Endonucleasa
Las enzimas endonucleasas se utilizan para reducir el nivel de contaminación por ácidos nucleicos en flujos de trabajo de bioprocesamiento y aplicaciones de investigación mediante la división del ADN y el ARN en fragmentos más pequeños. Aunque se dispone de una amplia variedad de fuentes naturales, estas formulaciones de endonucleasas pueden plantear un reto, sin embargo, ya que pueden contener actividad proteasa y contaminantes virales.
Benzonase® endonucleasa, una nucleasa modificada genéticamente a partir de Serratia marcescens, elimina el riesgo de utilizar endonucleasas derivadas naturalmente y puede degradar todas las formas de ADN y ARN. Cuando se utiliza en condiciones de reacción adecuadas, la benzonasa® endonucleasa degrada todas las formas de ADN y ARN (monocatenario, bicatenario, lineal y circular) a oligonucleótidos de aproximadamente tres a cinco pares de bases de longitud. Tiene un nivel excepcionalmente alto de actividad específica sin ninguna actividad proteolítica detectable.
Con algunas plantillas de fabricación, el uso de una concentración de sal por encima de los niveles fisiológicos (200mM NaCl) puede ser beneficioso. La endonucleasa Benzonase® Salt Tolerant permite el uso de concentraciones de sal de 200mM a 1000mM NaCl para el paso de lisis intermedia y digestión del ADN durante la producción de vectores de virus adenoasociados (AAV). Esta nueva incorporación a la cartera de Benzonase® es compatible con todos los detergentes probados, incluidos los detergentes Deviron®, que son una alternativa a Triton™ X-100.
Más información sobre bioprocesamiento e aplicaciones de investigación de la Benzonasa® endonucleasa.
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Aplicaciones de bioprocesamiento
La endonucleasa Benzonase® es adecuada para aplicaciones de bioprocesamiento rigurosas. Degrada ácidos nucleicos muy por debajo del tamaño de fragmento de 200 pares de bases exigido por la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA), se libera en condiciones GMP IPE-PQG y tiene un Drug Master File en vigor con la FDA que puede citarse en los expedientes normativos.
Es eficaz en una amplia gama de condiciones operativas y aplicaciones, incluyendo:
- Purification of viral vaccines and viral vector vaccines
- Purification of cell and gene therapies
- Purification of oncolytic viruses
- Eliminación de ADN y ARN de proteínas y otros productos biológicos
- Eliminación de ADN de células huésped
Tres versiones de la endonucleasa IPEG PQG GMP Benzonase® están disponibles para satisfacer diferentes necesidades de fabricación. Todas forman parte del programa Emprove® que facilita la preparación de documentos para las presentaciones reglamentarias (Tabla 1).
Las benzonucleasas® se preparan en el sistema de expresión E. coli W3110 y presentan un riesgo mínimo de contaminación vírica.
- Benzonasa® endonucleasa Emprove® Expert
- Benzonasa® endonucleasa Safety Plus Emprove® Expert se produce en un medio químicamente definido y en cada lote se comprueba la ausencia de virus adventicios y micoplasma.
- La endonucleasa Benzonase® Salt Tolerant también se produce en un medio químicamente definido y cada lote se somete a pruebas de detección de micoplasma; hay disponibles pruebas bajo demanda de virus adventicios.
¿Está interesado en una muestra de Benzonase®? Si la respuesta es sí, haga clic en el botón de abajo para obtener más información.
Aplicaciones de investigación
La endonucleasa Benzonase® puede utilizarse para una variedad de aplicaciones de investigación que incluyen:
- Removal of host DNA from microbiome samples
- Improvement of microbial taxa identification for microbiome studies
- Prevention of clumping during vaccine research
- Reducción de la viscosidad del lisado durante los flujos de trabajo de extracción de proteínas recombinantes, lo que lleva a mejorar el rendimiento de la proteína objetivo
- Se dispone de una variedad de opciones de endonucleasas Benzonase® de alta pureza y alta concentración.
La endonucleasa Benzonase® también está disponible empaquetada con reactivos de extracción de proteínas para facilitar aún más los flujos de trabajo.
- BugBuster® Master Mix: BugBuster® reactivo de extracción de proteínas con benzonasa® endonucleasa y solución de rLisozima./li>
- Reactivo de extracción de proteínas BugBuster® HT: Reactivo de extracción de proteínas BugBuster y Benzonasa® endonucleasa
- CelLytic™ B Plus Kit: lisozima, benzonasa® endonucleasa e inhibidores de proteasas
Información técnica | ||||
|---|---|---|---|---|
| Características / Aplicación | Benzonasa®. endonucleasa Seguridad (grado de pureza II ≥ 90%) Experto | Benzonasa® endonucleasa Emprove® Experto | Benzonasa® endonucleasa Plus Emprove® | Benzonasa® Endonucleasa tolerante a la sal Emprove® Expert |
| Origen | Serratia marcescens, Producción: E. coli K12 cepa W3110; 30 kDa; PI 6.85; datos de homología de secuencia | Plataforma propia de ingeniería de proteínas | ||
| Pureza | ≥ 90% | ≥ 99% | ≥ 99% | 99% |
| Fabricación GMP según ICH Q7* | No | Sí | Sí | Sí |
| FDA Bulk Biological Master File (US-BBMF) & Emprove®. | No | Sí | Emprove® Expert Dossiers disponibles, FDA DMF disponible hasta 2024. | |
| De origen no animal (NAO), recombinante de E. coli en medio de producción químicamente definido | No | No | Sí | Sí |
| Envío con tiras de temperatura | Sí | No | Sí | Sí |
| Muestras de cola | ||||
| Muestras de compuerta trasera para tamaño de paquete grande | No | No | Sí (con tamaño de unidad 5M) | Sí (con tamaño unitario de 5M) |
| Prueba in vitro de liberación de lotes para ausencia de virus adventicios (3 líneas celulares) y prueba de Mycoplasma | No | No | Sí | Disponible como opción personalizada* |
| .Pruebas microbianas de endotoxinas (LAL) | No especificado < 10 UFC/100.000 U | < 0.25 EU/1.000 U < 10 UFC/100.000 U | < 0,25 EU/1.000 U < 10 UFC/100.000 U | < 0.25 EU/1.000 U < 10 UFC/100.000 U |
| Cliente objetivo | Investigación | Vacunas virales | Viral & Gene Therapy | Pharma Process Developers & Manufacturers, Academic/Govt/Hospital Researchers, Pharma/biotech Researchers |
| Disponibilidad de productos a largo plazo | Todos los productos Benzonase® permanecerán en nuestra cartera | |||
| *Declaración del fabricante | ||||
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