Purification de protéines recombinantes/à marqueur de fusion

Colonnes et supports de chromatographie Amersham™ de Cytiva

Il existe un large choix de supports de chromatographie Amersham™ de Cytiva pour la purification des protéines par des méthodes manuelles ou automatisées. Les formats préremplis comprennent des colonnes gravitaires, des colonnes de centrifugation, des plaques à 96 puits et des colonnes préremplies pour systèmes de chromatographie automatisés.

Protéines à étiquette His : Purification rapide et pratique de protéines recombinantes à étiquette histidine (His) par chromatographie d'affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC). Les milieux Ni-Sepharose™ sont préchargés d'ions nickel (Ni2+) ; le milieu TALON^® Superflow™ est préchargé d'ions cobalt (Co2+).
Protéines à étiquette GST : Les supports de chromatographie glutathion-Sepharose™ sont disponibles sous forme de packs de laboratoire, de colonnes GSTrap et GSPrep préremplies, et de plaques à 96 puits. Les modules de purification GST sont proposés pour la purification des lysats bactériens. Les modules GST SpinTrap comprennent des colonnes de glutathion-Sepharose™ 4B SpinTrap préremplies ainsi que les tampons nécessaires à la purification. Les modules de purification GST RediPack comprennent des colonnes gravitaires et un tampon.
Protéines à étiquette Strep-tag™ II : L'étiquette Strep-tag II se lie spécifiquement à la résine Sepharose™ haute performance StrepTactin™, dans laquelle un ligand StrepTactin est immobilisé sur une matrice de Sepharose™ de base pour donner une protéine cible pure.
Protéines à étiquette MBP : Le support de chromatographie haute performance dextrine-Sepharose™ purifie les protéines recombinantes marquées avec la protéine de liaison au maltose (MBP pour "Maltose Binding Protein").

Billes d'agarose et gels d'affinité

Les billes d'agarose et les gels d'affinité permettent de purifier les protéines à marqueur de fusion grâce à des ligands greffés sur de l'agarose en billes. Adaptées à la purification à petite ou grande échelle en conditions natives, dénaturantes ou légèrement réductrices, ces résines conviennent à la purification sur colonne gravitaire, à la centrifugation à faible vitesse en traitement discontinu ("batch processing") et à la chromatographie basse pression, car les billes et les gels sont conçus pour des pressions plus faibles. Les gels d'affinité EZview™ intègrent un colorant rouge qui permet à l'utilisateur de différencier facilement le culot du surnageant, minimisant ainsi la perte de protéines lors d'une purification en mode "batch". Les kits d'immunoprécipitation comprennent des gels d'affinité, des mini-colonnes de centrifugation et un réactif de lyse. Ils sont spécialement conçus pour une récupération maximale des protéines contenues dans les immunoprécipités.

Gels d'agarose pour affinité Superflow et High-Flow

Les gels d'agarose pour affinité Superflow et High-Flow utilisent des billes d'agarose hautement greffées capables de supporter des pressions plus élevées que les billes d'agarose classiques. Ces résines sont donc adaptées aux méthodes de purification par chromatographie liquide rapide des protéines (FPLC pour "Fast Protein Liquid Chromatography"). Les gels d'agarose pour affinité Superflow et High-Flow sont recommandés pour la purification à moyenne et grande échelles.

Billes magnétiques

Les billes magnétiques sont utilisées pour purifier les protéines recombinantes contenant un marqueur de fusion à l'aide d'une plateforme ou d'un rack magnétique afin de séparer les billes des fractions de lavage et d'élution. Cette technique permet un traitement rapide (en quelques secondes) en conditions natives ou dénaturantes. Elle est adaptée aux techniques à bas débit utilisant des microtubes à centrifuger individuels ou aux techniques à plus haut débit utilisant des plaques à 96 puits et l'automatisation.

Kits de purification BugBuster^®

Les kits de purification BugBuster^® combinent une résine d'affinité, des tampons de lavage, des tampons d'élution et un réactif d'extraction pour faciliter la préparation d'extraits cellulaires solubles et la purification par affinité de protéines de fusion marquées issues d'E. coli.

Ressources produits apparentées

Brochure : Refine Protein Preparation – Tools for Better Protein Analysis
Catalogue : Recombinant Proteins – Purification and Detection Products
Manuel : Tagged Proteins – Affinity Chromatography

Catégories de produits apparentées

Purification d'anticorps à l'aide de protéines

Colonnes préremplies et résines de purification d'anticorps pour l'échelle de laboratoire, l'échelle de production et l'échelle industrielle

Purification de protéines biotinylées

Résines streptavidine et avidine et colonnes préremplies pour la purification à petite ou grande échelle des anticorps et protéines biotinylés.

