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Reactivos y sustratos de inmunodetección

Sustratos de inmunoelectrotransferencia quimioluminiscente Immobilon® Forte, Crescendo y Classico

En la inmunoelectrotransferencia o transferencia Western, el factor más importante para determinar el éxito de los experimentos es la calidad de los reactivos utilizados. Ofrecemos una gama de reactivos para transferencia Western preoptimizados para funcionar de forma sinérgica y proporcionar fuertes señales específicas así como un bajo fondo para ayudarle a producir rápidamente resultados con calidad para publicación.



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Reactivos bloqueantes

El bloqueo de los sitios de membrana no ligados evita la unión inespecífica de anticuerpos que puede producir un elevado ruido de fondo. La leche tradicional, la gelatina y otros bloqueantes proteicos son eficaces para muchas aplicaciones de transferencia, pero pueden reducir la sensibilidad o la detección al enmascarar la señal o interferir en la detección de dianas proteicas específicas. Los reactivos de cancelación de ruido Immobilon®Block consisten en disoluciones tampón sin proteínas listas para usar optimizadas para reducir los niveles de ruido de fondo cuando se utiliza detección quimioluminiscente, fluorescente o de fosfoproteínas.

Conjugados de estreptavidina y anticuerpo secundario

Los métodos modernos de inmunodetección se basan en la detección ligada a enzimas utilizando estreptavidina o anticuerpos secundarios unidos covalentemente a enzimas como la peroxidasa de rábano picante (HRP) o la fosfatasa alcalina (AP). La enzima conjugada cataliza la degradación de sustratos específicos, lo que produce la generación de señales. Se dispone de una variedad de conjugados de estreptavidina, proteína A, proteína G y anticuerpos secundarios para la transferencia Western. También ofrecemos una amplia selección de sustratos de la HRP y la AP para la detección quimioluminiscente, cromógena y quimiofluorescente en la inmunotransferencia.

SUSTRATOS QUIMIOLUMINISCENTES PARA TRANSFERENCIA WESTERN

Los sustratos Immobilon® de la HRP para la detección quimioluminiscente proporcionan una mayor sensibilidad para transferencias más cuantitativas, lo que reduce los costes al permitirle disminuir la concentración de anticuerpos utilizados para la detección. Elija entre una cartera de sustratos Immobilon® con diversas sensibilidades en prácticos formatos listos para usar o de dos componentes para optimizar la detección en su transferencia Western.

  • Los sustratos quimioluminiscentes Immobilon®Classico, Crescendo y Forte constan de una familia de reactivos premezclados listos para usar para la detección basada en la peroxidasa que se ofrece en una gama de sensibilidades para proporcionar relaciones señal-fondo óptimas en un espectro de concentraciones de la proteína deseada. Límites de detección:
    • Immobilon®Classico: ~ 6 pg de la proteína deseada
    • Immobilon® Crescendo: ~ 1-3 pg de la proteína deseada
    • Immobilon® Forte: ~ 400 fg de la proteína deseada
  • Los sustratos de la HRP quimioluminiscente Immobilon® ECL Ultra y Western brindan una sensibilidad excepcional y una larga vida de la señal en formatos de dos componentes estándar. Estas formulaciones permiten el uso de disoluciones de anticuerpos primarios más diluidas para la detección mediante inmunotransferencia. Límites de detección:
    • Sustrato de la HRP Immobilon® Western: ~ 400fg de la proteína deseada
    • Sustrato Immobilon®ECL Ultra: rango bajo de femtogramas
Sensibilidades de los sustratos quimioluminiscentes Immobilon® para la inmunoelectrotransferencia

Figura 1.Sensibilidades relativas de los sustratos quimioluminiscentes Immobilon® para la inmunoelectrotransferencia

Los reactivos de detección de electroquimioluminiscencia (ECL) Cytiva™ Amersham™ utilizan una detección mejorada de la HRP basada en el luminol, con diferentes formulaciones disponibles destinadas a cubrir diferentes necesidades de aplicación de la transferencia Western.

  • Se recomiendan los reactivos de detección de la transferencia Western mediante ECL Cytiva Amersham™ para las aplicaciones confirmatorias de la inmunoelectrotransferencia.
  • El reactivo de detección de la transferencia Western Cytiva Amersham™ ECL Prime permite la detección de proteínas muy abundantes y poco abundantes en la misma aplicación.
  • Los reactivos de detección de la transferencia Western Cytiva Amersham™ ECL Select ofrecen una gran sensibilidad incluso cuando se utilizan anticuerpos primarios y secundarios diluidos.
  • El reactivo de detección de la transferencia Western Cytiva Amersham™ ECL Start se desarrolló para la detección quimioluminiscente de proteínas de expresión media y alta.

SUSTRATOS CROMÓGENOS PARA TRANSFERENCIA WESTERN

En la detección cromógena se utiliza una enzima conjugada con peroxidasa (HRP) o fosfatasa alcalina (AP) para catalizar una reacción que produce el depósito de un precipitado coloreado insoluble para su detección. Nuestros sustratos cromógenos para transferencia Western están disponibles en forma de disolución, polvo y comprimido para proporcionar opciones flexibles de almacenamiento y uso.

  • Los comprimidos SIGMAFAST™ DAB (sustrato cromógeno de la HRP) están compuestos por un sustrato precipitante colorimétrico que produce un color marrón tras la reacción con la peroxidasa de rábano picante y pueden disolverse en agua para preparar una disolución tamponada lista para usar para detección mediante inmunotransferencia.
  • Los BCIP/NBT (azul/morado) y BCIP/TNBT (azul/marrón)Single Reagent (sustratos cromógenos de la AP) son sustratos colorimétricos muy sensibles de la fosfatasa alcalina.
  • El sustrato de membrana de la HRP de un componente TMB mejorado (sustrato cromógeno de la HRP) es un sustrato colorimétrico de un solo componente que da lugar a un producto de color azul oscuro.

Potenciadores de la señal

  • El potenciador de la señal Immobilon® está diseñado para ser utilizado en aplicaciones de transferencia Western cuando se observa una intensidad de señal baja. La mejora de la reacción anticuerpo-antígeno puede producir un aumento de 2 a 10 veces en la intensidad de la señal. El potenciador de la señal Immobilon® es compatible con membranas de PVDF y de nitrocelulosa y puede utilizarse con métodos de detección cromógenos, quimioluminiscentes y fluorescentes.
  • El kit potenciador de la inmunorreacción SignalBoost™ está diseñado para mejorar la señal quimioluminiscente o colorimétrica deseada en membranas de nitrocelulosa o de PVDF

Reactivos y kits para deshibridación y producción de nuevas sondas

Los reactivos de deshibridación y producción de nuevas sondas están especialmente formulados para eliminar rápida y eficazmente los anticuerpos de las transferencias Western sin afectar de manera significativa a las proteínas inmovilizadas.