Startseite Produkte Proteinbiologie Primäre, sekundäre und rekombinante monoklonale AntikörperSekundäre Antikörper

Sekundäre Antikörper

Abbildung 2.Fluoreszenzmikroskopische Aufnahmen von mitotischen Molch-Lungenzellen. Mikrotubuli gefärbt mit monoklonalem Anti-^.

Anwendungen von sekundären Antikörpern

Sekundäre Antikörper werden in vielen Anwendungen eingesetzt, darunter:

Immunopurifikation
ELISA
Western Blotting
Immunhistochemie
Zellbasierte Assays
Durchflusszytometrie

Gefrierschnitt des Sehnervs der Ratte, gefärbt mit Maus-Anti-Neurofilament H und CF568 Ziege-Anti-Maus (neuronale Prozesse, rot), Kaninchen-Anti-GFAP und CF488A Ziege-Anti-Kaninchen, stark kreuzadsorbiert (Gliazellen, grün). Die Zellkerne sind mit RedDot2 (cyan) gefärbt.

Abbildung 3.Immunzytochemie. Gefrierschnitt des Sehnervs der Ratte, gefärbt mit Maus-Anti-Neurofilament H und CF568 Ziege-Anti-Maus (neuronale Prozesse, rot), Kaninchen-Anti-GFAP und CF488A Ziege-Anti-Kaninchen, stark gekreuzt (Gliazellen, grün). Die Zellkerne sind mit RedDot2 (cyan) gefärbt.

Konjugierte Antikörper und Sonden

Wir bieten ein großes Portfolio an konjugierten Antikörpern. Ein konjugierter Antikörper ist ein monoklonaler oder polyklonaler Antikörper, der mit einer Markierung verbunden ist und für den Nachweis in einer Vielzahl von Testverfahren verwendet wird. Der spezifische Nutzen eines sekundären Antikörpers hängt von seiner/ihren konjugierten Sonde(n) ab. Sonden sind Moleküle, die verschiedene Nachweisverfahren unterstützen. Die gebräuchlichsten Nachweissysteme für konjugierte sekundäre Antikörper sind kolorimetrisch oder fluoreszierend.

Kolorimetrische Assays basieren in der Regel auf der Verwendung von alkalischer Phosphatase (ALP) oder Meerrettichperoxidase (HRP) oder deren Derivaten. Das Biotin-Avidin (Streptavidin)-Konjugat-Bindungssystem wird häufig zur Verstärkung des kolorimetrischen Signals für ALP oder HRP verwendet. Die gebräuchlichsten fluoreszierenden Assays verwenden Fluorescein-Isothiocyanat (FITC), Rhodamin oder sein Derivat, Tetramethylrhodamin-Isothiocyanat (TRITC), Cyanin (Cy3) oder Phycoerythrin (R-PE).

Wir bieten konjugierte Antikörper an, die mit einer Vielzahl von kolorimetrischen und fluoreszierenden Markern für den Einsatz bei Nachweis-, Reinigungs-, Sortier- und Mikroskopieanwendungen verbunden sind. Konjugierte Antikörper werden in einer Vielzahl von Wirtstieren produziert, wodurch sie mit einer breiten Palette immunchemischer Reagenzien kompatibel sind. Für Anwender, deren Forschung die Markierung ihrer eigenen Reagenzien erfordert, bieten wir Antikörper-Markierungskits für die Konjugation verschiedener Markierungen (Biotin-, FITC-, CF™-Markierungen) an monoklonale und polyklonale Antikörper an.

Protein A, G, und L

Protein A stammt aus Staphylococcus aureus. Protein G stammt von einer Streptococcus-Spezies. Beide haben Bindungsstellen für den Fc-Teil von Säugetier-IgG. Die Affinität dieser Proteine für IgG variiert je nach Tierart. Protein G hat eine höhere Affinität für Ratten-, Ziegen-, Schaf- und Rinder-IgG sowie für Maus-IgG1 und menschliches IgG3. Protein A hat eine höhere Affinität für Katzen- und Meerschweinchen-IgG (Tabelle 1). Zusätzlich zu den Fc-Bindungsstellen von IgG enthält das native Protein G Bindungsstellen für Albumin, die Fab-Region von IgG und membranbindende Regionen, die zu unspezifischen Färbungen führen können. Diese Probleme wurden durch die Herstellung rekombinanter Formen des Proteins angegangen. Das rekombinante Protein G wurde so verändert, dass die Albuminbindungsregion eliminiert wurde, und das rekombinante Protein G′ ist ein verkürztes Protein, dem die Albumin-, Fab- und Membranbindungsstellen fehlen, während die Fc-Bindungsstelle erhalten bleibt, wodurch es spezifischer für IgG ist als die native Form.

Tabelle 1.Bindungskapazitäten von Protein A, G und L für verschiedene Spezies.
Spezies	Immunoglobulin	Bindung - Protein A1-4	Bindung - Protein G5-8	Bindung - Protein L9-10
Mensch	lgG (normal)	++++	++++	++++
	lgG1	++++	++++	++++
	lgG2	++++	++++	++++
	lgG3	-	++++	++++
	lgG4	++++	++++	++++
	lgM	-	-	++++
	lgA	-	-	++++
	lgE	-	-	++++
	lgD	-	-	++++
	Fab	++	++	++++
	K-Leichtketten	-	-	++++
	L-Leichtketten	-	-	-
	ScFv	++	-	++++
Maus	lgG1	+	++++	++++
	lgG2a	++++	++++	++++
	lgG2b	+++	+++	++++
	lgG3	++	+++	++++
Rat	lgG1	-	+	++++
	lgG2a	-	++++	++++
	lgG2b	-	++	++++
	lgG2c	+	++	++++
Rind	lgG	++	++++	-
Katze	lgG	++++	-	N/A
Huhn	lgG	-	+	++
Hund	lgG	++++	++++	+
Ziege	lgG	+/-	++	-
Kaninchenschwein	lgG	++++	++	++
Hamster	lgG	+	++	++++
Pferd	lgG	++	++++	+/-
Schwein	lgG	+++	+++	++++
Kaninchen	lgG	++++	+++	+
Schaf	lgG	+/-	++	-
Es ist zu beachten, dass Protein L auf bestimmte Unterklassen der VL-Domäne beschränkt ist. Daher gilt die in der Tabelle angegebene Affinität nicht allgemein für die Unterklasse lgG, sondern nur für die Antikörper, die die richtige leichte Kappa-Kette tragen.

