细胞培养疑难解答

各类细胞培养常见问题相关的解决方案
各类细胞培养常见问题相关的解决方案

细胞培养已成为生物系统建模的一项基本技术,其在生物技术和制药领域的重要性日益突出,并且在生命科学研究实验室中也不可或缺。尽管这种技术很容易实施,但污染或其他不利于细胞存活的条件会干扰细胞的成功增殖,从而导致无法进行存储细胞扩容或建模实验。常用的共享细胞方法已被证明会导致储备细胞的交叉污染,而之前并未对此进行质疑。查明导致细胞难以正常生长的各种常见和罕见原因,有助于提高实验室效率,提升细胞产物产量并确保体外模型提供有意义且可靠的下游数据。

细胞系错误鉴定

细胞系错误鉴定

近期的研究预估,细胞系的错误鉴定可能影响了多达三分之一在用的所有细胞系。这些发现可能会引发对基于细胞系模型而得到的生物学系统发表结果的质疑。可导致细胞系错误鉴定或交叉污染的因素包括:

  • Contamination with aggressive cell lines: Isoenzyme analysis has demonstrated that many cell lines share a rare enzyme isoform with HeLa cells. HeLa has since been shown to be the most common invasive cell line in culture stocks.
  • Documentation and labeling practices: Cell culture flasks, plates, cryovials, and freezer containment must be clearly labeled, and liquid nitrogen storage maps strictly maintained to reflect the addition, withdrawal, and relocation of cell stocks.
  • Cell line borrowing: Sharing of cells amongst neighboring labs is a common practice that leads to errors in cell line identity. Cell lines should only be obtained from reputable cell repositories such as ECACC, the European Collection of Authenticated Cell Cultures at Public Health England.

Be informed about common causes of cell line cross-contamination and how to protect your work from its consequences.

细胞培养污染

细胞培养的微生物污染

细胞培养基和培养条件不仅为细胞,也为细菌、真菌和病毒污染物提供了理想的环境。除了严格遵守无菌培养技术外,还必须定期对培养物进行显微镜检查以确认是否存在细菌和真菌侵染的证据。一些无所不在的微生物污染物逃避目视检查,预计在全部培养中,多达30%被支原体污染。支原体检测试剂和试剂盒通常都基于PCR扩增技术,后者也可用于检测病毒污染物。

Learn how to keep your cultures free of biological and chemical contaminants.

细胞生长不良

细胞生长不良

在其他方面上看起来是健康的、培养中的细胞未能达到汇合状态是一件令人沮丧的事请。在污染物被排除时,健康细胞倍增面临的一些可能障碍包括:

  • Culture/freezing media condition and quality
  • Quality and application-suitability of supplements
  • Inaccurate cell enumeration during freezedown or passage

When cells seem viable but fail to expand, learn what you can do to improve culture conditions for optimal growth before heading back to the liquid nitrogen.

培养中细胞的解离

贴壁细胞表型的解离

贴壁细胞可以在培养中自发逐个或整片地解离。当贴壁培养物不能保持贴壁状态时, 了解如何检查以及恢复培养物的聚合力

培养中的细胞结块

细胞结块

悬浮液中的细胞模拟 体内 条件形成单个结块。当细胞开始结块时,这可能是因为培养物应激时在培养基中存在的粘性核酸的缘故。培养基中隐藏着什么可能导致细胞结块的物质?在这里阅读 更多关于如何防止培养物结块的信息。

细胞培养中的细胞死亡

培养中的细胞死亡

当在细胞在培养中死亡时,必须首先排除微生物污染。可能会导致细胞健康状态欠佳,或行为与表型不一致的其他因素包括:

  • Frozen stock conditions
  • Cell passage number/overconfluency
  • Environmental stress
  • Overdigestion with dissociation enzymes

Appropriate equipment, qualified reagents, and expert protocols are key to resolving unexpected cell culture outcomes.

细胞培养中的沉淀

培养基中的沉淀

如果不是污染,培养物中的颗粒物通常可能是无机物。熟悉平衡缓冲液和培养基成分, 并了解如何使培养基成分保持悬浮状态


相关技术文章

相关实验方案