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Culture de cellules microbiennes

Culture de cellules bactériennes sur des boîtes de gélose

Les cultures de cellules microbiennes sont utilisées en biologie moléculaire pour le clonage et l'expression des protéines recombinantes. Elles sont également utilisées dans des applications cliniques pour isoler, détecter et identifier des microbes pathogènes. La culture microbienne permet de faire croître et se diviser les cellules dans des conditions de laboratoire contrôlées. Les bactéries et autres microbes peuvent être cultivés dans un bouillon liquide ou sur un milieu nutritif gélosé en utilisant des techniques aseptiques pour prévenir toute contamination.

Clonage et expression de protéines recombinantes

Les cultures bactériennes sont utilisées pour l'expression de protéines recombinantes, le clonage et l'amplification de plasmides, le clonage de chromosomes artificiels bactériens (BAC pour Bacterial Artificial Chromosome) et le clonage de cosmides. Les cellules bactériennes peuvent être altérées pour absorber et incorporer des gènes exogènes et des plasmides par le biais d'une transformation. La transformation des cellules compétentes se fait typiquement par l'application d'une électroporation ou d'un choc thermique à des cellules compétentes traitées chimiquement.

Les bactéries transformées sont ensuite identifiées et sélectionnées sur la base d'une antibiorésistance acquise, conférée par de l'ADN plasmidique recombinant, ou en utilisant un criblage "bleu-blanc" pour identifier les bactéries recombinantes exprimant la β-galactosidase comme marqueur. Les levures peuvent également être transformées en utilisant l'électroporation et d'autres méthodes pour des essais avec double hybride de levure et gène rapporteur pour l'étude de l'expression protéique et des interactions des protéines.

Culture en vue de l'isolement et l'identification des microbes

Les cultures microbiennes sont importantes sur le plan médical pour l'isolement, la détection et la différenciation des bactéries et autres microbes responsables de maladies infectieuses. La caractérisation et l'identification à l'aide de méthodes de culture s'appuient à la fois sur le phénotype et le génotype microbiens. Les cellules peuvent être isolées par inoculation d'une boîte d'ensemencement pour produire des colonies pures. Les milieux sélectifs sont utilisés pour inhiber la croissance de certains groupes de microbes, en permettant à d'autres de croître. Les milieux différentiels contiennent des composés qui permettent de distinguer visuellement les microbes d'après l'aspect de leurs colonies ou d'après les changements du milieu environnant résultant de différences au niveau de l'activité métabolique ou hémolytique. Ces milieux contribuent à l'identification des bactéries et autres microbes par la différenciation et l'élimination.


Articles techniques apparentés

  • An introduction to microbial media types, uses and applications. Includes formulations and product selection guide.
  • Antifoams are supplied as two basic types of composition or mixtures of the two. Organic antifoams are of synthetic origin. Silicone-based antifoams are generally considered to be siloxane polymers and are also synthetic.
  • Streptococci- Overview of Detection, Identification, Differentiation and Cultivation Techniques
  • Cell lines for vaccine production and cultivation of SARS CoV-2 and other viruses. Primary, human diploid, and continuous culture cell lines for the propagation of viruses and virus-based vaccines.
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Protocoles apparentés

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  • Initiating a Starter Culture
  • General protocols for growth of competent cells in microbial medium.
  • The selection of plasmids in yeast is based on the use of auxotrophic mutant strains, which cannot grow without a specific medium component (an amino acid, purine, or pyrimidine)
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