[Saltar al contenido](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es) Productos Carrito0 ESES Productos ProductosAplicacionesServiciosRecursosApoyo [Inicio de sesión / Registrarse](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Búsqueda de pedido](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/order-lookup) [Pedido rápido](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/quick-order) Carrito0 [Inicio](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es)[Aplicaciones de la reacción en cadena de la polimerasa](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/applications/genomics/pcr)Protocolo estándar de PCR # Protocolo estándar de PCR ## Cómo realizar una PCR Una configuración estándar de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) consta de cuatro pasos: 1. Añadir los reactivos necesarios o la mezcla maestra y la molde a los tubos de PCR. 2. Mezclar y centrifugar. \*Añadir aceite mineral para evitar la evaporación en un termociclador sin tapa calefactada. 3. Amplificar según los parámetros del termociclador y de los cebadores. 4. Evaluar el ADN amplificado mediante electroforesis en gel de agarosa seguida de tinción con bromuro de etidio.  A continuación se describen estos pasos con mayor detalle, junto con algunos consejos para la selección de materiales y reactivos. Se trata de un protocolo básico de PCR que utiliza la ADN polimerasa Taq. ## Pasos de la PCR y componentes esenciales de la PCR La resolución de problemas en una reacción de PCR implica muchos factores. Ve esta animación para descubrir cómo la selección de los componentes y las condiciones de ciclo adecuados a tus necesidades puede ayudarte a conseguir resultados óptimos. * * * Encontrarás protocolos adicionales para otras polimerasas o técnicas avanzadas de PCR en la sección [«Protocolos»](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/pcr-technologies-protocols-introduction) de nuestra Guía de tecnologías de PCR. Obtenga más información sobre la PCR estándar, incluyendo qué es, en nuestra [página «Conceptos básicos de la PCR](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/routine-amplification)». ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Reactivos: ¿qué se necesita para la PCR? Reactivo utilizado en la PCRProducto recomendado   ADN polimerasa *Taq*Seleccione la ADN polimerasa *Taq* según sus preferencias. (Consulte [la tabla de polimerasas *Taq*](https://www.sigmaaldrich.com#taqdnapolymerase) que figura más abajo) . Agua de grado PCRAgua para reactivos de PCR Cebadores diluidos a concentración de trabajo Las soluciones madre de 10 µM son suficientes para la mayoría de los ensayos. Oligonucleótidos[Oligonucleótidos personalizados](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/products/molecular-biology-and-functional-genomics/oligos-and-qpcr-probes/custom-predesigned-dna-oligos-and-qpcr-probes) ADN a amplificarSuministrado por el investigador Pipetas específicas  Ciclador térmicoCon bloques de pocillos de distintos tamaños o multiformato Puntas de pipeta con filtro estéril  Tubos de microcentrífuga estériles de 1,5 ml con tapón de roscaTubos de microcentrífuga Corning® con tapón de rosca Tubos o placas de PCRElige los que se adapten a tu termociclador:      Tubos de PCR individuales de 200 µl de pared fina     Tubos en tira de 200 µL     Placas multipocillo y sellado de placas Mezcla de dNTPMezcla de desoxinucleótidos que contiene 10 mM de cada uno de los siguientes: dATP, dCTP, dGTP y dTTP \*Las mezclas listas para usar ya incluyen los dNTP ## ¿Qué es la polimerasa *Taq*? La ADN polimerasa *Taq* es una enzima termoestable derivada de la bacteria termófila *Thermus aquaticus.