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Sistema mPAGE® Lux Casting para geles de SDS-PAGE

Descubra el sistema mPAGE® Lux Casting para geles de SDS-PAGE listos para usar en 3 minutos. Geles de SDS-PAGE recientes que están listos cuando los necesita.

Sistema mPAGE® Lux Casting para geles de SDS-PAGE

¿Cómo se prepara un gel para SDS-PAGE? La preparación del gel suele requerir el vertido, la separación y la concentración de los geles en un proceso gradual y laborioso. Tradicionalmente los investigadores tienen pocas opciones para satisfacer sus necesidades de preparación de geles y electroforesis. Nuestro innovador sistema mPAGE® Lux de preparación de geles SDS-PAGE está diseñado para proporcionar la flexibilidad de los geles preparados a mano y la fiabilidad de los geles prefabricados, sin la pérdida de calidad o tiempo, ni el coste significativamente mayor, que acompañan a las opciones alternativas. Geles en menos de tres minutos con nuestro sistema mPAGE® Lux Casting. Puede decir adiós a los métodos convencionales y sus etapas manuales y laboriosas para la creación de geles. Así de reciente.

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Características y ventajas del sistema de preparación de geles mPAGE® Lux

El sistema mPAGE® Lux Casting sustituye su proceso de preparación de gel por métodos más rápidos, sencillos y seguros, y resultados más reproducibles. Cure un minigel en 90 segundos con el sistema mPAGE®Lux Casting en comparación con los métodos convencionales que tardan más de 90 minutos. Nuestro rápido procedimiento de preparación del gel con irradiación UV acelera el curado de los reactivos bis-tris mPAGE® Lux, mientras que la composición química del gel bis-tris permite tiempos de procesamiento más cortos en comparación con los métodos convencionales.

La fotopolimerización en un solo paso, utilizando controles precisos del sistema junto con menos etapas de preparación, implica una menor posibilidad de error. Nuestro lanzador mPAGE® evita las fugas y el uso de geles bis-tris proporciona una calidad de banda superior en comparación con los geles tris-glicina preparados a mano. Además, en el kit de reactivos mPAGE® Lux, el kit de reactivos mPAGE® TurboMix y los geles prefabricados mPAGE® utilizan la química bis-tris y comparten los mismos tampones de migración y tinciones de gel. Nuestro sistema de preparación de geles mPAGE® Lux no utiliza APS ni TEMED y ofrece una opción más segura con menos sustancias químicas tóxicas.

Procedimiento tradicional de preparación manual de geles

Infografía del procedimiento tradicional de preparación manual de geles SDS-PAGE en la que se indica la prolongación de los pasos y un tiempo de polimerización de 90 minutos o más

Procedimiento de trabajo mPAGE®Lux

Procedimiento de preparación de geles bis-tris para el sistema mPAGE® Lux Casting que muestra menos pasos y un tiempo de polimerización inferior a 3 minutos.

Figura 1.Procedimiento de preparación de gel tradicional frente al de mPAGE® Lux. El sistema mPAGE® Lux Casting consta de menos pasos totales, un menor tiempo de polimerización y menos residuos tóxicos en comparación con la tecnología de preparación tradicional de gel. Los geles creados según el sistema mPAGE® Lux Casting son compatibles con el depósito de minigel mPAGE® y las cubetas Bio-Rad Mini-PROTEAN. Para obtener una resolución excepcional y tiempos de ejecución reducidos, utilice nuestros tampones mPAGE®. Los geles Lux son compatibles con tampones y reactivos de tinción compatibles con bis-tris.

¿Cuáles son los pasos para la preparación del gel?

La preparación de un gel SDS-PAGE a menudo abarca pesaje, premezcla de disoluciones de gel, vertido y tiempo de espera para la polimerización. Aunque a menudo se citan como una solución más económica, los métodos convencionales de preparación a mano de los geles requieren tiempo y la ejecución de muchos pasos que pueden dar lugar a formulaciones no uniformes de gel. La calidad de los geles moldeados a mano y los datos que pueden contribuir a generar dependen de la uniformidad de la formulación, de modo que no acaben desperdiciándose los valiosos reactivos y el tiempo si los geles fallan.

Comparación de datos del gel bis-tris y el tris-glicina para el sistema mPAGE® Lux Casting

Figura 2.Comparación de la calidad de los datos con el gel mPAGE® Lux bis-tris y el gel de tris-glicina preparado a mano. Calidad de banda del gel mPAGE® Lux bis-tris (izquierda) en comparación con el gel de tris-glicina preparado a mano (derecha). Ambos geles consisten en acrilamida al 10 % y fueron cargados con una valoración de lisado de células humanas A431. El tiempo de ejecución de la electroforesis es de 42 minutos a 200V (gel Lux) y de 119 minutos a 120V (gel tris-glicina). Los geles se tiñen con la tinción de gel ReadyBlue™ Coomassie.

