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Colorants pour gels d'électrophorèse de protéines

Après séparation par électrophorèse, les bandes de protéines sont généralement visualisées à l'aide de colorants pour gels. Utilisant une réaction chimique de fixation du colorant ou de production de couleur, les colorants pour gels de séparation de protéines réagissent sélectivement avec les protéines pour colorer le gel. Les colorants pour gels de séparation de protéines sont généralement choisis en fonction de la taille initiale de l'échantillon, de la méthode de détection souhaitée et des besoins de compatibilité avec les analyses ultérieures.




Solutions de fixation

Après l'électrophorèse sur gel, les protéines sont généralement "fixées" dans le gel pour éviter qu'elles se dispersent avant la coloration. Certains colorants pour gels contiennent des produits chimiques qui évitent d'avoir à fixer les gels avant la coloration.

Colorants pour gels de séparation de protéines pour détection colorimétrique

  • Le bleu de Coomassie (ou bleu brillant G) permet de colorer les protéines sur les gels de polyacrylamide grâce à des interactions électrostatiques avec les groupements amino et carboxyle des protéines.
  • Le colorant pour gel de séparation de protéines ReadyBlue™ est un bleu de Coomassie colloïdal, rapide et sensible conçu pour les gels de polyacrylamide qui se présente sous la forme d'une solution prête à l'emploi, permettant un protocole plus simple et plus rapide. Les images des protéines colorées au ReadyBlue™ peuvent être obtenues en colorimétrie ou en fluorescence infrarouge. Cette formulation sûre ne contient ni solvants organiques ni acide phosphorique et peut être réutilisée jusqu'à 3 fois. Il a été démontré que le colorant ReadyBlue™ permet d'obtenir une sensibilité de 2 ng par bande.
  • Le colorant InstantBlue™ est un colorant en solution prêt à l'emploi, spécialement formulé pour une détection rapide, sensible et sans danger de vos protéines. Les gels de séparation de protéines peuvent être colorés à l'InstantBlue™ en quelques minutes sans qu'il soit nécessaire de les laver, de les fixer ou de les décolorer. Non toxique, la formulation InstantBlue™ ne contient pas de méthanol.
  • Le réactif de coloration de gel EZBlue™ est un bleu de Coomassie G-250 colloïdal sensible, pratique et sans danger qui améliore les résultats de l'électrophorèse de protéines tout en réduisant considérablement le temps de coloration. Sa nature colloïdale lui permet de réagir uniquement avec les protéines, et non avec le gel lui-même. La coloration de fond étant limitée, les bandes de protéines peuvent être visualisées de manière quasi immédiate sur les gels de polyacrylamide et les membranes en poly(fluorure de vinylidène) (PVDF). Si aucune étape de décoloration n'est nécessaire, un lavage à l'eau peut malgré tout intensifier les bandes et éclaircir le fond. Le réactif EZBlue™ est extrêmement sensible, détectant de très faibles quantités de protéines (dès 5 ng).
  • Notre kit de détection de protéines réversible est un système de détection unique qui est conçu pour colorer les protéines présentes sur les membranes en nylon, en nitrocellulose et en PVDF ou sur les gels PAGE, avec une sensibilité de détection proche de celle des bleus de Coomassie. La plupart des autres colorants produisent un bruit de fond important sur les membranes en nylon en raison de fortes interactions entre les charges et la membrane. La coloration est facilement réversible par l'ajout d'une solution d'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA). La membrane peut ainsi être réutilisée pour un western blot ou une analyse de la séquence d'acides aminés.
  • Le bleu noir naphtol (ou noir amide 10B) peut servir à colorer les protéines présentes sur les gels de polyacrylamide, les gels d'agarose et les membranes en nitrocellulose. Après l'électrophorèse, il est recommandé de fixer les protéines dans le gel. Le gel est ensuite coloré avec du bleu noir naphtol à 0,1 % dans de l'acide acétique à 7 % (v/v) pendant au moins 2 heures, avant d'être décoloré avec une solution d'acide acétique à 7 % (v/v). La sensibilité de détection s'élève à environ 20 % de celle du bleu de Coomassie.
  • Offrant la plus haute sensibilité, le kit de coloration argentique ProteoSilver™ présente une sensibilité de ≥ 0,1 ng de protéines par bande, avec un temps d'incubation de 3 à 12 minutes. Recommandée pour les protéines très peu abondantes, cette coloration est compatible avec les applications MALDI-TOF.

Colorants pour gels de séparation de protéines pour détection en fluorescence

  • Le colorant pour gel de séparation de protéines pour détection en fluorescence EZFluor™ 1-Step est un colorant fluorescent prêt à l'emploi qui permet de colorer les gels de séparation de protéines en une seule étape de 5 à 30 minutes (sans fixation) et qui est capable de détecter de très faibles quantités de protéines (environ 1 à 10 ng de protéines par bande). La coloration est entièrement compatible avec la spectrométrie de masse et le séquençage d'Edman.
  • Le colorant pour gel de séparation de protéines pour détection en fluorescence EZFluor™ UV 1-Step est un colorant prêt à l'emploi qui permet d'obtenir des images des protéines colorées à l'aide d'un transilluminateur à ultraviolets (UV) et d'un filtre pour bromure d'éthidium compatible avec la spectrométrie de masse.
  • Le colorant pour gel de séparation de protéines SYPRO® Ruby est un colorant fluorescent rubis ultrasensible et prêt à l'emploi qui permet de détecter les protéines séparées par électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE). Spécialement conçu pour l'électrophorèse PAGE bidimensionnelle, ce colorant s'avère également un excellent choix pour les gels PAGE unidimensionnels et les gels d'électrofocalisation (IEF pour "Isoelectric Focusing"). Le colorant pour gel de séparation de protéines SYPRO® Ruby permet d'obtenir une sensibilité comparable à celle de nombreuses techniques de coloration argentique.
  • Le colorant SYPRO® Orange ressemble au SYPRO® Red, bien qu'il soit légèrement plus brillant et qu'il donne une fluorescence de fond légèrement plus intense. Ce colorant est efficacement excité par une illumination UV ou large bande. Il ne convient pas à la coloration de protéines sur des membranes ou des gels IEF et sa sensibilité est réduite sur les gels bidimensionnels.

Réactifs de décoloration

  • Le tampon CoZap est utilisé pour éliminer rapidement le bleu de Coomassie. Unique en son genre, il se place directement dans le bac de décoloration où il absorbe tout le colorant libre en solution, ce qui évite d'avoir à changer la solution décolorante.