* Se utiliza habitualmente para amplificar fragmentos de ADN en la PCR. La enzima se presenta en forma recombinante, expresada en *E. coli*. Es capaz de soportar calentamientos repetidos a 95 °C (tal y como exige la técnica de la PCR) sin una pérdida significativa de actividad. La enzima tiene un peso molecular de aproximadamente 94 kDa según el análisis por SDS-PAGE y no presenta actividad endonucleasa ni exonucleasa detectable. Posee actividad de ADN polimerasa en sentido 5'→3' y actividad de exonucleasa en sentido 5'→3'. Cada lote de ADN polimerasa *Taq* se somete a pruebas de amplificación por PCR y secuenciación de doble cadena. La enzima se suministra a una concentración de 5 unidades/µL y se presenta con un tampón de reacción 10x optimizado. [](https://www.sigmaaldrich.com) ### ADN polimerasa *Taq* estándar Utilice la tabla siguiente para seleccionar una mezcla adecuada de ADN polimerasa *Taq* para sus condiciones de reacción. Elija entre formulaciones transparentes o teñidas de rojo, con o sin cloruro de magnesio (MgCl₂), o una mezcla lista para usar o una mezcla maestra con tampón y dNTP. Que contenga MgCl₂             MgCl₂ separadoPremezclado                                        Fórmula transparente sin coloranteCon colorante rojo para su aplicación directa sobre gelesFormulación transparente sin coloranteCon colorante rojo para su aplicación directa en gelesFormulación transparente sin colorante ADN polimerasa *Taq* de *Thermus aquaticus* (D1806)Polimerasa de ADN *REDTaq®* (D4309)ADN polimerasa Taq de *Thermus aquaticus*, sin MgCl₂ (D4545)Mezcla de reacción de PCR *REDTaq®* ReadyMix™ (R2523)Mezcla de reacción de PCR ReadyMix™ *Taq* (P4600) __Definición de la unidad:__ Una unidad incorpora 10 nmol de desoxirribonucleósidos trifosfatos totales en ADN precipitable con ácido en 30 minutos a 74 °C. ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Procedimiento: Pasos de la PCR Las condiciones óptimas para la concentración de la *Taq* ADN polimerasa, el ADN molde, los cebadores y el MgCl₂ dependerán del sistema que se utilice. Puede ser necesario determinar las condiciones óptimas para cada componente individual. Esto es especialmente cierto en el caso de la *Taq* ADN polimerasa, los parámetros de ciclado y la concentración de MgCl₂. Se recomienda valuar la enzima y el MgCl₂ para determinar la eficiencia óptima. 1. __Añade los reactivos a un tubo del tamaño adecuado__ en el orden indicado en la tabla. (Selecciona la tabla adecuada para la preparación de la reacción: reactivos estándar o premezclados.) Para un gran número de reacciones, se debe preparar una mezcla maestra sin la molde y dividirla en alícuotas en los tubos de reacción. Al final, se debe añadir la molde a los tubos correspondientes. ### Reacción de PCR estándar ImporteComponenteConcentración final w µLAgua  5 µLTampón de PCR 10x ([P2192](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/product/sigma/P2192) o [P2317](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/product/sigma/P2317))\*1x 1 µLMezcla de desoxinucleótidos200 µM w µLCebador directo (normalmente de 15 a 30 bases de longitud)0,1-0,5 µM x µL Cebador inverso (normalmente de 15 a 30 bases de longitud) 0,1-0,5 µM 0,5 µL ADN polimerasa *Taq\** 0,05 unidades/µL y µL ADN molde (normalmente 10 ng) 200 pg/µL z µL 25 mM de MgCl₂ (utilizar únicamente con el tampón [P2317](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/product/sigma/P2317)) 0,1-0,5 mM __50 µL__ __Volumen__ __total de reacción__ \*Compra el tampón y la polimerasa *Taq* juntos: D1806, D4309 o D4545 ### Reacción de PCR lista para usar ImporteComponenteConcentración final 25 µL Mezcla lista para usar ([R2523](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/product/sigma/R2523) o [P4600](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/product/sigma/P4600))   w µL Cebador directo (normalmente de 15 a 30 bases de longitud) 0,1-0,5 µM x µL Cebador inverso (normalmente de 15 a 30 bases de longitud) 0,1-0,5 µM y µL ADN molde (normalmente 10 ng) 200 pg/µL z µL Agua   __50 µL__ __Volumen total de la reacción__ 2\. __Mezcla suavemente con un vórtex y centrifuga brevemente__ para que todos los componentes se depositen en el fondo del tubo. Nota: Añadir 50 µL de aceite mineral en la parte superior de cada tubo para evitar la evaporación si se utiliza un termociclador sin tapa calefactada. 3\. __Amplificar.