIG ve skvrnách pomocí chemiluminiscence; potřebný čas (2-2 hod.5 hodin) ## [](https://www.sigmaaldrich.com)DIG-Related Downloads and Resources Potřebujete pomoc? Podívejte se na našeho [Průvodce výběrem produktů DIG](https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/797/820/selection-guide-dig-product.pdf). Pro více informací si prohlédněte následující brožury: - [Systém DIG](https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/337/233/dig-system.pdf) - [Systém DIG pro *in situ* hybridizaci](https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/271/021/dig-system-for-in-situ-hybridisation-iris.pdf) - [Systém DIG pro hybridizaci filtrů](https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/227/904/dig-system-for-filter-hybridisation-iris.pdf) Podrobné technické informace naleznete v příručkách DIG: - [Příručka aplikace DIG pro filtrační hybridizaci](https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/199/985/dig-application-manual-for-filter-hybridisation-iris.pdf) - [Příručka k aplikaci systému DIG pro neradioaktivní *in situ* hybridizaci, 4. vydání](https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/287/736/dig-application-manual-for-nonradioactive-in-situ-hybridisation-iris.pdf) V našich technických tipech se dozvíte, jak zacházet se systémem DIG: - [Citlivost a specifičnost systému DIG](https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/368/752/dig-system-sensitivity-and-specificity-iris.pdf) - [Štítkování RNA pomocí *In Vitro* transkripce](https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/402/637/technical-tip-rna-zna%C4%8Den%C3%AD-pou%C5%BEit%C3%AD-ve-vitro-p%C5%99episu.pdf) Pouze pro výzkum v oblasti přírodních věd. Není určeno pro použití v diagnostických postupech. ## Související produkty Litujeme, vyskytla se neočekávaná chyba. Response not successful: Received status code 500 __Související články__ - [Fluorescenční *in situ* hybridizace (FISH)](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/cell-culture-and-cell-culture-analysis/imaging-analysis-and-live-cell-imaging/fish-procedure) - [Kontrola kvality a zajištění kvality oligonukleotidů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/custom-dna-oligos-qc-qa) - [Array CGH analýza s amplifikací celého genomu](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/oligo-array-cgh) - [Water for Nucleic Acid Gel Electrophoresis](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/technical-article/genomics/nucleic-acid-gel-electrophoresis/water-nucleic-acid-gel-electrophoresis) - [Methods Used to Detect Proteins and Nucleic Acids Bound to Membranes](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/technical-article/genomics/nucleic-acid-labeling-and-detection/detection-methods) - [KAPA Mouse Genotyping Kit FAQs](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/technical-article/genomics/nucleic-acid-labeling-and-detection/kapa-mouse-genotyping-kit-faq) - [DNA Component Explanation](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/technical-article/genomics/nucleic-acid-labeling-and-detection/what-is-a-dna-component) - [Molecular Beacons](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/technical-article/genomics/qpcr/molecular-beacons) __Související kategorie výrobků__ - [Výrobky s prvky udržitelnosti](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/chemistry-and-biochemicals/greener-alternative-products) - [Elektroforéza a hybridizace nukleových kyselin](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/nucleic-acid-electrophoresis-and-hybridization) - [Značení nukleových kyselin](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/nucleic-acid-electrophoresis-and-hybridization/nucleic-acid-labeling) - [Produkty společnosti Roche Life Science](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/roche-life-science-products) Nejvyšší __Chcete-li pokračovat, musíte se přihlásit.__ Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet. Přihlásit__Nemáte účet?__Registrovat Toto je strojově přeložená stránka. Podpora[Zákaznická podpora](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/support/customer-support)[Kontaktujte nás](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/collections/offices)[ČASTO KLADENÉ DOTAZY](https://maestro.my.site.com/knowledgeportal/s/)[Bezpečnostní listy (SDS)](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/documents-search?tab=sds)[Certifikáty (COA/COO)](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/documents-search?tab=coa)[Kvalita a regulace](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/quality-and-regulatory-management)[Kalkulačky a aplikace](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/support/calculators-and-apps)[Webové semináře](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/collections/webinars) Objednávky[Vyhledávání objednávek](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/order-lookup)[Rychlá objednávka](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/quick-order)[Vlastní produkty](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/services/custom-products)[Řešení pro elektronické obchodování](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/ecommerce/ecommerce-solutions) Společnost[O nás](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/about-us)[Odpovědnost](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/ssbi)[Události](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/collections/events)[Tiskové zprávy](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/collections/press)[Programy](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/partnership-programs)[Kariéra](https://careers.merckgroup.com/global/en)[Kanceláře](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/collections/offices) Sociální média [](https://www.linkedin.com/company/merck-life-science) [](https://x.com/Merck_lifesci) [](https://www.facebook.com/Merck.lifescience) [](https://www.instagram.com/mercklifescience/) [](https://www.youtube.com/@MerckLifeScience/featured) Merck __Výzkum. Vývoj.__ Jsme předním dodavatelem pro světový průmysl Life Science s řešeními a službami pro výzkum, vývoj a výrobu biotechnologií a vývoj a výrobu farmaceutických léčiv. [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs) [Sigma-Aldrich® Roztoky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/sigma-aldrich)[BioReliance® Řešení](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/bioreliance)[Millipore® Roztoky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/millipore)[SAFC® Řešení](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/safc)[Milli-Q® Roztoky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/milliq)[Supelco® Řešení](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/supelco) © 2026 Merck KGaA, Darmstadt, Německo a/nebo její pobočky. Všechna práva vyhrazena, včetně vytěžování textu a dat pro trénink umělé inteligence a podobných technologií. Reprodukce jakýchkoli materiálů z těchto stránek je bez povolení přísně zakázána. [Podmínky používání webu](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/legal/site-use-terms)|[Zásady ochrany osobních údajů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/legal/privacy-statement)|[Všeobecné podmínky prodeje](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/legal/terms-and-conditions)|[Souhlas s autorskými právy](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/legal/copyright-consent)|[Mapa stránek](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/site-map)