[Přejít k obsahu](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs) Produkty Nákupní košík0 CZCS Produkty ProduktyAplikaceSlužbyZdrojePodpora [Přihlášení / Registrovat se](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Dohledání objednávky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/order-lookup) [Rychlá objednávka](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/quick-order) Nákupní košík0 [Domů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs)[qPCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/applications/genomics/qpcr)RT-qPCR - kvantitativní PCR s reverzní transkripcí # RT-qPCR - kvantitativní PCR s reverzní transkripcí RT-qPCR neboli kvantitativní PCR s reverzní transkripcí kombinuje účinky reverzní transkripce a kvantitativní PCR nebo PCR v reálném čase za účelem amplifikace a detekce specifických cílů. RT-qPCR má řadu aplikací, včetně kvantifikace úrovně genové exprese, ověřování RNA interference (RNAi),  a detekce patogenů, jako jsou viry. Běžnými přístupy k vytváření fluorescenčního signálu používaného k měření množství DNA v této technice je použití buď hydrolyzačních sond, jako jsou sondy TaqMan® nebo barviva vázajícího dvouřetězcovou DNA, jako je barvivo SYBR® Green. ## Co je RT-qPCR? Kvantitativní PCR s reverzní transkripcí (RT-qPCR) zahrnuje detekci a kvantifikaci RNA. Proces probíhá reverzní transkripcí celkové RNA nebo mRNA do komplementární DNA (cDNA) pomocí enzymu reverzní transkriptázy, po níž následuje amplifikace a detekce specifických cílů této cDNA pomocí techniky nazývané kvantitativní PCR (qPCR) nebo PCR v reálném čase. V každém cyklu během této PCR se měří množství DNA v reálném čase pomocí různých fluorescenčních chemikálií. Nejběžnějšími přístupy k vytváření fluorescenčního signálu je použití buď hydrolyzujících sond, jako jsou sondy TaqMan® nebo barviva vázajícího dvouvláknovou DNA, jako je barvivo SYBR® Green. Výběr fluorescenční chemie závisí na faktorech, jako je aplikace, cena a to, zda se jedná o jednokomplexový nebo multiplexový test. Barviva vázající DNA se upřednostňují pro jednoplexové testy s nízkou kapacitou, protože se snadněji navrhují, mají kratší dobu přípravy a jsou nákladově efektivnější. Fluorescenční sondy se častěji používají ve vysokokapacitních, multiplexních testech, které vyžadují vyšší specifičnost. Pro více informací o qPCR si prohlédněte náš [Technická příručka ke kvantitativní PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/qpcr/quantitative-pcr) ## Použití RT-qPCR RT-qPCR má řadu aplikací. Technika RT-qPCR se používá k: - kvantifikaci hladin genové exprese - ověřování RNAi pro studium ztráty funkce selektivních genů - detekci patogenů, jako jsou viry, pro diagnostiku infekčních onemocnění - detekovat geneticky modifikované organismy (GMO) ## Jednokrokový test RT-qPCR vs dvoukrokový test RT-qPCR RT-qPCR se provádí buď v jednom, nebo ve dvou krocích. Při výběru správného druhu metody RT-qPCR je důležité zvážit různé faktory, jako jsou náklady, aplikace a typ testu.  __Obrázek 1.__ Schéma porovnávající jednokrokový pracovní postup RT-qPCR a dvoukrokový pracovní postup RT-qPCR. __Jednokroková RT-qPCR__ Při jednokrokové RT-qPCR se reverzní transkripce nebo syntéza cDNA a qPCR provádí v jedné zkumavce za použití sekvenčně specifických primerů pro amplifikaci konkrétního cíle. Geneticky modifikované reverzní transkriptázy se běžně používají v jednostupňových testech, protože snášejí vyšší teploty nezbytné pro žíhání sekvenčně specifických primerů. Jednostupňový test se upřednostňuje při opakované kvantifikaci téhož genu, zejména při vysoce výkonných a diagnostických aplikacích. Dalším hlediskem při výběru jednostupňových testů je kvalita a nedostatek RNA. Vzhledem k tomu, že cDNA syntetizovanou během reakce nelze uložit samostatně jako alikvotní část, může být k opakování testu zapotřebí více vzorků původní RNA. __Dvoukrokový RT-qPCR__ Při dvoukrokovém RT-qPCR se reakce reverzní transkripce a qPCR provádějí v samostatných zkumavkách s oddělenými pufry a činidly. Ve dvoukrokových testech lze použít náhodné hexamery, oligo-dT primery a/nebo primery specifické pro daný gen. Oddělené pufry a činidla umožňují větší flexibilitu při výběru enzymů reverzní transkriptázy