Endonucléase
Les endonucléases sont des enzymes servant à réduire le niveau de contamination par les acides nucléiques lors les opérations de bioprocessing et dans les applications de recherche ; elles agissent en clivant l'ADN et l'ARN sous forme de fragments plus petits. Il existe un grand nombre de sources naturelles pour ces enzymes, mais ces formulations d'endonucléase peuvent poser un problème, car elles sont susceptibles de présenter une activité protéase et de contenir des contaminants viraux.
L'endonucléase Benzonase®, une nucléase génétiquement modifiée issue de Serratia marcescens, permet de s'affranchir du risque lié à l'utilisation d'endonucléases d'origine naturelle et est capable de dégrader toutes les formes d'ADN et d'ARN. Lorsqu'elle est utilisée dans des conditions réactionnelles appropriées, l'endonucléase Benzonase® dégrade toutes les formes d'ADN et d'ARN (simple brin, double brin, linéaire et circulaire) en oligonucléotides d'environ trois à cinq paires de bases de long. Elle présente un niveau d'activité spécifique exceptionnellement élevé sans aucune activité protéolytique détectable.
Avec certains modèles de fabrication, l'utilisation d'une concentration en sel supérieure aux niveaux physiologiques (200 mM de NaCl) peut être bénéfique. L'endonucléase tolérante au sel Benzonase® permet d'utiliser des concentrations en sel allant de 200 mM à 1 000 mM de NaCl pour l'étape intermédiaire de lyse et de digestion de l'ADN pendant la production de vecteurs de virus adéno-associés (AAV). Ce nouvel ajout à la gamme Benzonase® est compatible avec tous les détergents testés, y compris les détergents Deviron®, qui sont une alternative au Triton™ X-100.
Apprenez-en davantage sur les applications de l'endonucléase Benzonase® dans les domaines du bioprocessing et de la recherche.
Produits
Applications dans le domaine du bioprocessing
L'endonucléase Benzonase® est bien adaptée aux applications de bioprocessing exigeantes. Elle dégrade les acides nucléiques d'une taille bien inférieure à la longueur de fragment de 200 paires de bases requise par l'Organisation mondiale de la santé (OMS) et la US Food and Drug Administration (FDA), est libérée en conditions BPF IPE-PQG, et possède un DMF (Drug Master File) auprès de la FDA qui peut être cité lors du dépôt de dossiers réglementaires.
Elle est efficace sur un large éventail de conditions opératoires et d'applications, notamment :
- Purification de vaccins viraux et de vaccins à vecteur viral
- Purification de thérapies cellulaires et géniques
- Purification de virus oncolytiques
- Élimination de l'ADN et de l'ARN présents dans les protéines et autres produits biologiques
- Élimination de l'ADN des cellules hôtes
Trois versions de l'endonucléase IPEG PQG GMP Benzonase® sont disponibles pour répondre aux différents besoins de fabrication. Elles font toutes partie du programme Emprove® qui facilite la préparation des documents nécessaires au dépôt de dossiers réglementaires (Tableau 1).
Les endonucléases Benzonase® sont préparées dans le système d'expression E. coli W3110 et présentent un risque minimal de contamination virale.
- Endonucléase Benzonase® Emprove® Expert
- L'endonucléase Benzonase® Safety Plus Emprove® Expert est produite dans un milieu chimiquement défini, et chaque lot est testé pour vérifier l'absence d'éventuels virus et mycoplasmes indésirables.
- L'endonucléase tolérante au sel Benzonase® est également produite dans un milieu chimiquement défini et chaque lot est testé pour vérifier l'absence de mycoplasmes ; des tests à la demande pour détecter d'éventuels virus indésirables sont disponibles.
Êtes-vous intéressé(e) par un échantillon de Benzonase® ? Si oui, cliquez sur le bouton ci-dessous pour en savoir plus.
Applications dans le domaine de la recherche
L'endonucléase Benzonase® peut être utilisée dans diverses applications de recherche, notamment :
- Élimination de l'ADN des cellules hôtes présent dans les échantillons de microbiome
- Amélioration de l'identification des taxons microbiens dans les études sur le microbiome
- Prévention de l'agglutination dans les travaux de recherche sur les vaccins
- Réduction de la viscosité des lysats durant les procédures d'extraction de protéines recombinantes, améliorant ainsi le rendement de la protéine cible
Il existe diverses options d'endonucléase Benzonase® de grande pureté et hautement concentrées.
L'endonucléase Benzonase® est aussi disponible sous une forme contenant des réactifs d'extraction protéique pour faciliter encore davantage les procédures.
- Mélange maître BugBuster® : réactif d'extraction protéique BugBuster® avec endonucléase Benzonase® et solution rLysozyme
- Réactif d'extraction protéique BugBuster® HT : réactif d'extraction protéique BugBuster et endonucléase Benzonase®
- Kit CelLytic™ B Plus : lysozyme, endonucléase Benzonase®, et inhibiteurs de protéases
Informations techniques | ||||
|---|---|---|---|---|
| Caractéristiques / Application | Endonucléase Benzonase® Safety (degré de pureté II ≥ 90 %) Expert | Endonucléase Benzonase® Emprove® Expert | Endonucléase Benzonase® Plus Emprove® | Endonucléase tolérante au sel Benzonase® Emprove® Expert |
| Origine | Serratia marcescens, production : E. coli souche K12 W3110 ; 30 kDa ; PI 6,85 ; homologie de séquence/données | Plateforme d'ingénierie des protéines brevetée | ||
| Pureté | ≥ 90 % | ≥ 99 % | ≥ 99 % | 99 % |
| Fabrication BPF conforme aux directives Q7 de l'ICH* | Non | Oui | Oui | Oui |
| FDA Bulk Biological Master File (US-BBMF) et Emprove® | Non | Oui | Oui | Dossiers Emprove® Expert disponibles, Drug Master File (FDA) disponible jusqu'en 2024. |
| Sans composé d'origine animale (NAO), produit recombinant issu de E. coli dans un milieu de production chimiquement défini | Non | Non | Oui | Oui |
| Expédition avec bandelettes thermosensibles | Non | Non | Oui | Oui |
| Échantillons de pré-expédition pour conditionnement de grande taille | Non | Non | Oui (avec taille d'unité 5 M) | Oui (avec taille d'unité 5 M) |
| Test in vitro de libération des lots pour vérifier l'absence d'éventuels virus indésirables (3 lignées cellulaires) et test de recherche de mycoplasmes | Non | Non | Oui | Disponible en option personnalisée* |
| Analyses microbiennes - endotoxines (dosage au lysat d'amébocytes de limule - LAL) | Non spécifié < 10 UFC/100 000 U | < 0,25 UE/1000 U < 10 UFC/100 000 U | < 0,25 UE/1000 U < 10 UFC/100 000 U | < 0,25 UE/1000 U < 10 UFC/100 000 U |
| Client cible | Recherche | Vaccins viraux | Thérapies géniques et cellulaires | Développeurs de procédés pharmaceutiques et fabricants, chercheurs universitaires/gouvernementaux/hospitaliers, chercheurs en pharmaceutique/biotechnologie |
| Disponibilité des produits à long terme | Tous les produits Benzonase® continueront à faire partie de notre gamme | |||
| * Déclaration du fabricant | ||||
Documentation produit apparentée
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Detergent, EMPROVE® EXPERT
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Optimization of Benzonase® endonuclease use in virus purification.
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