培养基制备

培养基制备

细胞培养基的制备会对哺乳动物细胞的生长和实验结果造成重大影响。同样地,微生物的体外培养也高度依赖特定配方的培养基。培养基是细胞生长及化合物调控细胞形成的能量来源,可同时满足原核和真核细胞培养对特定生长环境的要求。培养基的选择主要取决于培养类型、培养目的和细胞密度的要求。


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培养基制备

市售培养基分为脱水型、干粉型、浓缩液型或工作溶液型。脱水型肉汤培养基需要在蒸馏水中溶解并在灭菌前调节最终的pH值进行制备。用于琼脂培养的干粉培养基必须首先溶解在蒸馏水中进行搅拌,然后煮沸或高压灭菌,最后再使用无菌技术倒入无菌的培养皿中。浓缩液型培养基必须先在蒸馏水中进行无菌稀释,并在调节pH值后分装到无菌的容器中进行储存。工作溶液型培养基在无菌过滤或无菌条件下加入所需的血清或其他补充剂并温热至细胞生长的合适温度后再使用。

培养基灭菌

干粉型培养基在使用前必须经过滤、加热或高压进行灭菌。液体培养基通常是无菌且即用浓缩形式的,但也同样建议进行无菌过滤,尤其是在使用前添加了血清或其他补充剂。培养基灭菌后应使用无菌技术进行处理以防止交叉污染或有害微生物的生长。

培养基补充剂

细胞培养或调节所需的某些补充剂稳定性或耐热性差,因此必须在使用前将其添加到热灭菌的基础培养基中。胎牛血清(FBS)是动物细胞培养基中常用的一种补充剂。某些特定细胞类型的生长可能添加激素、生长因子和特定的信号分子,例如,使用IPTG等添加剂来诱导蛋白表达。还可在培养基中添加抗生素来控制细菌和真菌污染物的生长,但适当地处理和储存培养基也能很好地控制污染。

培养基的储存与使用

市售现成的液体型、琼脂型或工作溶液型培养基通常需避光保存在4°C的环境中以抑制机会性微生物的生长并防止光诱导的培养基成分降解。因此在进行培养物接种前,宜将培养基温热至适宜细胞生长的温度。