a činidel pro PCR s více možnostmi optimalizace a zlepšení účinnosti amplifikace obtížných templátů. Stabilnější cDNA syntetizovaná v prvním kroku může být dále koncentrována a/nebo purifikována a buď uložena pro budoucí použití, nebo může být použita pro kvantifikaci více genů ze stejného vzorku. Typ testuPoužité primeryKlíčové vlastnosti One-Step RT-qPCRPrimery specifické pro danou sekvenci - Snížení experimentální variability - Snadná manipulace s nízkým rizikem kontaminace - Rychlejší protokol s menším počtem kroků - Snadná automatizace - Zlepšená specifita - Ideální pro vysoce výkonné aplikace Dvoufázová RT-qPCR.Oligo (dT) primery, náhodné hexamery a/nebo sekvenčně specifické primery - Flexibilita pro oddělenou optimalizaci RT a PCR reakcí Tabulka 1. Klíčové vlastnosti a primery používané v jednokrokových a dvoukrokových testech RT-qPCR. Podívejte se více na optimalizaci PCR testů v našem [Stránka optimalizace a validace testů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/assay-optimization-and-validation) ## Jednofázové RT-qPCR produkty pro vysoce výkonné aplikace Naše jednokrokové produkty RT-qPCR kombinují účinek reverzní transkriptázy s protilátkou Taq s horkým startem v pohodlných reakčních směsích ReadyMixTM PCR pro aplikace založené na sondách nebo SYBR® Green. Bez ohledu na obtížné sekundární struktury nebo detekční chemii jsou naše reakční směsi ReadyMixTM PCR speciálně vyvinuty tak, aby pomohly dosáhnout vynikajících výsledků v menším počtu kroků. Naše produkty snadno zapadnou do vašeho pracovního postupu PCR a s řadou spolehlivých produktů pro jednokrokové experimenty RT-qPCR - neuděláte chybnou volbu. Objevte KiCqStart® produkty a najděte master mix ReadyMix™ optimalizovaný pro váš přístroj nebo prozkoumejte naše [Možnosti JumpStart™](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/qpcr/quantitative-rt-pcr) pro soupravy optimalizované pro vaše experimentální potřeby. Pro vysoce výkonnou, rychlou kvantifikaci RNA v jednom kroku pomocí fluorogenních sond specifických pro danou sekvenci si vyberte [Univerzální soupravu KAPA PROBE FAST](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/kk4752). S jistotou si vyberte kterýkoli z našich produktů RT-qPCR, aniž byste museli dělat kompromisy v kvalitě. __Jednofázová směs RT-qPCR ReadyMix™ KiCqStart®. -__  Kompatibilní se všemi hlavními přístroji pro qPCR Náš KiCqStart je kompatibilní se všemi hlavními přístroji pro qPCR.sup>® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ reagencie se vyznačují přísným mechanismem horkého startu pro větší specifičnost a jsou formulovány tak, aby byly vysoce tolerantní k inhibitorům PCR ve vzorcích. Tyto vysoce citlivé mastermixy připravené k použití jsou navrženy pro pohodlí a obsahují všechny potřebné základní složky pro qPCR nebo RT-qPCR. Stačí přidat primery, sondu a vodu, aby byl testovací koktejl kompletní. Tento produkt je ideální pro rychlou nebo konvenční qPC | | | | |-------------------------------------------------------------------|-------------------------------------------------------|-----------------------------------------| | Kat. No. | Název produktu | Vlastnosti | | [KCQS07](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/SIGMA/KCQS07) | KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ | Pro společnost Bio-Rad® | | [KCQS08](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/SIGMA/KCQS08) | KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™, Low ROX™ | Pro Applied Biosystems | | [KCQS09](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/SIGMA/KCQS09) | KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™., ROX | Pro přístroje Applied Biosystems® (ABI) | Další informace o kompatibilitě přístrojů s těmito produkty najdete v našem [Úplná tabulka kompatibility přístrojů](https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/343/143/one-step-probe-rt-qpcr-kicqstart-compatibility-list.pdf) nebo si prohlédněte naše [Vlastní sondy qPCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/SIGMA/PROBES). *Směs JumpStart™ Taq ReadyMix™* - Optimalizovatelná pro všechny hlavní qPCR přístroje Naše směs JumpStart™. Taq ReadyMix™ produkty pro RT-qPCR kombinují výhody reverzní