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Purification de protéines recombinantes/avec étiquette de fusion

La purification des protéines recombinantes par chromatographie d'affinité spécifique d'une étiquette est une technologie éprouvée qui permet une reconnaissance et une purification hautement spécifiques des protéines recombinantes. L'expression, la purification et la détection des protéines recombinantes peuvent être une entreprise longue et fastidieuse. En fonction de la protéine d'intérêt et du système d'expression, des étiquettes protéiques peuvent être ajoutées pour améliorer le résultat des étapes courantes, notamment la solubilité des protéines pendant l'expression, la purification par chromatographie d'affinité ou l'immunodétection après isolement et purification. Nous proposons des colonnes et des résines d'affinité pour de multiples étiquettes de fusion dans de nombreux formats, notamment des billes magnétiques, des colonnes remplies et des résines d'agarose en suspension épaisse, ce qui nous permet de disposer de produits pour toutes les échelles et applications.  


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Colonnes et supports de chromatographie Amersham™ de Cytiva

Il existe un large choix de supports de chromatographie Amersham™ de Cytiva pour la purification des protéines par des méthodes manuelles ou automatisées. Les formats préremplis comprennent des colonnes gravitaires, des colonnes de centrifugation, des plaques à 96 puits et des colonnes préremplies pour systèmes de chromatographie automatisés.

  • Protéines à étiquette His : Purification rapide et pratique de protéines recombinantes à étiquette histidine (His) par chromatographie d'affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC). Les milieux Ni-Sepharose™ sont préchargés d'ions nickel (Ni2+) ; le milieu TALON® Superflow™ est préchargé d'ions cobalt (Co2+).
  • Protéines à étiquette GST : Les supports de chromatographie glutathion-Sepharose™ sont disponibles sous forme de packs de laboratoire, de colonnes GSTrap et GSPrep préremplies, et de plaques à 96 puits. Les modules de purification GST sont proposés pour la purification des lysats bactériens. Les modules GST SpinTrap comprennent des colonnes de glutathion-Sepharose™ 4B SpinTrap préremplies ainsi que les tampons nécessaires à la purification. Les modules de purification GST RediPack comprennent des colonnes gravitaires et un tampon.
  • Protéines à étiquette Strep-tag™ II : L'étiquette Strep-tag II se lie spécifiquement à la résine Sepharose™ haute performance StrepTactin™, dans laquelle un ligand StrepTactin est immobilisé sur une matrice de Sepharose™ de base pour donner une protéine cible pure.
  • Protéines à étiquette MBP : Le support de chromatographie haute performance dextrine-Sepharose™ purifie les protéines recombinantes marquées avec la protéine de liaison au maltose (MBP pour "Maltose Binding Protein"). 

Billes d'agarose et gels d'affinité

Les billes d'agarose et les gels d'affinité permettent de purifier les protéines avec étiquette de fusion grâce à des ligands greffés sur de l'agarose en billes. Adaptées à la purification à petite ou grande échelle en conditions natives, dénaturantes ou légèrement réductrices, ces résines conviennent à la purification sur colonne gravitaire, à la centrifugation à faible vitesse en traitement discontinu ("batch processing") et à la chromatographie basse pression, car les billes et les gels sont conçus pour des pressions plus faibles. Les gels d'affinité EZview™ intègrent un colorant rouge qui permet à l'utilisateur de différencier facilement le culot du surnageant, minimisant ainsi la perte de protéines lors d'une purification en mode "batch". Les kits d'immunoprécipitation comprennent des gels d'affinité, des mini-colonnes de centrifugation et un réactif de lyse. Ils sont spécialement conçus pour une récupération maximale des protéines contenues dans les immunoprécipités.

Gels d'agarose pour affinité Superflow et High-Flow

Les gels d'agarose pour affinité Superflow et High-Flow utilisent des billes d'agarose hautement greffées capables de supporter des pressions plus élevées que les billes d'agarose classiques. Ces résines sont donc adaptées aux méthodes de purification par chromatographie liquide rapide des protéines (FPLC pour "Fast Protein Liquid Chromatography"). Les gels d'agarose pour affinité Superflow et High-Flow sont recommandés pour la purification à moyenne et grande échelles.

Billes magnétiques

Les billes magnétiques sont utilisées pour purifier les protéines recombinantes contenant une étiquette de fusion à l'aide d'une plateforme ou d'un rack magnétique afin de séparer les billes des fractions de lavage et d'élution. Cette technique permet un traitement rapide (en quelques secondes) en conditions natives ou dénaturantes. Elle est adaptée aux techniques à bas débit utilisant des microtubes à centrifuger individuels ou aux techniques à plus haut débit utilisant des plaques à 96 puits et l'automatisation.

Kits de purification BugBuster®

Les kits de purification BugBuster® combinent une résine d'affinité, des tampons de lavage, des tampons d'élution et un réactif d'extraction pour faciliter la préparation d'extraits cellulaires solubles et la purification par affinité de protéines de fusion marquées issues d'E. coli.




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