Réactifs et substrats d'immunodétection
In Western blotting, the most important factor in determining the success of experiments is the quality of reagents used. We offer an array of Western blotting reagents that are pre-optimized to work synergistically, providing strong specific signals and low background to help you quickly produce publication-quality results.
Produits
Réactifs de blocage
Le blocage des sites membranaires non liés empêche la liaison non spécifique des anticorps qui peut entraîner un bruit de fond élevé. Les bloqueurs traditionnels à base de lait, de gélatine et d'autres protéines sont efficaces pour de nombreuses applications de blotting, mais peuvent réduire la sensibilité ou la détection en masquant le signal ou en interférant avec la détection de cibles protéiques spécifiques.Les Immobilon® réactifs de suppression du bruit de fond comprennent des tampons sans protéines, prêts à l'emploi, optimisés pour réduire les niveaux de bruit de fond lors de l'utilisation de la chimiluminescence, de la fluorescence ou de la détection des phosphoprotéines.
Guide de sélection des réactifs de blocage pour Western Blot | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Utiliser... | Pour la chimiothérapie.p>Pour les Blots chimiluminescents | Pour les Blots colorimétriques Les Blots chimiluminescents peuvent être utilisés dans les conditions suivantesPour les Blots colorimétriques | Pour les Blots fluorescents | Pour les Blots fluorescents | Pour les Blots fluorescentsFourni en tant que | |||
Pour amplifier le signal de votre anticorps avec des protéines d'origine végétale | Immobilon Signal Enhancer (WBSH0500) | Oui | Oui Oui Oui Oui Oui Oui Oui.p>Oui | Oui | Oui | Prêt à l'emploi | ||
Un bloqueur sans protéine optimisé pour la détection par chimiluminescence | Immobilon Block-CH (WBAVDCH01< /a>) L'utilisation de ce bloqueur est très répandue dans les pays en voie de développement./a>) | Meilleur Meilleur | Immobilon Block-CH | Oui | Non | NonNon | Prêt à l'emploi | |
Un bloqueur sans protéine optimisé pour la détection de fluorescence | Immobilon Block-FL (WBAVDFL01) | Immobilon Block-FL (WBAVDFL01) | NonNon | Non | Meilleur | Prêts à l'emploi Les meilleurs sont les meilleurs.Prêt à l'emploi | ||
Un bloqueur sans protéine optimisé pour la détection des phosphoprotéines | Immobilon Block-PO (WBAVDP001) | Yes | Yes< | Oui | Prêt à l'emploi | |||
Un réactif de blocage avec des protéines non mammaliennes | Réactif de blocage aquatique, plasma de saumon (558300) Dans le cadre de l'utilisation du réactif de blocage aquatique, le réactif de blocage aquatique peut être utilisé pour bloquer les protéines non mammaliennes./td> | Oui | Oui | Oui | Oui.Oui | Non | Prêt à l'emploi | |
Un réactif de blocage optimisé pour les conjugués HRP | Solution de blocage Western (W0138) | Oui | Oui | Non | Prêt à l'emploi | |||
Lait sec non gras en vrac | Réactif de blocage de l'immunoblot (20-200) Immunoblot Blocking Reagent (20-200)/td> | Oui | Oui | Non | Poudre en vrac | |||
Lait sec non gras pré-tamponné | Lait sec non gras pré-tamponné | Saline phosphatée tamponnéeSolution saline tamponnée au phosphate avec 5% de lait sec non gras (P4739) | Oui | Oui | Non | Poudre préportionnée | ||
5% de caséine soluble dans l'alcali (70955) | Oui | Oui | p>Oui84"> Oui | Solution concentrée | ||||
La solution concentrée est optimisée pour le blocage sans protéine.Blocage sans protéine optimisé pour les systèmes de détection avidine-biotine | ChemiBLOCKER (2170) | Oui | Oui | Non | Solution concentrée | Solution concentréeSolution concentrée | ||
Bloquer les échantillons de protéines et d'acides nucléiques sur des membranes de nitrocellulose ou de nylon | Gélifier les échantillons de protéines et d'acides nucléiques sur des membranes en nitrocellulose ou en nylon.144"> Tampon de blocage à la gélatine (G7663)
| Oui | Oui | Oui | Poudre en vrac | |||
Streptavidine et conjugués-d'anticorps-secondaires
Les méthodes modernes d'immunodétection sont basées sur la détection par liaison enzymatique à l'aide de streptavidine ou d'anticorps secondaires liés de manière covalente à des enzymes telles que la peroxydase de raifort (HRP) ou la phosphatase alcaline (AP). L'enzyme conjuguée catalyse la dégradation de substrats spécifiques, ce qui génère un signal. Une variété de streptavidine, de protéine A, de protéine G et de conjugués d'anticorps secondaires sont disponibles pour le Western blotting. Nous offrons également une large sélection de substrats HRP et AP pour la détection chimiluminescente, chromogénique et chimifluorescente dans le Western blotting.