transkriptázy Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV RT) a naší JumpStart™ Taq polymerázy inaktivované protilátkami. Robustní M-MLV RT má schopnost transkribovat přes obtížné sekundární struktury, a to i při zvýšených teplotách, zatímco naše JumpStart™ Taq polymeráza poskytuje větší specifičnost a citlivost než standardní Taq polymeráza. Tyto produkty jsou kompatibilní s přístroji na bázi zkumavek a destiček i s kapilárními přístroji. Ušetřete 20 % na RT-qPCR ReadyMix™ ([QR0200](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/SIGMA/QR0200)) použitím kódu SGX při placení. Platí do 31. ledna 2021. | | | | |-------------------------------------------------------------------|-----------------------------------------------------|--------------------------------------------------------------------------| | Kat. No. | Název výrobku | Vlastnosti | | [QR0100](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/SIGMA/QR0100) | SYBR® Green RT-qPCR | Vysoká specificita, nízké riziko kontaminace, snadná reprodukovatelnost | | [QR0200](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/SIGMA/QR0200) | RT-qPCR ReadyMix™. pro aplikace založené na sondách | Vysoká specifičnost, nízké riziko kontaminace, snadná reprodukovatelnost | __*KAPA PROBE FAST*__ - Kompatibilní se všemi technologiemi založenými na fluorogenních sondách KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix Universal Kit je citlivé a pohodlné řešení pro PCR v reálném čase s použitím RNA jako templátu. Souprava je určena pro vysoce výkonnou, rychle cyklickou, jednostupňovou kvantifikaci RNA pomocí sekvenčně specifických fluorogenních sond. Je kompatibilní se všemi technologiemi založenými na fluorogenních sondách, včetně hybridizačních sond (např. sond s fluorescenčním rezonančním přenosem energie (FRET)), hydrolyzních sond (např. sond TaqMan® a vytěsňovacích sond (např, molekulární majáky). Tato souprava je koktejl připravený k použití, který obsahuje všechny složky kromě primerů, sondy (sond) a templátu pro rychle cyklickou PCR v reálném čase založenou na sondách. Sada obsahuje KAPA PROBE FAST qPCR Master Mix, referenční barviva ROX High a ROX Low, KAPA RT Mix a dUTP. | | | | |-------------------------------------------------------------------|----------------------------------------------------------------|------------------------------------------------------------------------------------------------------------------| | Kat. No. | Název výrobku | Vlastnosti | | [KK4752](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/kk4752) | KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix (2X) Universal Kit | Vysoce výkonná, rychle cyklická, jednostupňová kvantifikace RNA pomocí sekvenčně specifických fluorogenních sond | __*Sada ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit*__ - Kompatibilní se všemi hlavními qPCR přístroji Reverzní transkriptáza ABScript II v sadě zajišťuje spolehlivou reverzní transkripci RNA. Po reverzní transkripci se při 95 °C aktivuje verze polymerázy Taq s horkým startem a současně se inaktivuje reverzní transkriptáza ABScript II. V sekvenční PCR reakci 5′-3′ exonukleázová aktivita Taq polymerázy rozštěpí hybridizovanou sondu, čímž dojde k oddělení reportéru od zhášedla a uvolnění fluorescenčního signálu. Sada ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit je sada připravená k použití pro reverzní transkripci a následnou qPCR založenou na sondě v jedné zkumavce. Flexibilní formát této sady obsahuje dvě samostatné 50násobné koncentrace barviva ROX (pasivní reference), které se přidávají podle požadavků konkrétních přístrojů pro qPCR. | | | | |---------------------------------------------------------------------|-------------------------------------------|----------------------------------------------------------------------------| | Kat. No. | Název výrobku | Vlastnosti | | [RK20407](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/rk20407) | Sada sond pro RT-qPCRABScript II One Step | Analyzuje vzorky RNA s nízkým vstupním množstvím, nízké riziko kontaminace | Pouze pro výzkumné účely. Není určeno pro použití v diagnostických postupech. ## Dvoufázové RT-qPCR produkty pro vyšší flexibilitu Nabízíme všechna činidla potřebná k provedení reverzní