__ Los parámetros de amplificación variarán en función de los cebadores y del termociclador utilizado. Puede ser necesario optimizar el sistema para cada cebador, molde y termociclador en particular. ### Parámetros típicos de ciclado Se recomiendan entre 25 y 30 ciclos de amplificación. | | | | |-----------------------------------|----------------|----------| | Paso de la PCR | Temperatura °C | Duración | | Desnaturalización de la plantilla | 94 °C | 1 min | | Hibridación de los cebadores | 55 °C | 2 min | | Extensión | 72 °C | 3 min | 4\. __El ADN amplificado puede analizarse mediante [electroforesis en gel de agarosa](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/protocol/genomics/nucleic-acid-gel-electrophoresis/nucleic-acid-electrophoresis) y posterior tinción con bromuro de etidio.__       Nota: La capa de aceite mineral puede eliminarse mediante una única extracción con cloroformo (1:1), recuperando así la fase acuosa. ### [](https://www.sigmaaldrich.com)Reactivos para la electroforesis de ácidos nucleicos - Agarosa (geles prefabricados, polvo, etc.) - Tampones como MOPS-EDTA-acetato de sodio, tris-acetato-EDTA (TAE) o tris-borato-EDTA (TBE) - Solución de carga del gel y tampón de carga de muestras para ARN - Colorante para electroforesis, como el bromuro de etidio 1\. Cheng S, Fockler C, Barnes WM, Higuchi R. 1994. Effective amplification of long targets from cloned inserts and human genomic DNA.. Proceedings of the National Academy of Sciences. 91(12):5695-5699. [https://doi.org/10.1073/pnas.91.12.5695](https://doi.org/10.1073/pnas.91.12.5695) 2\. Chou Q. 1992. Minimizing deletion mutagenesis artifact duringTaqDNA polymerase PCR byE.coliSSB. Nucl Acids Res. 20(16):4371-4371. [https://doi.org/10.1093/nar/20.16.4371](https://doi.org/10.1093/nar/20.16.4371) 3\. Innis MA. 1995. PCR Strategies. New York: Academic Press. 4\. Innis MA. 1990. PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications. New York: Academic Press. 5\. Innis MA, Myambo KB, Gelfand DH, Brow MA. 1988. DNA sequencing with Thermus aquaticus DNA polymerase and direct sequencing of polymerase chain reaction-amplified DNA.. Proceedings of the National Academy of Sciences. 85(24):9436-9440. [https://doi.org/10.1073/pnas.85.24.9436](https://doi.org/10.1073/pnas.85.24.9436) 6\. Newton CR. 1995. PCR: Essential Data. 1. Wiley-Blackwell. 7\. Olive DM, Simsek M, Al-Mufti S. 1989. Polymerase chain reaction assay for detection of human cytomegalovirus.. 27(6):1238-1242. [https://doi.org/10.1128/jcm.27.6.1238-1242.1989](https://doi.org/10.1128/jcm.27.6.1238-1242.1989) 8\. Pääbo S, Gifford JA, Wilson AC. 1988. Mitochondrial DNA sequences from a 7000-year old brain. Nucl Acids Res. 16(20):9775-9787. [https://doi.org/10.1093/nar/16.20.9775](https://doi.org/10.1093/nar/16.20.9775) 9\. Erlich HA. 1989. PCR technology : principles and applications for DNA amplification. New York: Stockton Press. 10\. Sambrook J, Fritsch E, Maniatis T. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 1. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 11\. Sarkar G, Kapelner S, Sommer SS. 1990. Formamide can dramatically improve the specificity of PCR. Nucl Acids Res. 18(24):7465-7465. [https://doi.org/10.1093/nar/18.24.7465](https://doi.org/10.1093/nar/18.24.7465) 12\. Winship PR. 1989. An lmproved method for directly sequencing PCR-amplified material using dimethyl sulphoxide. Nucl Acids Res. 17(3):1266-1266. [https://doi.org/10.1093/nar/17.3.1266](https://doi.org/10.1093/nar/17.3.1266) ## Declaración de licencia de la etiqueta ### AVISO AL COMPRADOR: EXENCIÓN DE RESPONSABILIDAD RELATIVA A LA LICENCIA La compra de este producto no conlleva la concesión de ninguna licencia en virtud de ninguna de las patentes estadounidenses n.º 5.804.375, 5.994.056, 6.171.785, 6.214.979, 5.538.848, 5.723.591, 5.876.930, 6.030.787 y 6.258.569, ni de las patentes correspondientes fuera de Estados Unidos, ni de ninguna otra patente o solicitud de patente relacionada con los procesos de la nucleasa 5’ y del colorante de unión al ADN bicatenario. Para obtener más información, póngase en contacto con el director de licencias de Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, EE. UU. ## Materiales Lo sentimos, se ha producido un error inesperado Response not successful: Received status code 500 __Artículos relacionados__ - [Instalación y uso de los sistemas de purificación de agua Milli-Q® SQ *2Series*](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/wet-chemical-analysis/installation-use-of-milli-q-2series-water-purification-system) - [Protocolo