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Substrats et réactifs d'immunodétection

Substrats chimioluminescents Immobilon® Forte, Crescendo et Classico pour western blots

En western blot, la qualité des réactifs est le facteur qui conditionne le plus la réussite des expériences. Nous proposons une gamme de réactifs pour western blots qui sont préoptimisés pour fonctionner en synergie, produisant de puissants signaux spécifiques et un faible bruit de fond pour vous aider à obtenir rapidement des résultats prêts à être publiés.



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Réactifs de blocage

Le blocage des sites membranaires non liés empêche la liaison non spécifique des anticorps, ce qui peut donner lieu à un bruit de fond important. Les agents de blocage classiques (à base de lait, de gélatine et d'autres protéines) sont efficaces pour de nombreuses applications de blotting, mais ils peuvent réduire la sensibilité ou la détection en masquant le signal ou en perturbant la détection des cibles protéiques spécifiques. Les réactifs de suppression de bruit de fond Immobilon® Block comprennent des tampons sans protéines prêts à l'emploi, optimisés pour réduire le niveau de bruit de fond lors de l'utilisation de la chimioluminescence, de la fluorescence ou de la détection de phosphoprotéines.

Conjugués anticorps secondaire/streptavidine

Les méthodes d'immunodétection modernes s'appuient sur la détection par liaison enzymatique à l'aide de streptavidine ou d'anticorps secondaires liés de manière covalente à des enzymes telles que la peroxydase de raifort (HRP pour "Horseradish Peroxidase") ou la phosphatase alcaline (AP pour "Alkaline Phosphatase"). L'enzyme conjuguée catalyse la dégradation de certains substrats, entraînant la production d'un signal. Il existe une diversité de conjugués de streptavidine, de protéine A, de protéine G et d'anticorps secondaires pour les analyses par western blot. Nous proposons également un large choix de substrats de la peroxydase de raifort et de la phosphatase alcaline pour la détection par chimioluminescence, la détection chromogène et la détection par chimiofluorescence en western blot.

SUBSTRATS CHIMIOLUMINESCENTS POUR WESTERN BLOTS

Les substrats de la peroxydase de raifort Immobilon® pour la détection par chimioluminescence sont plus sensibles, permettant des analyses plus quantitatives et réduisant les coûts grâce à la diminution de la concentration d'anticorps utilisée pour la détection. Faites votre choix parmi une gamme de substrats Immobilon® de différentes sensibilités, disponibles dans des formats tout-en-un ou bicomposants, et optimisez la détection pour votre application de western blot.

  • Les substrats chimioluminescents Immobilon® Classico, Crescendo et Forte sont une famille de réactifs prémélangés prêts à l'emploi pour la détection par peroxydase. Déclinés en différentes sensibilités, ils permettent d'obtenir un rapport signal/bruit optimal sur une plage de concentrations en protéine cible. Limites de détection :
    • Immobilon® Classico : ~6 pg de protéine cible
    • Immobilon® Crescendo : ~1 à 3 pg de protéine cible
    • Immobilon® Forte : ~400 fg de protéine cible
  • Les substrats chimioluminescents de la peroxydase de raifort Immobilon® ECL Ultra et Western se caractérisent par une sensibilité exceptionnelle et une longue durée de signal, dans des formats bicomposants standards. Ces formulations permettent l'utilisation de solutions d'anticorps primaires plus diluées pour la détection par immunoblot. Limites de détection :
    • Substrat de la peroxydase de raifort Immobilon® Western : ~400& de protéine cible
    • Substrat Immobilon® ECL Ultra : quelques femtogrammes (plage basse)
Sensibilité des substrats chimioluminescents Immobilon® pour western blots

Figure 1.Sensibilité relative des substrats chimioluminescents Immobilon® pour western blots

Les réactifs de détection Amersham™ ECL de Cytiva™ utilisent une détection avancée par peroxydase de raifort et luminol, différentes formulations étant disponibles pour répondre aux différents besoins des applications de western blot.

  • Les réactifs de détection pour western blot Amersham™ ECL de Cytiva sont recommandés pour les western blots de confirmation.
  • Le réactif de détection pour western blot Amersham™ ECL Prime de Cytiva permet de détecter les protéines hautement et faiblement abondantes sur une même membrane.
  • Les réactifs de détection pour western blot Amersham™ ECL Select de Cytiva offrent une haute sensibilité, même avec des anticorps primaires et secondaires dilués.
  • Le réactif de détection pour western blot Amersham™ ECL Start de Cytiva a été mis au point pour la détection par chimioluminescence des protéines moyennement et fortement exprimées.

SUBSTRATS CHROMOGÈNES POUR WESTERN BLOTS

La détection chromogène utilise une enzyme conjuguée à une peroxydase (p. ex. peroxydase de raifort) ou à une phosphatase alcaline pour catalyser une réaction qui entraîne le dépôt d'un précipité coloré insoluble pour la détection. Nos substrats chromogènes pour western blots sont disponibles sous forme de solutions, de poudres et de comprimés pour vous offrir une certaine souplesse en matière de stockage et d'utilisation.

  • Les comprimés SIGMAFAST™ DAB (substrat chromogène de la peroxydase de raifort) sont composés d'un substrat colorimétrique précipitant qui produit une couleur marron lorsqu'il réagit avec la peroxydase de raifort. Ils peuvent être dissous dans l'eau pour préparer une solution tamponnée prête à l'emploi pour la détection.
  • Les réactifs tout-en-un BCIP/NBT (bleu/violet) et BCIP/TNBT (bleu/marron) sont des substrats chromogènes de la phosphatase alcaline qui sont très sensibles.
  • Le substrat TMB tout-en-un avancé (substrat chromogène de la peroxydase de raifort) est un substrat colorimétrique à un seul composant qui donne un produit bleu foncé.

Amplificateurs de signaux

  • L'amplificateur de signal Immobilon® est conçu pour être utilisé dans les applications de western blot lorsque l'intensité du signal est très faible. L'amplification de la réaction anticorps/antigène peut multiplier l'intensité du signal par 2 à 10. L'amplificateur de signal Immobilon® est compatible avec les membranes en poly(fluorure de vinylidène) (PVDF) et en nitrocellulose et il peut être utilisé avec une détection chromogène, une détection par chimioluminescence ou une détection par fluorescence.
  • Le kit d'amplification d'immunoréaction SignalBoost™ est conçu pour amplifier le signal chimioluminescent ou colorimétrique de la cible sur des membranes en nitrocellulose ou en PVDF.

Réactifs et kits de déshybridation et de réhybridation

Nos réactifs de déshybridation et de réhybridation sont spécialement formulés pour éliminer rapidement et efficacement les anticorps des membranes de western blot sans affecter de manière significative les protéines immobilisées.