transkripce a následné PCR analýzy syntetizované cDNA v samostatných zkumavkách pro vyšší flexibilitu vašich experimentů. S důvěrou začleňte naše dvoufázové produkty RT-qPCR do svého pracovního postupu PCR, aniž byste museli dělat kompromisy ve flexibilitě. Díky různým možnostem našich spolehlivých produktů pro PCR neuděláte chybnou volbu. *__Sady a směsi pro syntézu DNA__* Pro splnění vašich potřeb v oblasti reverzní transkripce si můžete vybrat z různých typů enzymů a několika možností balení. Všechny tyto produkty obsahují činidla nezbytná pro syntézu prvního vlákna a jsou k dispozici jako soupravy se samostatnými činidly pro optimalizaci nebo jako kompletní směsi pro rychlou a pohodlnou syntézu prvního vlákna. Kat. No.Název výrobkuVlastnosti [STR1](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/SIGMA/STR1)Sada pro syntézu prvního řetězce u ptáků - Vysoce purifikovaný eAMV-RT - přepisuje obtížnou sekundární strukturu při vysoké teplotě [11483188001](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11483188001)Souprava pro syntézu cDNA prvního řetězce pro RT-PCR - Obsahuje AMV RT pro vyšší termostabilitu vs. M-MuLV RT - Obsahuje inhibitor RNázy a směs dNTP pro PCR [RDRT](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/SIGMA/RDRT)ReadyScript™ cDNA Synthesis Mix - Citlivé a snadno použitelné řešení pro dvoukrokovou RT-PCR - ReadyScript™ je enzym M-MuLV RT modifikovaný RNázou H(+) [11117831001](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/11117831001)Souprava pro syntézu cDNA - Optimalizovaný postup s jednou zkumavkou pro syntézu dvouřetězcové cDNA do 3 kb z celkové RNA nebo mRNA [THIFICDNARO](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/thificdnaro)Sada pro syntézu cDNA s vysokou věrností Transcriptor - Navrženo pro reverzní transkripci RNA se zvýšenou věrností ve srovnání s jinými reverzními transkriptázami - Optimalizováno pro dvoukrokovou RT-PCR [5893151001](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/05893151001)Transcriptor Universal cDNA Master - Pohodlné rychlé řešení pro syntézu cDNA a analýzu PCR v reálném čase *__Enzymy RT - reverzní transkriptázy__* Vyberte si z naší kolekce enzymů RT a najděte ten, který vyhovuje složitosti vašeho transkriptu RNA. Naše produkty zahrnují standardní reverzní transkriptázy viru ptačí myeloblastózy (AMV) a viru myší leukémie (M-MLV), jakož i jejich vylepšené verze pro vyšší citlivost. Kat. No.Název výrobkuVlastnosti [A4464](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/STR1)Vylepšená ptačí reverzní transkriptáza - Vyšší citlivost pro mRNA s nízkým výskytem - Nejlepší enzym pro přepis přes obtížnou sekundární strukturu [ERT-RO](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/ERTRO)Expand™ Reverzní transkriptáza - Přepisuje fragmenty cDNA až do 13. transkripčního cyklu.5 kb - Může použít cDNA nebo jednořetězcovou DNA [M1302](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/M1302)M-MLV reverzní transkriptáza - Používá jednořetězcovou RNA, DNA nebo hybrid RNA-DNA - Generuje první vlákno cDNA do 7 kb [10109118001](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/10109118001)Reverzní transkriptáza AMV - Obsahuje 5X pufr pro syntézu cDNA na prvním vlákně [11062603001](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/ROCHE/11062603001)Reverzní transkriptáza M-MuLV - Přiloženo k produktu.Postrádá endonukleázovou aktivitu a má mnohem nižší aktivitu RNázy H oproti AMV RT [TRANSRTRO](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/transrtro)Transkripční reverzní transkriptáza - Dosahuje vysoké citlivosti při dvoukrokové RT-PCR. Reverzní transkriptáza Transcriptor se používá v běžných termálních cyklérech a přístrojích pro PCR v reálném čase (např. LightCycler® Instruments). - Reverzní transkripce obtížných templátů. Enzym dobře pracuje při zvýšených teplotách, čímž překonává sekundární strukturu RNA (např. templáty RNA bohaté na GC a usnadňuje optimální reakční podmínky. Prozkoumejte více o řešení problémů s RT-qPCR v [Stránka s řešením problémů s RT-PCR / RT-qPCR.](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/troubleshooting) ## qPCR soupravy Tyto ReadyMixTM produkty obsahují všechny potřebné komponenty pro qPCR. Stačí přidat fluorescenční