支原体检测

抗生素耐受性支原体细菌。

在各种细胞培养体系中,支原体污染都是一种广泛存在且频发的问题。支原体是一种无细胞壁微生物,因此耐受青霉素或其他作用于细胞壁的抗生素。支原体通常还会对多种其他抗生素表现出耐受性。这使得它们在培养基中能达到较大滴度,且无常见细菌污染特征(如混浊)。

它们可对培养细胞造成多种影响,包括代谢变化、增殖减慢和染色体畸变。简而言之,支原体污染会影响细胞系参数及其生物科学研究应用的有效性。因此,基于细胞开展研究及制造对消费者健康至关重要的商品时,维持细胞培养基无污染成为了一项基本要求。


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实验室中的支原体细菌来源

实验室中的支原体污染来源很难控制。某些支原体存在于人体皮肤上,无菌技术操作不当即引入培养基。另外,支原体还可可通过受污染的添加剂(如胎牛血清),或随其他受污染细胞培养基(最常见)传播而引入。支原体进入细胞培养基中后,即可借助培养基处理过程产生的气溶胶和微粒迅速扩散污染实验室其他区域。严格遵守良好实验室规范(例如良好的无菌技术)是关键,强烈建议针对支原体进行常规培养检测,以成功控制制造区域的支原体污染。

支原体检测方法

生物反应器污染可能造成巨大的时间、材料和营业损失——除非能够在制造流程早期发现这一问题。因此,在质量控制过程中的各个时间点检测生物药物、疫苗、细胞培养基和病毒培养基中的支原体至关重要。三种最常用的检测方法依次为:

  • 支原体培养法,即利用针对支原体优化的微生物培养基培养待检样品
  • DNA染色法,即采用Hoechst或DAPI复染支原体核并用荧光显微镜观察
  • PCR(聚合酶链式反应)法,即扩增样品中的支原体(如存在)细菌DNA




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