Tests de pyrogénicité
Le dépistage des pyrogènes constitue une étape cruciale pour garantir la sécurité des produits médicaux administrés par voie parentérale, tels que les produits pharmaceutiques ou biopharmaceutiques. Il fait partie des essais obligatoires de libération visant à éviter les réactions fébriles potentiellement mortelles provoquées par des substances pyrogènes. Le test d’activation des monocytes (MAT) permet de détecter à la fois les pyrogènes endotoxiques et non endotoxiques au cours d’un seul essai in vitro.
Depuis juillet 2025, le MAT est la méthode de référence selon la Pharmacopée européenne pour la détection des endotoxines et des pyrogènes non endotoxiques, remplaçant ainsi le test des pyrogènes sur le lapin (RPT).
Test d'activation des monocytes (MAT)
Utilisé pour détecter à la fois les endotoxines et les pyrogènes non endotoxiques dans les produits administrés par voie parentérale, tels que les produits pharmaceutiques et biopharmaceutiques, le MAT offre une alternative in vitro aux essais conventionnels sur les animaux, conformément aux directives réglementaires.
Le test des pyrogènes sur le lapin et le test au lysat d’amébocytes de Limulus (LAL) sont largement utilisés pour la détection des pyrogènes. Ces deux méthodes font appel à des animaux et présentent certaines limites. Le test des pyrogènes sur le lapin manque de fiabilité, car la réaction animale peut différer considérablement de la réaction humaine. Dans le test LAL, seules les endotoxines sont détectées, ce qui entraîne un risque pour la sécurité en négligeant les pyrogènes non endotoxiques qui pourraient être présents dans l’échantillon testé.
Pour pallier ces limites, le test d’activation des monocytes (MAT) a été introduit dans la Pharmacopée européenne en 2010 en tant que méthode officielle destinée à remplacer le test des pyrogènes sur le lapin (chapitre 2.6.30 de la Pharmacopée européenne) et est mentionné dans les recommandations de la FDA à l’intention de l’industrie.
Remarque : la Commission de la Pharmacopée européenne a pris la décision de mettre fin au test des pyrogènes sur le lapin conformément au principe des 3R, estimant que le MAT constitue la meilleure alternative. À compter de juillet 2025, le test des pyrogènes sur le lapin (RPT) sera interdit en Europe et le chapitre général 2.6.8 consacré à ce test aura été supprimé.
Test in vitro PyroMAT® pour la détection des pyrogènes endotoxiques et non endotoxiques
Le système PyroMAT® repose sur la lignée cellulaire Mono-Mac-6 et la mesure de l'IL-6. Il offre tous les avantages du test d'activation des monocytes, combinés aux atouts liés à l'utilisation d'une lignée cellulaire.
- Détection d'un large éventail de pyrogènes : la sécurité des patients est garantie si l'ensemble des pyrogènes est testé. À l'instar du test pyrogène sur lapin (RPT), le MAT est efficace tant pour la détection des endotoxines que des pyrogènes non endotoxiques.
- Élargissement de la gamme de produits pouvant être testés : les méthodes les plus couramment utilisées, à savoir le RPT, le test d’endotoxines bactériennes (BET) ou le test LAL, sont limitées quant aux types de produits qu’elles permettent de tester. Le MAT offre une plus grande flexibilité en termes d’applications.
- Test in vitro imitant la réaction immunitaire humaine : pour un modèle prédictif robuste permettant de réduire l’utilisation d’animaux.
- Respect des réglementations et des directives internationales : en phase avec les tendances éthiques du secteur et des autorités réglementaires visant à réduire le recours aux essais sur les animaux.
- Réactivité standardisée et haute sensibilité (0,05 UE/mL). La commodité d’une lignée cellulaire prête à l’emploi réduit les tâches laborieuses en laboratoire et évite le recours à un laboratoire de culture cellulaire.
- Cellules qualifiées : outre le fait qu’elles soient citées dans la validation internationale de la méthode MAT, les cellules Mono-Mac-6 sont qualifiées pour l’expression de tous les récepteurs Toll-like (TLR) de surface, ce qui garantit la détection d’un large éventail de pyrogènes.
Témoins positifs pour les pyrogènes non endotoxiques
Chapitre 2.6.30 de la Pharmacopée européenne (Test d’activation des monocytes) : « Les essais préparatoires doivent inclure la validation du système d’essai à l’aide d’au moins deux ligands non endotoxiques pour les récepteurs Toll-like, par exemple des peptidoglycanes, des acides lipotéichoïques, des lipoprotéines bactériennes synthétiques, de la flagelline et un extrait brut de cellules bactériennes entières, dont au moins un doit être ajouté à la préparation soumise à l’examen. Le choix des pyrogènes non endotoxiques utilisés doit refléter le ou les contaminants les plus probables de la préparation soumise à l’examen.
Pour répondre à cette exigence, nous proposons une gamme élargie de témoins positifs :
- représentant plusieurs types de contaminants généralement présents dans les processus de production pharmaceutique (bactéries Gram-négatives et Gram-positives, virus et mycoplasmes).
- Ciblant plusieurs récepteurs Toll-like (TLR) monocytaires
Ligand | TLR cible | Type de contaminant concerné |
|---|---|---|
HKSA | TLR2 | Bactéries Gram-positives |
Flagelline | TLR5 | Bactéries Gram-positives et Gram-négatives |
PAM3CSK4 | TLR2/1 | Bactéries Gram-positives et Gram-négatives |
Resiquimod | TLR7/8 | Virus |
FSL1 | TLR2/6 | Mycoplasme |
Comparaison des tests de pyrogénicité sur lapin, LAL et MAT | ||||
|---|---|---|---|---|
| Lapin | LAL | MAT (système PyroMAT®) | ||
| Type de test | In vivo | Ex vivo | In vitro (lignée cellulaire monocytaire) | |
| Consommation par les animaux | ++ | + | - | |
| Détection de contaminants | Endotoxines, par exemple le LPS provenant de bactéries Gram-négatives | + | + | + |
| Gram-positives (LTA) | + | - | + | |
| Levures et moisissures | + | - | + | |
| Virus | +/- | - | + | |
| Application | Produits pharmaceutiques | + | + | + |
| Produits biologiques | + | +/- | + | |
| Thérapies cellulaires | - | +/- | + | |
Nous vous aiderons à passer des essais sur les animaux aux essais in vitro
Étude de faisabilité, mise au point de méthodes, validation et formation pour vous accompagner dans la mise en œuvre de vos essais de détection des pyrogènes : n’hésitez pas à contacter nos experts en la matière.
Ressources connexes
- Brochure : Système PyroMAT®
Utilisé pour détecter un large éventail de pyrogènes dans les produits parentéraux tels que les médicaments, les produits biopharmaceutiques ou les dispositifs médicaux, le MAT offre une alternative in vitro aux essais conventionnels sur les animaux, conformément aux directives réglementaires.
- Fiche technique : Témoins positifs pour les pyrogènes non endotoxiques
Respectez les exigences réglementaires relatives au test d'activation des monocytes (MAT) grâce à nos témoins pyrogènes sans endotoxines, conçus pour le système PyroMAT®.
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