detekční chemikálii, primery a templát. *__Probe Based qPCR__* Probe Based qPCR spočívá v sekvenčně specifické detekci požadovaného produktu PCR. Na rozdíl od metod qPCR založených na SYBR® Green, které detekují veškerou dvouřetězcovou DNA, využívá qPCR založená na sondě fluorescenčně značenou cílovou specifickou sondu, což vede ke zvýšení specifičnosti a citlivosti. Navíc je k dispozici řada fluorescenčních barviv, takže lze použít více primerů k současné amplifikaci mnoha sekvencí. Kat. No.Název výrobkuVlastnosti [D6442](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/d6442)JumpStart™ Taq ReadyMix™ pro vysoce výkonnou kvantitativní PCR - Směs připravená k použití 2x pro qPCR s ROX - Ideální pro vysoce výkonné kvantitativní metody PCR s použitím detekce fluorescenční sondou - JumpStart™ Taq zabraňuje nespecifické amplifikaci a zvyšuje výtěžnost cílového vzorku [D7440](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/d7440)Směs JumpStart™ Taq ReadyMix™ pro kvantitativní PCR - Směs připravená k použití 2x pro provádění kvantitativních testů PCR, které jsou založeny na fluorescenční sondě [L6669](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/l6669)LuminoCt® qPCR ReadyMix™ - Ideální pro rychlé, vysoce výkonné dvoukrokové protokoly qPCR s výsledky testů již za 25 minut - Pro rychlou kvantitativní PCR založenou na sondách [FSTMPMMRO](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/fstmpmmro)FastStart TaqMan.® Probe Master - Použití s jakýmkoli přístrojem qPCR v reálném čase jiným než LightCycler® Přístroje - Vyberte si ze dvou složení - jedno, které obsahuje referenční barvivo ROX, a druhé bez ROX - Obsahuje dUTP, aby se zabránilo kontaminaci přenosem - Vyberte si ze dvou složení - jedno, které obsahuje referenční barvivo ROX, a druhé bez ROX - Obsahuje dUTP, aby se zabránilo kontaminaci přenosem/li> [FSUPMMRO](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/fsupmmro)FastStart Universal Probe Master (Rox) - Dosáhněte citlivých a specifických výsledků v testech s univerzálními sondami pro knihovnu sond nebo s jakoukoli jinou sondou pro hydrolýzu./li> - Amplifikuje fragmenty dlouhé až 500 bp, včetně těch, které jsou bohaté na GC nebo AT - Obsahuje dUTP, aby se zabránilo kontaminaci přenosem - Využívá se k analýze fragmentů, které jsou bohaté na GC nebo AT./li> [PFUKB](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/pfukb)KAPA PROBE FAST qPCR Master Mix, univerzální - Kompatibilní se všemi technologiemi založenými na fluorogenních sondách, včetně hybridizačních sond (např.g., FRET), hydrolýzních sond (např. TaqMan® sondy) a vytěsňovacích sond (např. molekulární majáky). *__SYBR® qPCR na bázi zelené__* SYBR® Green I, běžně používané fluorescenční barvivo vázající DNA, váže všechny dvouřetězcové DNA. Detekce se sleduje měřením nárůstu fluorescence v průběhu cyklu. SYBR® Green I má excitační a emisní maxima 494 nm a 521 nm. Specifičnost naší detekce qPCR na bázi SYBR® Green je výrazně zvýšena začleněním polymerázy Taq zprostředkované horkým startem, jako je JumpStart™ Taq. Kat. No.Název výrobkuVlastnosti [KCQS02](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/kcqs02)KiCqStart® SYBR® Green qPCR . ReadyMix™ s ROX™ - Pro přístroje Applied Biosystems® (ABI) [KCQS01](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/kcqs01)KiCqStart® SYBR® Green qPCR ReadyMix™ Low ROX™__br>__ - Pro Applied Biosystems® (ABI) a Stratagene®  .nbsp;přístroje [KCQS00](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/kcqs00)KiCqStart® SYBR® Green qPCR ReadyMix™ - Pro Bio-Rad®, Cepheid®, Eppendorf®, Illumina®., Corbett® a Roche® systémy [KCQS03](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/kcqs03)KiCqStart® SYBR® Green qPCR ReadyMix™ iQ™ - S fluoresceinem pro Bio-Rad®. systémy [S4438](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/s4438)SYBR® Green JumpStart™ Taq ReadyMix™ - Pro kvantitativní PCR, MgCI2 v pufru SYBR® Green JumpStart™ Taq ReadyMix™ - Pro kvantitativní PCR, bez MgCl2 v pufru [S9194](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/s9194)SYBR® Green JumpStart™ Taq ReadyMix™ pro vysoce výkonnou qPCR - SYBR® Zelené qPCR činidlo, pasivní referenční barvivo v balení [S1816](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/s1816)SYBR® Green JumpStart™ Taq ReadyMix™ pro kvantitativní PCR - Kapilární formulace SYBR® Zelené qPCR činidlo pro Roche LightCycler® kapilární systémy [SFUKB](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/sfukb)KAPA SYBR® FAST qPCR Master Mix, univerzální__/td>__ - Detekovat konzistentně cíle s nízkým počtem kopií a obtížné cíle - Kompletní běh PCR v reálném čase za pouhých 40 minut [FSUSGMMRO](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/fsusgmmro)FastStart Universal SYBR® Green Master (Rox) - Pro amplifikaci a detekci jakékoli cílové DNA nebo cDNA, včetně těch, které jsou bohaté na GC nebo AT - Obsahuje dUTP, aby se zabránilo kontaminaci přenosem [L6544](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/l6544)LuminoCt® SYBR® zelená qPCR ReadyMix™ - Pro rychlou SYBR® zelenou kvantitativní PCR s výsledky analýzy již za 25 minut - S oddělenou lahvičkou ROX/li> - V podstatě odpadá nutnost optimalizovat parametry testu Zjistěte více o qPCR na bázi SYBR® zelené v [tomto krátkém videu.](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/qpcr/how-qpcr-works) ## MikroRNA na bázi RT-qPCR Vyhledávání a analýza mikroRNA na bázi RT-qPCR Najděte si produkty pro reverzní transkripci mikroRNA, které potřebujete, v naší řadě produktů MystiCq® . *__MystiCq® MicroRNA RT-qPCR SystemR__* MystiCq® MicroRNA RT-qPCR SystemR MystiCq®sup>® reagencie pro mikroRNA poskytují kompletní pracovní postup SYBR® Green RT-qPCR pro kvantifikaci exprese v pouhých třech krocích: 1. Izolace 2. Syntéza CDNA 3. Kvantifikace amplifikací . Další informace o pracovním postupu MystiCq®  naleznete na naší stránce produktu MystiCq® . Tyto produkty se vyznačují: - Více než 1 400 předpřipravených a v mokré laboratoři testovaných párů primerů navržených tak, aby cílily pouze na zralé mikroRNA - Konverze všech mikroRNA, což umožňuje téměř neomezený počet odečtů z jediného vzorku - Výběr tří různých produktů pro izolaci mikroRNA/li>   ## qNávrhy testů PCR a činidel pro výzkum SARS-CoV-2 Snažíme se poskytovat výzkumníkům spolehlivé zdroje a nástroje na podporu boje proti COVID-19 (SARS-CoV-2). V reakci na potřebu komunity po specifických činidlech a protokolech pro SARS-CoV-2 naši vědci vyhodnotili soupravy One-Step RT-qPCR na bázi RNA pro detekci cíle SARS-CoV-2. Pouze pro výzkumné účely. Není určeno pro použití v diagnostických postupech. *__Experimentální design a metody__* Tento experiment byl proveden s cílem zjistit, zda naše soupravy One-Step RT-qPCR mohou detekovat SARS-CoV-2. Test byl proveden podle protokolu CDC pro detekci SARS-CoV-2 s použitím syntetizované RNA SARS-Cov-2 jako templátu, zředěné na 105, 104, 103, 102 a 10 kopií. Testovací vzorek obsahoval templát, činidla z každé soupravy, cílově specifické DNA primery /TaqMan® sady sond pro N1 a N2 (N, nukleokapsidový gen). Do každého testu byly zahrnuty také vzorky NTC (kontrola bez templátu). Primer CílF Primer 5'-3' R Primer, 5'-3' SondaAmplicon Velikost N1GACCCCAAAATCAGCGAAATTCTGGTTACTGCCAGTTGAATCTG5'-FAM-ACC CCG CAT TAC GTT TGG TGG ACC-BHQ1-3'td>71 bp N2TTACAAACATTGCCGCAAATACAAACATTGCCGCAAAGCGCGACATTCCGAAGAA5'-FAM-ACA ATT TGC CCC CAG CGC TTC AG-BHQ1-3'67 bp __Tabulka 2.__ Sady primerů a sond určené pro specifickou detekci SARS-CoV-2 (testy N1 a N2). Pouze pro výzkumné použití. Není určeno k použití při diagnostických postupech. *__Výsledky testů__* A: test N1  B: Test N2  __Obrázek 2.__ Testy detekce SARS-CoV-2 s použitím kvantitativní směsi RT-PCR ReadyMix™ (kat. č. QR200) pro cíle primerů N1 (graf A) a N2 (graf B). Testy detekce SARS-CoV-2 N1 (graf A) a N2 (graf B) na __obrázku 2__ byly provedeny pomocí směsi Quantitative RT-PCR ReadyMix™ (kat. č.  [QR200](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/qr0200)) s použitím syntetizované SARS-CoV-2 RNA jako templátu. Oba testy vykazovaly citlivost na detekci již 102 kopií templátu. U vzorků NTC nebyla pozorována žádná amplifikace A: Test N1  B: Test N2  __Obrázek 3.