El sistema mPAGE® Lux Casting ofrece una solución innovadora para su proceso de preparación de gel. Ya no deberá elegir entre ahorrar tiempo o recursos. Nuestro novedoso sistema de preparación de geles permite a los investigadores fundir sus geles fácil y rápidamente cuando los necesitan, a una fracción del coste de las tecnologías de geles prefabricados. Mejore la eficacia de su laboratorio y actualice el procedimiento de electroforesis en gel con el sistema mPAGE® Lux Casting.

Métodos de inmunoelectrotransferencia para el sistema mPAGE® Lux Casting.

Figura 3.Inmunoelectrotransferencia para comparación de métodos de transferencia en húmedo, rápido y semiseco. Las comparaciones se realizaron utilizando geles mPAGE® Lux bis-tris al 12 % que se procesaron con una valoración de lisado de células humanas A431 y con varios métodos de transferencia a membranas Immobilon®-P. Las membranas se transfirieron con anticuerpos anti-EGFR y anti-ERK1/2, y luego se detectaron con el sustrato Immobilon® ECL Ultra Western HRP. Método turbo = transferencia usando el sistema de transferencia Bio-Rad Trans-Blot® Turbo™ y los paquetes de transferencia Trans-Blot® Turbo™.

Cuatro geles mPAGE® Lux demostraron un rendimiento constante cuando se analizaron lisados A431 en las mismas condiciones.
Se demuestra la reproducibilidad del sistema mPAGE® Lux Casting a través de cálculos de desviación estándar de la distancia de migración relativa de los marcadores de peso molecular sin teñir para cada una de las cuatro bandas de proteína de gel bis-tris cuando se ejecuta en las mismas condiciones.

Figura 4: Reproducibilidad de los geles mPAGE®Lux bis-tris. A. Se prepararon cuatro geles al 8 % y se desarrollaron con valoración de lisado de células humanas A341 posteriormente teñidos con tinción de gel ReadyBlue™ Coomassie. B. Se calculó la distancia relativa de migración (Rf) para el marcador de peso molecular no teñido para cada gel. Se muestra la desviación estándar para cada banda de proteína.

La evaluación de la vida útil de los reactivos mPAGE® Lux sugiere una estabilidad de hasta 12 meses.

Figura 5.Análisis de la vida útil de los reactivos mPAGE® Lux bis-tris. Geles mPAGE® Lux bis-tris preparados utilizando reactivos (A) de 0 meses, (B) de 6 meses o (C) de 12 meses. No se observa ninguna diferencia en el patrón de migración ni en el tiempo de migración.

Sistema mPAGE® Lux Casting y kits de reactivos bis -tris

Añada el sistema mPAGE® Lux Casting a su laboratorio y disponga de geles listos para usar en menos de 3 minutos. Respire y acostúmbrese a un proceso de preparación de gel rápido con menos residuos y sin la preocupación de fracasar. Así de reciente. Nuestro sistema mPAGE® Lux Casting consta de la estación de curado mPAGE® Lux, el tubo de mezcla mPAGE® Lux, el lanzador de gel mPAGE® Gel Caster, el peine mPAGE® con 10 pocillos y 15 pocillos, la placa espaciadora mPAGE® Mini y las placas cortas enmascaradas mPAGE® Lux con 10 pocillos y 15 pocillos. Para el sistema mPAGE® Lux Casting de 0,75 mm de grosor, no se incluyen las placas cortas enmascaradas ni el peine de 15 pocillos. Las descripciones y configuraciones de los kits son las siguientes:

*Disponible con enchufe NEMA 5 (YP12), CEE 7/7 (YP22), tipo G (YP61), YP18 o tipo I (YP03).
Estación de preparación de gel mPAGE® Lux

Estación de curado mPAGE® Lux

El kit de reactivos mPAGE® Lux bis-tris es un kit de reactivos específico para el sistema mPAGE® Lux Casting. El kit de reactivos mPAGE® Lux bis-tris consta de 3 componentes: disolución de separación, diluyente y disolución de concentración. El kit admite una gran variedad de geles de acrilamida entre el 8,0 y el 13,5 %. A continuación se muestra la descripción y la configuración del kit de reactivos mPAGE® Lux:

 Protocolo de preparación de gel SDS-PAGE mPAGE® Lux

Todas las disoluciones deben estar protegidas de la luz solar para evitar la polimerización. Antes de preparar los geles, lleve todas las disoluciones a temperatura ambiente.