CHEMILUMINESCENT SUBSTRATES FOR WESTERN BLOTTING
Immobilon® Les substrats HRP pour la détection chimiluminescente offrent une sensibilité accrue pour des blots plus quantitatifs, réduisant les coûts en vous permettant de diminuer la concentration d'anticorps utilisée pour la détection.Choisissez parmi une gamme de substrats Immobilon® de différentes sensibilités dans des formats pratiques prêts à l'emploi ou à deux composants afin d'optimiser la détection pour votre application de Western blotting.
- Immobilon® Classico, Crescendo et Forte Chemiluminescent substratescomprennent une famille de réactifs prémélangés, prêts à l'emploi, pour la détection à base de peroxydase, proposés dans une gamme de sensibilités permettant d'obtenir des rapports signal/arrière-plan optimaux pour toute une série de concentrations de protéines cibles.Limites de détection:
- Immobilon® Classico: ~ 6 pg de la protéine cible
- Immobilon® Crescendo : ~ 1-3 pg de la protéine cible
- Immobilon® Forte :~ 400 fg protéine cible
- Immobilon® Western HRP, Immobilon® ECL Ultra, et Immobilon® UltraPlus Western offrent une sensibilité exceptionnelle et une longue durée de vie du signal dans des formats standard à 2 composants. Ces formulations permettent d'utiliser des solutions d'anticorps primaires plus diluées pour la détection en immunoblot. Limites de détection:
- Immobilon® Western HRP substrate : ~ 400 fg de protéine cible
- Immobilon® substrat ECL Ultra : faible gamme de femtogrammes
- Immobilon® ECL UltraPlus Western Blot HRP Substrate : faible gamme de femtogrammes
Sensibilité relative des substrats HRP chimiluminescents Immobilon®
Figure 1.Des séries de dilutions deux fois plus importantes du lysat de cellules A431 [12-110] à partir de 4 μg de protéines ont été effectuées sur des gels mPAGE® à 10 % [MP10W15] dans un tampon MOPS [MPM0PS] à 200V pendant 25 minutes. Les protéines ont été transférées sur une membrane Immobilon®-P [IPVH00010] pendant 1 heure dans un tampon de transfert mPAGE® [MPTRB] avec 10 % d'éthanol. L'immunodétection de la protéine HH3 (15 kDa) a été réalisée avec des anticorps de lapin anti-HH3 [H0164] et de chèvre anti-lapin [AP132P] aux dilutions indiquées. Les blots ont été incubés avec les réactifs ECL indiqués pendant 5 minutes et les images ont été prises avec une exposition de 30 secondes sur le système ChemiDoc de Bio-Rad®.
Cytiva™ Amersham™ Les réactifs de détection ECL utilisent une détection améliorée à base de luminol HRP avec différentes formulations disponibles pour couvrir différents besoins d'applications de Western blotting.
- Cytiva Amersham™ ECL Western blotting detection reagents are recommended for confirmatory Western blotting applications.