__ Testy detekce SARS-CoV-2 s použitím KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ (kat. č. KCQS07) pro cíle primerů N1 (graf A) a N2 (graf B). Testy detekce SARS-CoV-2 N1 (graf A) a N2 (graf B) na __obrázku 3__ byly provedeny pomocí směsi KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ (Cat. No. [KCQS07](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/kcqs07)) s použitím syntetizované SARS-CoV-2 RNA jako templátu. Oba testy vykazovaly citlivost na detekci již 10 kopií templátu. U vzorků NTC nebyla pozorována žádná amplifikace. A: Test N1  B: Test N2  __Obrázek 4.__ Testy detekce SARS-CoV-2 s použitím univerzální sady KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix (2X) (kat. č. KK4752) pro cíle primerů N1 (graf A) a N2 (graf B). Testy detekce SARS-CoV-2 N1 (graf A) a N2 (graf B) na __obrázku 4__ byly provedeny pomocí univerzální sady KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix (2X) (kat. č. 4). No. [KK4752](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/kk4752)) s použitím syntetizované SARS-CoV-2 RNA jako templátu. Oba testy vykazovaly citlivost na detekci již 102 kopií templátu. U vzorků NTC nebyla pozorována žádná amplifikace. A: Test N1  B: Test N2  __Obrázek 5.__ Testy detekce SARS-CoV-2 s použitím sady ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit (kat. č. RK20407) pro cíle primerů N1 (graf A) a N2 (graf B). Testy detekce SARS-CoV-2 N1 (graf A) a N2 (graf B) na __obrázku 5__ byly provedeny pomocí sady ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit (kat. No. [RK20407](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/rk20407)) s použitím syntetizované SARS-CoV-2 RNA jako templátu. Oba testy vykazovaly citlivost na detekci již 10 kopií templátu. U vzorků NTC nebyla pozorována žádná amplifikace. *__Závěr__* Výše uvedené výsledky naznačují, že naše činidla a soupravy One-Step RT-qPCR jsou ideální pro detekci cíle SARS-CoV-2 ve výzkumu SARS-CoV-2. Na základě těchto informací mohou testy využívající činidla One-Step RT-qPCR detekovat již 100 kopií nebo v některých případech až 10 kopií RNA templátu. Pouze pro výzkumné účely. Není určeno pro použití v diagnostických postupech. Nepublikované údaje uvedené v tomto technickém článku pocházejí z interního výzkumu. Další informace o produktech RT-qPCR pro detekci SARS-CoV-2 naleznete na [Sigma-Aldrich.com/covid19](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/life-science/covid) ## TRI Reagent® pro izolaci celkové RNA TRI Reagent® je ideální pro rychlou, ekonomickou a účinnou izolaci celkové RNA nebo současnou izolaci RNA, DNA a proteinů ze vzorků lidského, živočišného, rostlinného, kvasinkového, bakteriálního a virového původu. Tento produkt, směs guanidin-tiokyanátu a fenolu v monofázovém roztoku, účinně rozpouští DNA, RNA a bílkoviny při homogenizaci nebo lýze vzorku tkáně. Po přidání chloroformu nebo 1-brom-3-chlorpropanu a odstředění se směs rozdělí na 3 fáze: vodnou fázi obsahující RNA, interfázi obsahující DNA a organickou fázi obsahující proteiny. Po oddělení fází lze izolovat každou složku. Jeden ml přípravku TRI Reagent® stačí k izolaci RNA, DNA a bílkovin z 50-100 mg tkáně, 5-10 ´106 buněk nebo 10 cm2 povrchu kultivační misky pro buňky pěstované v monovrstvě. Jedná se o jednu z nejefektivnějších metod izolace celkové RNA, kterou lze dokončit za pouhou 1 hodinu a začít s čerstvou tkání nebo buňkami. Postup je velmi účinný pro izolaci molekul RNA všech typů o délce 0,1-15 kb. Výsledná RNA je neporušená, s malým nebo žádným množstvím kontaminující DNA a bílkovin. Lze jej použít pro Northern bloty, izolaci mRNA, *in vitro* translaci, test ochrany proti RNáze, klonování a PCR. Reagencie TRI® byla v několika výzkumných studiích široce používána při inaktivaci virů a extrakci virové RNA pro detekci SARS-CoV-2 pomocí testů RT-qPCR.1, 2, 3 Ukázalo se, že je ideální pro izolaci a skladování mi-RNA při -800C po delší dobu.4 Byla použita při extrakci RNA kočičích a psích koronavirů, která se dále používá v RT-PCR testu.5, 6 Byla také použita k izolaci cytoplazmatické RNA z buněk Vero infikovaných SARS-CoV. 7 | | | | |-----------------------------------------------------------------|---------------|-----------------------------------------------------------------------------| | Kat. No. | Název výrobku | Vlastnosti | | [T9424](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/t9424) | TRI Reagent® | Pro zpracování tkání, buněk kultivovaných v monovrstvě nebo buněčných pelet | Pouze pro