Purification FLAG

Vecteurs d'expression, résines d'affinité et anticorps pour l'expression, la purification et la détection des protéines de fusion à étiquette FLAG®.

Dispositifs de centrifugation Amicon^®

Dispositifs d'ultrafiltration par centrifugation et sous pression pour la concentration des protéines, le dessalage, l'échange de tampon, la séparation et la diafiltration d'échantillons biologiques et environnementaux en vue d'applications en aval.

Cocktails d'inhibiteurs de protéases et de phosphatases

Cocktails et inhibiteurs de protéases et de phosphatases pour empêcher la protéolyse et la déphosphorylation des protéines, et préserver l'état actif des protéines pendant la lyse cellulaire, l'extraction des protéines et la préparation des échantillons.

Gels et tampons pour l'électrophorèse des protéines

Gels de polyacrylamide précoulés, tampons de migration et réactifs pour gels de polyacrylamide coulés à la main pour l'électrophorèse PAGE et SDS-PAGE des protéines.

Colorants pour gels d'électrophorèse de protéines

Colorants pour gels de séparation de protéines pour détection colorimétrique et détection en fluorescence ultrasensibles, solutions de fixation et réactifs de décoloration pour gels de polyacrylamide, gels d'agarose et membranes en PVDF et nitrocellulose.

Réactifs et activateurs de lyse cellulaire complète

Kits d'extraction de protéines, tampons de lyse cellulaire et réactifs permettant de solubiliser les protéines à partir de cultures de cellules de bactéries, de levures et d'insectes ainsi que de plantes et de mammifères et d'échantillons de tissus.

Applications apparentées

Purification des protéines

Techniques, réactifs et protocoles permettant de purifier les protéines recombinantes par différentes méthodes telles que la chromatographie d'échange d'ions, la chromatographie d'exclusion stérique ou la chromatographie d'affinité.

Expression des protéines

Technologies d'expression protéique permettant d'exprimer des protéines recombinantes dans des systèmes d'expression de type E. coli, cellules d'insectes, levures et cellules de mammifères pour la recherche fondamentale et pour faciliter la production de médicaments et de vaccins.

Lyse et extraction des protéines

Panorama des méthodes de lyse cellulaire et d'extraction protéique, comme la solubilisation par détergents, la lyse par congélation/décongélation, le choc osmotique, la sonication, la lyse cellulaire enzymatique et les techniques de fragmentation mécanique comme l'homogénéisation au Dounce, au Polytron ou au mortier et au pilon.

Technique de pull-down (interactions protéines/protéines)

Tests, réactifs et protocoles permettant d'étudier les interactions protéines/protéines in vitro par différentes méthodes : pull-down ou GST pull-down, purification par affinité en tandem (TAP pour "Tandem Affinity Purification") et co-immunoprécipitation.

Concentration des protéines et échange de tampon

Panorama des techniques utilisées pour concentrer et clarifier les échantillons de protéines pour les procédures de purification, de bioproduction et d'analyse. Inclut des protocoles et des vidéos sur les techniques de filtration et d'ultrafiltration, l'enrichissement en protéines ainsi que le dessalage et l'échange de tampon par dialyse, diafiltration et chromatographie.

Électrophorèse sur gel

L'électrophorèse sur gel permet de séparer les protéines en vue de leur purification, de leur caractérisation et de leur détection. Des méthodes comme l'électrophorèse PAGE en conditions natives, l'électrophorèse SDS-PAGE, l'électrophorèse 2D-PAGE et l'électrofocalisation permettent de préparer des applications en aval comme l'analyse par western blot, la spectrométrie de masse et l'analyse protéomique.

Analyses par western blot

Panorama des principes et applications de l'analyse par western blotting pour la détection des protéines. Inclut des liens vers les protocoles détaillés, des vidéos et d'autres ressources sur l'extraction des protéines, l'électrophorèse sur gel, le transfert sur membranes en PVDF ou nitrocellulose, et les méthodes de détection par chimiluminescence, colorimétrie ou fluorescence.

Analyse des protéines par spectrométrie de masse

Panorama des techniques de spectrométrie de masse des protéines utilisées pour l'identification et la quantification des protéines, des modifications post-traductionnelles, du profilage des glycanes et des interactions entre protéines en recherche pharmaceutique et protéomique.