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Merck

Molekulares Klonen und Proteinexpression

Das Bild ist ein Diagramm, das den Prozess der Proteinexpression veranschaulicht, der mit einem Expressionsplasmid beginnt und zum Phänotyp führt, einschließlich Schritten wie Transkription im Zellkern, Translation und Lokalisierung, die in der Reinigung gipfeln. Das Diagramm ist farbkodiert, wobei rosa den Gesamtprozess und gelb den Zellkern hervorhebt. Es enthält Beschriftungen wie "Expressionsplasmid", "Zellkern", "Transkription", "mRNA", "Translation", "Phänotyp", "Lokalisierung" und "Reinigung".

Ziel des molekularen Klonierens ist es, das Gen von Interesse in einen Plasmidvektor einzufügen, ein kreisförmiges Stück DNA, das verschiedene Elemente enthält, um das Klonen, die Klonauswahl und die Proteinexpression zu erleichtern. Forscher verwenden häufig DNA-Restriktionsenzyme und Ligase, um das GOI in-frame in den Expressionsvektor einzufügen, der dann die Proteinexpression ermöglicht. Dieser Vektor wird dann in eine Zelle eingebracht, die das von der GOI kodierte Protein exprimiert, oder die Proteinexpression wird mit zellfreien Proteinsynthesesystemen durchgeführt.

Wenn das Protein exprimiert wird, kann die Proteinfunktion untersucht werden, da sie die Zellsignalisierung, die Morphologie oder andere Aspekte innerhalb der Zelle beeinflusst. Alternativ kann das Protein in großen Mengen exprimiert, gereinigt und in zahlreichen nachgeschalteten Anwendungen eingesetzt werden. Weitere Informationen finden Sie in unserem umfassenden Angebot an zuverlässigen Reagenzien und Ressourcen, die für den gesamten Klonierungs- und Expressions-Workflow für Proteinexpressionssysteme von Insekten, Bakterien und Säugetieren zur Verfügung stehen.


Produkte

His (5)

S-Tag (5)

Herpes Simplex Virus (HSV) (3)

competent cells (60)

plasmids (28)

media (25)

enzymes (7)

media supplements (7)

kits (3)

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LB-Bouillon (Lennox)
L3022

LB-Bouillon (Lennox)

Highly-referenced microbial growth powder medium, low salt, suitable for salt-sensitive E.coli culture.

LB-Bouillon (Miller)
L3522

LB-Bouillon (Miller)

Highly-referenced nutrient-rich microbial growth powder medium, suitable for regular E.coli culture

Hefeextrakt
Y1625

Hefeextrakt

for use in microbial growth medium

LB-Bouillon (Miller)
L2542

LB-Bouillon (Miller)

Liquid microbial growth medium

Hefe-Stickstoff-Basis ohne Aminosäuren
Y0626

Hefe-Stickstoff-Basis ohne Aminosäuren

Yeast classification medium used for selecting yeasts based on amino acid and carbohydrate requirements

LB-Bouillon mit Agar (Miller)
L3147

LB-Bouillon mit Agar (Miller)

Highly-referenced nutrient-rich microbial growth powder medium with Agar, suitable for regular E.coli culture.

LB-Bouillon mit Agar (Lennox)
L2897

LB-Bouillon mit Agar (Lennox)

Highly-referenced microbial growth powder medium with Agar, low salt, suitable for salt-sensitive E. coli culture.

Natriumphosphat
S3139

Natriumphosphat

BioReagent, Molecular Biology, anhydrous, ≥98%

LB-Agar-Platten
L5542

LB-Agar-Platten

pre-poured LB agar plates

Ribonuklease A aus Rinderpankreas
R6513

Ribonuklease A aus Rinderpankreas

Molecular Biology, ≥70 Kunitz units/mg protein, lyophilized

2X YT Microben-Medium
Y2377

2X YT Microben-Medium

Powder microbial growth medium

M9-Minimalsalze, 5X
M6030

M9-Minimalsalze, 5X

powder, minimal microbial growth medium

SOC-Medium
S1797

SOC-Medium

For use in transformation

Ficoll<SUP>®</SUP> 400
F2637

Ficoll® 400

BioXtra, lyophilized powder

Trace Elements Ready Made Solution
MBD0056

Trace Elements Ready Made Solution

100X, microbial growth medium supplement

2xYT-Medium
Y1003

2xYT-Medium

Liquid microbial growth medium

LB-Bouillon mit Agar (Lennox)
L7025

LB-Bouillon mit Agar (Lennox)

Tablet microbial growth medium

LB Bouillon
L7275

LB Bouillon

Tablet microbial growth medium

TAT-CRE-Recombinase
SCR508

TAT-CRE-Recombinase

TAT-CRE Recombinase is a recombinant cell-permeant fusion cre-recombinase protein consisting of TAT sequence, a nuclear localization sequence (NLS) and it is known to catalyze the site specific recombination event between two loxP DNA sites.