výzkumné účely. Není určeno k použití při diagnostických postupech. ## Materiály Litujeme, vyskytla se neočekávaná chyba. Response not successful: Received status code 500 ### Odkazy 1\. Dimke H, Larsen SL, Skov MN, Larsen H, Hartmeyer GN, Moeller JB. Phenol-chloroform-based RNA purification for detection of SARS-CoV-2 by RT-qPCR: comparison with automated systems. [https://doi.org/10.1101/2020.05.26.20099440](https://doi.org/10.1101/2020.05.26.20099440) 2\. Alhamlan F, Alqahtani A, Bakheet D, Bohol M, Althawadi S, Mutabagani M, Almaghrabi R, Obeid D. Development and Validation of Two In-house, Low-Cost SARS-CoV-2 Detection Assays. [https://doi.org/10.1101/2020.05.18.20105510](https://doi.org/10.1101/2020.05.18.20105510) 3\. Toptan T, Hoehl S, Westhaus S, Bojkova D, Berger A, Rotter B, Hoffmeier K, Cinatl J, Ciesek S, Widera M. Optimized qRT-PCR Approach for the Detection of Intra- and Extra-Cellular SARS-CoV-2 RNAs. IJMS. 21(12):4396. [https://doi.org/10.3390/ijms21124396](https://doi.org/10.3390/ijms21124396) 4\. Mraz M, Malinova K, Mayer J, Pospisilova S. 2009. MicroRNA isolation and stability in stored RNA samples. Biochemical and Biophysical Research Communications. 390(1):1-4. [https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2009.09.061](https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2009.09.061) 5\. Gunn-Moore DA, Gruffydd-Jones TJ, Harbour DA. 1998. Detection of feline coronaviruses by culture and reverse transcriptase-polymerase chain reaction of blood samples from healthy cats and cats with clinical feline infectious peritonitis. Veterinary Microbiology. 62(3):193-205. [https://doi.org/10.1016/s0378-1135(98)00210-7](https://doi.org/10.1016/s0378-1135%2898%2900210-7) 6\. Erles K, Toomey C, Brooks HW, Brownlie J. 2003. Detection of a group 2 coronavirus in dogs with canine infectious respiratory disease. Virology. 310(2):216-223. [https://doi.org/10.1016/s0042-6822(03)00160-0](https://doi.org/10.1016/s0042-6822%2803%2900160-0) 7\. Darnell ME, Subbarao K, Feinstone SM, Taylor DR. 2004. Inactivation of the coronavirus that induces severe acute respiratory syndrome, SARS-CoV. Journal of Virological Methods. 121(1):85-91. [https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2004.06.006](https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2004.06.006) \*Tento článek je preprint a nebyl recenzován. Informuje o novém lékařském výzkumu, který ještě nebyl vyhodnocen, a proto by neměl být používán jako vodítko pro klinickou praxi. __Související články__ - [How qPCR Works](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/technical-article/genomics/qpcr/how-qpcr-works) - [RT-qPCR Basic Troubleshooting](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/protocol/genomics/qpcr/rt-qpcr) - [Návrh testu PCR/qPCR/dPCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/protocol/genomics/pcr/pcr-qpcr-dpcr-assay-design) - [Optimalizace a validace testu PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/assay-optimization-and-validation) - [Syntéza oligonukleotidů DNA](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/dna-oligonucleotide-synthesis) - [Uzamčená nukleová kyselina a pojivo pro menší drážky / zhášeč tmy Eclipse](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/locked-nucleic-acids-faq) - [Kvantifikace oligonukleotidů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/quantitation-of-oligos) - [Řešení problémů s RT-PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/troubleshooting) - [Zobrazit více](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) __Související kategorie výrobků__ - [Reagencie a soupravy pro PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/pcr-and-amplification/pcr-reagents-and-kits) - [Produkty společnosti Roche Life Science](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/roche-life-science-products) - [Produkty pro testování konopí: Cultivator Solutions](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/analytical-chemistry/cannabis-testing) Nejvyšší __Chcete-li pokračovat, musíte se přihlásit.__ Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet. Přihlásit__Nemáte účet?__Registrovat Toto je strojově přeložená stránka. An unknown error has occured.