Protein L, aus Peptostreptococcus magnus, hat eine Affinität für Kappa-Leichtketten (Tabelle 2) verschiedener Spezies. Es weist monoklonales oder polyklonales IgG, IgA und IgM sowie Fab-, F(ab′)2- und rekombinante einkettige Fv-Fragmente (scFv) nach, die Kappa-Leichtketten enthalten. Es bindet auch Hühner-IgG. Hinweis: Rinder-, Ziegen-, Schaf- und Pferde-IgG, die fast ausschließlich Lambda-Ketten enthalten, binden nicht oder nur schlecht an Protein L.

Tabelle 2.Bindung von Protein L an verschiedene leichte Ketten von Immunglobulinen.
Spezies	Protein L Bindung
Human kappa I	++++
Human kappa II	-
Human kappa III	++++
Human kappa IV	++++
Human kappa I-IV	-
Diese Tabelle erhebt keinen Anspruch auf Vollständigkeit, sondern umfasst nur die bekannten Kappa-Untergruppen, an denen die Bindung von Protein L getestet wurde. Es ist zu beachten, dass Protein L auf bestimmte Unterklassen der VL-Domäne beschränkt ist. Daher ist die in der Tabelle angegebene Affinität nicht allgemein für die IgG-Unterklasse, sondern nur für diejenigen Antikörper, die die richtige leichte Kappa-Kette tragen.

Detektionsreagenzien

Protein A und G werden als allgemeine, nicht speziesspezifische Reagenzien für die Bindung von primären Antikörpern oder Oberflächen-IgG in Säugetiergeweben verwendet. Protein G wird für die meisten Tierarten empfohlen, einschließlich Maus und Ratte. Protein A wird für Katzen und Meerschweinchen empfohlen. Beide werden nicht für den Nachweis von IgA oder IgM, für den Nachweis von Fab-Fragmenten oder für den Nachweis von Vogel-IgG empfohlen. Wenn sie an ein Harz wie Agarose gebunden sind, können Protein A und Protein G zur Affinitätsreinigung von Immunglobulinen aus Serum oder Aszitesflüssigkeit verwendet werden.

Protein L wird als allgemeines Reagenz zur Bindung von primären Säugetier- oder Vogelantikörpern oder Oberflächen-IgG aller Klassen verwendet. Besonders nützlich ist es für den Nachweis von Fab-, F(ab′)₂-Fragmenten und rekombinanten scFv-Fragmenten, für den Nachweis von an Fc-Rezeptoren gebundenen Igs oder für den Nachweis von monoklonalen Antikörpern in Gegenwart von Rinder-Igs. Die Verwendung ist auf den Nachweis von Ig's beschränkt, die leichte Kappa-Ketten tragen.

Resine

Protein A und Protein G haben Bindungsstellen für den Fc-Teil von Säugetier-IgG. Die Kapazität dieser Proteine für IgG variiert je nach Tierart. Im Allgemeinen haben IgG eine höhere Affinität für Protein G als für Protein A, und Protein G kann IgG von einer größeren Anzahl von Spezies binden. Die Affinität verschiedener IgG-Unterklassen, insbesondere von Maus und Mensch, zu Protein A variiert stärker als zu Protein G. Protein A kann daher zur Herstellung von isotypisch reinem IgG aus einigen Spezies verwendet werden. Protein L eignet sich zur Isolierung von monoklonalen Antikörpern der Maus aus Zellkulturüberständen ohne Kontamination durch Rinder-IgG.

HeLa-Zellen gefärbt mit Mouse-Anti-Tubulin und CF488A Goat Anti-Mouse secondary antibody (Mikrotubuli, grün). Aktinfilamente sind mit CF640R Phalloidin (violett) gefärbt. Die Zellkerne sind mit DAPI (blau) gegengefärbt.

Abbildung 4.CF™-Farbstoff. HeLa-Zellen gefärbt mit Mouse-Anti-Tubulin und CF488A Goat Anti-Mouse secondary antibody (Mikrotubuli, grün). Aktinfilamente sind mit CF640R Phalloidin (violett) gefärbt. Die Zellkerne sind mit DAPI (blau) gegengefärbt.

CF™ Dye Labeled Antibodies

CF™-Farbstoffe sind eine Reihe hoch wasserlöslicher Fluoreszenzfarbstoffe, die das sichtbare und das Nahinfrarot-Spektrum (Nah-IR) abdecken und zur Markierung von Antikörpern dienen. Die Helligkeit, Photostabilität und Farbauswahl der CF™-Farbstoffe, die von Wissenschaftlern unter Verwendung bahnbrechender chemischer Verfahren entwickelt wurden, übertreffen die Qualität anderer kommerzieller Farbstoffe dank eines rationalen Farbstoffdesigns.

Wir bieten hoch validierte, mit CF™-Farbstoffen markierte Sekundärantikörper in einer Vielzahl speziesspezifischer Optionen.