Gel separador

  1. Prepare la disolución de gel separador mezclando la disolución separadora y el diluyente. Consulte la tabla siguiente para conocer los volúmenes de mezcla. La disolución de gel separador se puede preparar en un lote grande para hacer varios geles secuencialmente.
  2. Con una pipeta limpia, añada la Disolución separadora a un tubo de mezcla negro u otro recipiente opaco.
  3. Con una pipeta limpia, añada el Diluyente al mismo tubo de mezcla.
  4. Mezcle volteando suavemente el recipiente de un extremo a otro. No agite.

Volúmenes de la disolución de gel separador

Utilice los siguientes volúmenes para hacer un único gel de 1,0 mm. Para volúmenes de disolución de 0,75 mm y 1,5 mm, consulte la guía de usuario completa disponible en la página del producto en SigmaAldrich.com.

Gel concentrador

La disolución de concentración está lista para usar directamente desde la botella. Utilice 1,5 ml de disolución concentradora para un gel de 1,0 mm. Importante: No diluya la disolución concentradora.

Preparación del gel

  1. Limpie las placas de vidrio con detergente suave y enjuáguelas con agua desionizada. Limpie con etanol al 70 % antes de su uso.
  2. Monte el mPAGE® Gel Caster con la placa espaciadora mPAGE® y la placa corta enmascarada mPAGE® Lux para formar una casete de vidrio. La placa corta enmascarada debe orientarse de tal modo que el texto quede a la izquierda de la casete. Asegúrese de que ambas placas de vidrio estén alineadas en la parte inferior del bastidor antes de cerrar las abrazaderas. Nota: la placa corta enmascarada mPAGE® Lux debe utilizarse con la estación de curado mPAGE® .
  3. Encienda la estación de curado mPAGE® Lux pulsando el botón de encendido. La estación de curado iniciará una autocomprobación. Una vez completada la autocomprobación, aparecerá la pantalla preparado.
  4. Abra la puerta y coloque el lanzador de gel en la estación de curado, alinee el lanzador detrás de los bordes.
  5. Con una pipeta limpia de 5 ml, añada la disolución de gel separador hasta la línea de llenado indicada en el marco del lanzador de gel mPAGE® Gel Caster.
  6. Con una pipeta limpia de 5 ml, añada lentamente la disolución concentradora hasta la parte superior de la placa corta.
  7. Introduzca lentamente el peine mPAGE® en ángulo para evitar la formación de burbujas de aire debajo de los dientes. Importante: mezclar diferentes formatos de pocillo puede provocar una formación inadecuada de pocillos. Uso:
    • peines de 10 pocillos con placas cortas enmascaradas mPAGE® Lux de 10 pocillos
    • peines de 15 pocillos con placas cortas enmascaradas mPAGE® Lux de 15 pocillos
  8. Limpie la disolución derramada en la parte frontal de la placa corta para evitar el curado incompleto donde se haya derramado.
  9. Cierre la puerta de la estación de curado y seleccione el grosor del gel.
  10. Pulse Iniciar para empezar el curado del gel. Consejo: si va a preparar varios geles, comience el proceso de preparación de gel con el segundo lanzador de gel ahora, mientras que el primer gel se está curando.
  11. Una vez finalizado el curado, abra la puerta y retire el lanzador. Retire la casete del lanzador de gel bajando la pinza tensora para liberar el bastidor del lanzador. A continuación, abra los laterales del marco y deslice la casete hacia fuera desde la parte superior.
  12. Utilice el gel inmediatamente o envuelva la casete en una toalla de papel húmeda y guárdela en una bolsa con cremallera u otro recipiente hermético a 2-8 °C durante un máximo de 2 semanas. No deje las casetes sin envolver, ya que el gel se secará.

Cómo quitar el gel después de la electroforesis

Retire el gel de la casete de vidrio con un raspador de gel. Corte a lo largo de los bordes del gel (derecha) para evitar que el gel se rasgue. Los geles mPAGE® Lux bis-tris SÓLO deben utilizarse con tampón de migración MOPS-SDS o MES-SDS. Los geles bis-tris NO son compatibles con el tampón de migración tris-glicina.

Preparación de gel sostenible con el mPAGE® Lux Casting

Estamos comprometidos con brindar soluciones de trabajo más ecológicas que permitan a nuestros clientes completar su investigación de resolución de proteínas reduciendo a la vez los residuos y los peligros químicos.  En comparación con los procedimientos tradicionales de preparación manual de geles, nuestro sistema mPAGE®Lux Casting reduce la cantidad de residuos de plástico de un solo uso generados por gel hasta en un 26 % y reduce el tiempo y el número de pasos necesarios para crear un gel. El sistema mPAGE®Lux también utiliza fotoiniciadores para sustituir reactivos peligrosos, como TEMED y APS, lo que elimina la exposición a estos reactivos y la necesidad de gestionar los residuos asociados. Descubra los impactantes beneficios en cuanto a ahorro de tiempo y medioambientales de nuestro sistema mPAGE®Lux mientras trabajamos juntos hacia un futuro más sostenible.

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