M9 Minimal Salts, 5X
M9956

M9 Minimal Salts, 5X

Liquid microbial growth medium

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Restriktionsenzyme und DNA-modifizierende Enzyme

Bei der molekularen Klonierung verwenden Forscher häufig zwei allgemeine Arten von Enzymen - Restriktionsenzyme zum Schneiden von DNA und modifizierende Enzyme zur Durchführung von Nukleinsäuremodifikationen, häufig vor dem Ligationsschritt. Entdecken Sie unser breites Angebot an Restriktionsenzymen und anderen modifizierenden Enzymen wie alkalische Phosphatase, Protease, T7-RNA-Polymerase, Ribonuklease A und T4-DNA-Ligase für Ihren gesamten Forschungsbedarf.

Zellfreie Expressionssysteme und Expressionsvektoren mit CMV-Promotoren und FLAG® Tag-Technologie

Unser Klonierungs- und Expressionsportfolio macht die Gentechnik billiger und effizienter, indem es eine Sammlung vielseitiger Vektoren mit optimierten Protokollen und Klonierungskits bietet. Wählen Sie aus unserem breiten Angebot an Klonierungs- & Expressionssystemen, einschließlich unseres zellfreien Proteinsynthese- oder Expressionssystems, wie dem Next Generation Cell-Free Protein Expression Kit (Wheat Germ) und das ALiCE® Kit. Entdecken Sie außerdem die bakteriellen und Säugetier-FLAG®-Expressionsvektoren für die periplasmatische oder zytoplasmatische Expression in transienten oder stabilen Transfektionssystemen und exprimieren Sie sicher Ihre FLAG® oder 3X FLAG® Sequenz am N- oder C-Terminus mit einer Enterokinase (Ek)-Spaltstelle zur Entfernung des Fusions-Tags, falls erforderlich.

Novagen® pET System, SnapFast™ Vektoren, Simplicon™ Vektoren und UCOE™ Proteinexpressionssysteme

Alle E. coli-Expressionsvektoren und Insektenexpressionsvektoren verleihen Ampicillin-Resistenz für eine einfache Auswahl positiver Transformanten. Entdecken Sie das Novagen® pET System, den Goldstandard für das Klonen und die Expression rekombinanter Proteine in bakterieller Expression. Die von Oxford Genetics entwickelte SnapFast™-Vektorfamilie bietet ein schnelles und einfaches Protokoll, das den Transfer einer GOI von einem Vektor in einen anderen unter Verwendung der SnapFast™-Schnittstellen ermöglicht und Vektoren erzeugt, die mit Expressionssystemen von Insekten, Hefen, Bakterien & Säugetieren kompatibel sind. Mit unserer Ubiquitous Chromatin Opening Element (UCOE™)-Expressionsvektortechnologie können Sie in stabil transfizierten Säugetierzellen in weniger als 30 Tagen ein Gramm Protein herstellen. Die UCOE™-Expressionstechnologie verhindert das Silencing von Transgenen und ermöglicht eine konsistente, stabile und hochgradige Genexpression, die bis zu 20-mal höher ist als bei herkömmlichen Vektoren, unabhängig von der chromosomalen Integrationsstelle. Das Simplicon™ In-vivo-Protein-Expressionssystem ist ein nicht genomintegrierendes, abstimmbares und synthetisches, selbstreplizierendes RNA-basiertes Expressionssystem, das eine sofortige, hochgradig nachhaltige Proteinexpression mehrerer Gene in transfizierten menschlichen Zellen erzeugt, ohne das Risiko einer Genomintegration.

Bakterien- und Hefetransformationsreagenzien und -ressourcen

Bakterielle Transformation ist der Prozess des Einbringens von Fremd-DNA in Bakterien mit Hilfe von Methoden wie Hitzeschock und Elektroporation. Unser Portfolio an kompetenten Zellen ist für eine optimale Proteinexpression selbst für die anspruchsvollsten rekombinanten Proteine ausgelegt. In unserem Competent Cell Selection Guide finden Sie eine Auswahl neuer kompetenter bakterieller Zellen für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich Proteinexpression, routinemäßiges oder schwieriges Klonen und Bibliotheksgenerierung. Darüber hinaus hat die rekombinante Proteinexpression in Saccharomyces cerevisiae viele Vorteile, wie z. B. einfache Protokolle, die Verwendung von Basisreagenzien und die Skalierbarkeit. Entdecken Sie die vielen Produkte, die für die Hefetransformation als Teil des Arbeitsablaufs der Proteinexpression zur Verfügung stehen. Unsere NovaBlue® kompetenten Zellen, die für Transfektionseffizienz und Plasmidkonservierung optimiert sind, unterstützen die Herstellung von Bibliotheken und Plasmidstabilität. Darüber hinaus sind die kompetenten Zellen von Novagen® so konzipiert, dass sie die richtige Proteinfaltung, eine erhöhte Löslichkeit oder die Expression zytotoxischer Proteine erleichtern. Die beliebtesten Marken sind die Systeme Rosetta™, Origami™ und Overnight Express™.


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