- Cytiva Amersham™ ECL Prime, réactif de détection par Western blotting, permet de détecter les protéines très abondantes et peu abondantes sur le même blot.
- Cytiva Amersham™ ECL Select, réactif de détection par Western blotting, offre une sensibilité élevée, même en cas d'utilisation d'anticorps primaires et secondaires dilués.
- Cytiva Amersham™ ECL Start Western Blotting réactif de détection a été développé pour la détection par chimiluminescence des protéines de moyenne et haute expression.
CHROMOGENIC SUBSTRATES FOR WESTERN BLOTTING
La détection chromogénique utilise une enzyme conjuguée à la peroxydase (par exemple HRP) ou à la phosphatase alcaline (AP) pour catalyser la réaction qui aboutit au dépôt d'un précipité coloré insoluble à des fins de détection, Nos substrats chromogènes pour le Western blotting sont disponibles sous forme de solution, de poudre et de comprimés afin d'offrir des options flexibles en matière de stockage et d'utilisation.
- SIGMAFAST™ DAB Tablets (substrat chromogène HRP)sont composées d'un substrat précipitant colorimétrique qui produit une couleur brune lors de la réaction avec la peroxydase de raifort et peuvent être dissoutes dans l'eau pour préparer une solution tamponnée prête à l'emploi pour la détection sur buvard.
- BCIP/NBT (bleu/violet) et BCIP/TNBT (bleu/brun) Single Reagent (substrats AP chromogènes) sont des substrats colorimétriques très sensibles pour la phosphatase alcaline.
- TMB Enhanced One Component HRP Membrane Substrate (substrat HRP chromogène) est un substrat colorimétrique à un seul composant qui produit un produit bleu foncé.
Substrat | Couleur | Enzyme | Sensibilité | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
BCIP/NBT | bleu/violet | AP | Haut | |||
Rouge rapide TR (4-Chloro-2-méthylbenzenediazonium)
| Transfert d'énergie./p> | Rouge/orange | AP | Haut | ||
Rouge/orange | ||||||
DAB (3,3'-Diaminobenzidine) | Brun | HRP | Moyenne | Moyenne | <.p>Moyen | |
TMB (3,3′,5,5'-tétraméthylbenzidine) | Bleu foncé <./td> | HRP | Haut | |||
CN (4-chloro-1-naphtol) | Bleu/pourpre | HRP |
Signal Enhancers
- Immobilon® Signal Enhancer est conçu pour être utilisé dans les applications de Western blotting lorsqu'une faible intensité de signal est observée. L'amélioration de la réaction anticorps-antigène peut produire une augmentation de 2 à 10 fois de l'intensité du signal. Immobilon® Signal Enhancer est compatible avec les membranes PVDF et nitrocellulose et peut être utilisé avec des méthodes de détection chromogènes, chimiluminescentes et fluorescentes.
- SignalBoost™ Immunoreaction Enhancer Kit est conçu pour renforcer le signal chimiluminescent ou colorimétrique de la cible sur les membranes de nitrocellulose ou de PVDF
Réactifs et kits pour le stripping et le re-probing
Les réactifs de stripping et de re-probing sont spécialement formulés pour éliminer rapidement et efficacement les anticorps des Western blots sans affecter de manière significative les protéines immobilisées.
- Les réactifs ReBlot™ Plus décapent efficacement les blots sondés des anticorps liés. Les réactifs ReBlot™ Plus sont disponibles dans des formulations douces et fortes.
Ressources connexes
- Handbook: Protein Blotting Tips and Tricks
This handbook represents the collective experience of our application scientists, who are actively engaged in advancing the science of protein blotting and detection.
- Brochure: Rethink Western Blotting
Explore our products designed to improve each step of the Western blotting workflow.
- Article: Western Blotting Protocol (Immunoblotting Protocol)
Western blot protocol with workflow steps for different blot procedures, describing the electrophoretic transfer of proteins from SDS polyacrylamide gels to sheets of nitrocellulose.
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