Merck

Tinciones para gel de electroforesis de proteínas

Después de la separación por electroforesis, las bandas de proteínas se visualizan normalmente con colorantes de gel. Utilizando una reacción de unión al colorante o una reacción química productora de color, las tinciones de gel de proteínas reaccionan selectivamente con las proteínas para producir un gel teñido. Las tinciones de gel de proteínas se seleccionan normalmente en función del tamaño inicial de la muestra, el método de detección deseado y los requisitos de compatibilidad para el análisis posterior.




Disoluciones de fijación

Después de la electroforesis en gel, las proteínas suelen «fijarse» al gel para evitar la dispersión de las proteínas antes de la tinción. Ciertas tinciones de gel contienen sustancias químicas que evitan la necesidad de fijar los geles antes de la tinción.

Tinciones colorimétricas para geles de proteínas

  • El azul brillante de Coomassie se utiliza para teñir proteínas en geles de poliacrilamida a través de interacciones electrostáticas con los grupos amino y carboxilo de las proteínas.
  • La tinción de gel de proteínas ReadyBlue™ es un colorante coloidal de Coomassie rápido y sensible para geles de poliacrilamida que se proporciona como una disolución lista para usar, lo que permite un protocolo más rápido y simplificado. Puede obtenerse imágenes de ReadyBlue™ mediante métodos colorimétricos o de fluorescencia IR. Esta formulación segura no contiene disolventes orgánicos ni ácido fosfórico y puede reutilizarse hasta 3 veces. Se ha demostrado una sensibilidad de hasta 2 ng por banda con ReadyBlue™.
  • La tinción InstantBlue™ para proteínas es una tinción en disolución lista para usar que está especialmente formulada para una detección rápida, sensible e inocua de sus proteínas. Los geles de proteínas pueden teñirse con InstantBlue™ en cuestión de minutos sin necesidad de lavarlos, fijarlos o desteñirlos. La formulación InstantBlue™ es no tóxica y no contiene metanol.
  • El reactivo de tinción de gel EZBlue™ es un práctico colorante coloidal de proteínas azul brillante de Coomassie G-250, sensible e inocuo que mejora los resultados de la electroforesis de proteínas a la vez que reduce significativamente el tiempo de tinción. Como tinción coloidal, sólo reacciona con las proteínas, no con el propio gel. La tinción de fondo se reduce, por lo que las bandas de proteínas pueden visualizarse casi de inmediato en geles de poliacrilamida y membranas de PVDF. No es necesaria ninguna etapa de eliminación de la tinción, aunque un lavado con agua puede intensificar las bandas y clarificar el fondo. El reactivo EZBlue™ es extremadamente sensible, detectando concentraciones de tan sólo 5 ng de proteína.
  • El kit reversible de detección de proteínas es un sistema de detección exclusivo diseñado para la tinción de proteínas en membranas de nailon, nitrocelulosa y PVDF o en geles PAGE con una sensibilidad de detección similar a la de las tinciones de Coomassie. La mayor parte de los otros colorantes producen fondos altos en las membranas de nailon debido a fuertes interacciones de carga con la membrana. La tinción es fácilmente reversible con una disolución de EDTA para que la membrana de transferencia pueda reutilizarse en una transferencia Western o para el análisis de secuencia de aminoácidos.
  • El colorante azul negro de naftol puede utilizarse para teñir proteínas en geles de poliacrilamida, geles de agarosa y membranas de nitrocelulosa. Después de la electroforesis, se recomienda fijar las proteínas en el gel. A continuación, se tiñe el gel con azul negro de naftol al 0,1 % en ácido acético al 7 % (v/v) durante al menos 2 horas y se destiñe con una disolución de ácido acético al 7 % (v/v). La sensibilidad de la detección es aproximadamente el 20 % de la de azul de Coomassie
  • Proporcionando la mayor sensibilidad, el kit de tinción de plata ProteoSilver™ tiene una sensibilidad de ≥ 0,1 ng de proteína por banda con un tiempo de incubación de 3-12 minutos. Esta tinción se recomienda para proteínas muy poco abundantes y es compatible con aplicaciones MALDI-TOF.

Tinciones fluorescentes para geles de proteínas

  • La tinción fluorescente del gel de proteínas en 1 paso EZFluor™ es una tinción fluorescente de gel de proteínas lista para usar que requiere sólo un paso de tinción de 5-30 minutos sin fijación y puede detectar cantidades tan pequeñas como aproximadamente 1-10 ng de proteína por banda. La tinción es totalmente compatible con la espectrometría de masas y la secuenciación de Edman.
  • La tinción fluorescente del gel de proteínas en 1 paso EZFluor™ UV es una tinción de gel de proteínas lista para usar diseñada para la obtención de imágenes utilizando un transiluminador UV y un filtro de bromuro de etidio compatible con la espectrometría de masas.
  • La tinción del gel de proteínas SYPRO® Ruby es una tinción fluorescente ultrasensible lista para usar para la detección de proteínas separadas por electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE). Esta tinción, diseñada especialmente para utilizar en PAGE 2-D, ha demostrado ser una excelente elección para geles PAGE 1-D y de enfoque isoeléctrico (IEF). La tinción de gel de proteínas SYPRO® Ruby alcanza una sensibilidad comparable a la de muchas técnicas de tinción de plata.
  • SYPRO® Orange es similar a SYPRO® Red, aunque es un poco más brillante y proporciona una fluorescencia de fondo ligeramente superior. La iluminación UV o con banda ancha excita con eficiencia el colorante. No es adecuado para teñir proteínas en membranas de transferencia o geles de IEF y muestra una sensibilidad reducida cuando se tiñen proteínas en geles 2-D.

Reactivos para decoloración

  • CoZap se utiliza para la eliminación rápida de la tinción azul de Coomasie. La exclusiva almohadilla CoZap se coloca directamente en la bandeja de desteñido y absorbe todo el colorante libre en la disolución, eliminando así la necesidad de cambiar la disolución de desteñido.