de hibridación de oligonucleótidos](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/protocol/genomics/pcr/annealing-oligos) - [Optimized PCR-based Detection of Mycoplasma](https://www.sigmaaldrich.com/ES/en/technical-documents/protocol/cell-culture-and-cell-culture-analysis/cell-counting-and-health-analysis/optimized-pcr-based-mycoplasma-detection) - [Recombinant Selection](https://www.sigmaaldrich.com/ES/en/technical-documents/protocol/genomics/cloning-and-expression/restriction-enzyme-cloning-manual-recombinants) - [Whole Genome Amplification: Blood Card Protocol](https://www.sigmaaldrich.com/ES/en/technical-documents/protocol/genomics/dna-and-rna-purification/blood-card) - [Deoxyribonuclease I](https://www.sigmaaldrich.com/ES/en/technical-documents/protocol/genomics/dna-and-rna-purification/deoxyribonuclease-i) - [Extract-N-Amp™ Tissue PCR Kit Protocol](https://www.sigmaaldrich.com/ES/en/technical-documents/protocol/genomics/dna-and-rna-purification/extract-n-amp-tissue-pcr-kit) - [Saliva DNA Extraction & WGA Amplification](https://www.sigmaaldrich.com/ES/en/technical-documents/protocol/genomics/dna-and-rna-purification/extraction-of-dna-from-saliva) - [Ver más](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) __Categorías de productos relacionados__ - [Películas, láminas y cintas de sellado](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/products/labware/sealing-films-foils-and-tapes) - [Método analítico: Aluminio (total) en efluentes](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/photometry-and-reflectometry/aluminium-total-in-effluents) - [Método analítico: Aluminio (total) en efluentes, elevado contenido de materia orgánica](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/photometry-and-reflectometry/aluminium-total-in-effluents-high-organic-content) - [Método analítico: Aluminio (total) en caliza](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/photometry-and-reflectometry/aluminium-total-in-lime-stone) - [Amonio en los efluentes](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/photometry-and-reflectometry/ammonium-in-effluents) - [Método analítico: Garantía de calidad analítica, patrón para el dióxido de cloro](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/photometry-and-reflectometry/analytical-quality-assurance-standard-for-chlorine-dioxide) - [Método analítico: Garantía de calidad analítica, patrón para el formaldehído](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/photometry-and-reflectometry/analytical-quality-assurance-standard-for-formaldehyde) - [Método analítico: Garantía de calidad analítica, patrón de cloro libre (DIN)](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/photometry-and-reflectometry/analytical-quality-assurance-standard-for-free-chlorine-din) - [Ver más](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) Arriba __Inicie sesión para continuar.__ Para seguir leyendo, inicie sesión o cree una cuenta. 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Desarrollo. Producción.__ Somos un proveedor líder en la industria global de las ciencias de la vida, con soluciones y servicios para la investigación, el desarrollo y la producción biotecnológicos, y el desarrollo y la producción de terapias farmacológicas. [](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es) [SolucionesSigma-Aldrich®](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/life-science/sigma-aldrich)[SolucionesBio Reliance®](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/life-science/bioreliance)[Soluciones Millipore®](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/life-science/millipore)[SolucionesSAFC®](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/life-science/safc)[SolucionesMilli-Q®](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/life-science/milliq)[Soluciones Supelco®](https://www.sigmaaldrich.com/ES/es/life-science/supelco) © 2026 Merck KGaA, Darmstadt, Alemania y/o sus filiales. Todos los derechos reservados, incluyendo la minería de textos y datos para el entrenamiento de IA y tecnologías similares. 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