跳转至内容

主页应用微生物检测无菌性试验

无菌性试验

无菌检测是GMP的一项关键要求，旨在确认药品、医疗器械、生物制品以及细胞和基因疗法在用于患者之前不含活微生物。无菌检测不合格——无论是真阳性还是假阳性结果——都会带来严重后果：产品召回、患者安全风险以及代价高昂的监管调查。

随着药典标准的不断演进和监管审查的日益严格，现代无菌检测计划必须应对三个相互关联的挑战：方法准确性、数据完整性以及放行速度。对于任何按照GMP运行的质量控制实验室而言，了解现有的无菌检测方法、其监管框架以及数字化工作流程和快速微生物检测方法的最新进展至关重要。

从根据您的产品和包装形式选择合适的检测方法，到满足监管机构在数据完整性和放行速度方面不断变化的期望，本指南将带您全面了解无菌检测的每个关键方面。

药品无菌检测方法
膜过滤无菌检测
直接接种无菌检测
用于无菌检测的快速微生物学方法（RMM）
无菌检测中的数据完整性与治理
无菌检测应用：从药品到细胞与基因疗法
无菌检测工作流程

精选分类

无菌检测耗材、培养基及仪器

无菌检测耗材、培养基及仪器

用于微生物质量控制中无菌性检测的实验室仪器和耗材：无菌性检测培养基、泵、硬件及配件。

热原检测

确保安全：热原检测对药品和医疗器械至关重要。单核细胞活化试验（MAT）可检测内毒素和非内毒素类热原。

微生物过滤

微生物过滤

借助我们完整的膜过滤系统进行快速微生物检测，缩短获得结果的时间；该系统适用于生物负荷检测、食品和饮料分析以及大麻微生物检测。

药品无菌检测方法

药品的药典无菌检测方法受《美国药典》（USP）<71>、《欧洲药典》（Ph. Eur.）2.6.1 及《日本药典》（JP）<4.06> 的规范，这些标准要求将样品在两种不同的培养基中进行为期 14 天的培养。使用两种培养基是为了确保对微生物进行全面检测：用于厌氧和需氧细菌的硫代乙醇酸盐液体培养基（FTM）（在 32.5°C 下培养），以及用于需氧细菌和真菌的大豆酪蛋白水解物培养基（SCDM），也称为胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）（在 22.5°C 下培养）。若培养后观察到任何浑浊现象，则表明可能存在微生物污染，必须进行调查。

有两种公认的药典方法：膜过滤法和直接接种法。方法的选择取决于产品的性质、包装形式及其理化特性。如《美国药典》<71>、《欧洲药典》2.6.1 和《日本药典》<4.06> 所述，在产品性质允许的情况下，应优先选择膜过滤法，因其灵敏度更高且能有效去除抑制性物质。当无法进行过滤时，仍可采用直接接种法。

虽然14天的培养期仍是药典标准，但基于ATP生物发光技术的快速微生物检测方法（RMMs）正日益被监管机构接受，适用于包括细胞和基因疗法在内的短保质期产品。新的《美国药典》（USP）<73>章——“基于ATP生物发光检测短效产品中污染物的微生物学方法”——为RMM的采用以及该技术的验证和实施提供了明确的监管框架，该章将于2025年8月生效。

无论选择何种方法，数据完整性要求均适用于所有无菌检测工作流程：从样品接收至最终结果记录，所有测试数据必须完全可追溯、可接受审计，并符合ALCOA++、21 CFR第11部分以及欧盟附件11的要求。

膜过滤无菌检测

想了解更具体的信息吗？

请访问我们的文档搜索页面，查阅数据表、证书和技术文档。

Sterility Testing membrane filtration through a 0.45 µm membrane filter

作为行业先驱，Steritest® 解决方案凭借 50 多年的丰富经验，提供可靠且安全的无菌检测，确保结果值得信赖。根据《美国药典》（USP）<71>、《欧洲药典》（Ph. Eur.）2.6.1 及《日本药典》（JP）<4.06> 的规定，膜过滤是可过滤药品的首选监管检测方法。样品通过 0.45 µm 膜过滤器，微生物被截留其中，随后在适当的培养基中进行培养。

与直接接种法相比，该方法具有以下关键优势：

更高灵敏度——整个样品或混合样品均通过单一膜过滤
抑制剂去除——可在培养前将抗生素或防腐剂等抗菌化合物冲洗掉，从而防止假阴性结果
封闭系统保护——现代封闭式过滤装置确保产品在测试过程中始终与环境隔离，显著降低了外来污染和测试结果无效的风险

在GMP无菌检测环境中，无论是层流柜还是隔离器内，使用封闭式一次性膜过滤装置均被视为最佳实践。

直接接种无菌试验

在直接接种无菌试验中，将少量样品在无菌条件下转移至合适的培养基中并进行培养。虽然该方法操作简单，但存在一些局限性，实验室应予以考虑：

灵敏度降低——仅能接种少量样本，从而增加了漏检低水平污染的风险
浊度干扰——本身呈浑浊或有色的产品可能在目视检查时掩盖微生物的生长
抗菌抑制——具有抗菌特性的产品必须在接种前进行中和处理，以避免出现假阴性结果

Automated microcolony counting for Rapid Sterility Testing

用于无菌检测的快速微生物学方法（RMM）

随着监管框架不断演进以适应创新发展，快速微生物学方法（RMM）作为经科学验证的传统药典无菌检测替代方案，正日益获得认可。对于保质期较短的产品——例如细胞和基因疗法、放射性药物以及短效生物制品——RMM尤为重要，因为14天的培养周期与产品放行时间表或患者治疗计划难以兼容。

在最成熟的RMM技术中，ATP生物发光法通过检测活微生物与生物发光试剂反应后发出的光，实现快速、灵敏且定量的污染物检测。与传统的基于培养的方法不同，ATP生物发光法用定量的仪器测量取代了主观的目视浊度评估，从而能够更早地获得结果，并提高结果解读的可重复性。

《美国药典》（USP）<73>——《基于ATP生物发光检测短效产品污染的微生物学方法》将于2025年8月生效，其出台标志着监管领域的一个重要里程碑，为实验室提供了明确的药典框架，以实施和验证基于RMM的无菌检测。与之相辅相成的是 USP <1071>，该标准就快速微生物检测方法的实施和验证提供了更广泛的指导。

RMM 不仅适用于最终产品的无菌检测，还适用于整个生产流程中的生物负荷监测，为实验室在多种质量控制应用中提供了灵活且符合规范的解决方案。

Milliflex® Rapid System 2.0 完全符合《美国药典》<73>的要求，可帮助您的实验室实施经过验证且符合法规要求的基于 RMM 的无菌检测工作流程——5 天内即可出具结果。

Steritest Testing test record analysis using the M-Trace software

无菌试验中的数据完整性与治理

无菌试验结果的可靠性取决于其背后的数据质量——全球监管机构均将数据完整性视为GMP微生物学合规的核心。除了方法学之外，无菌试验数据在整个试验生命周期中的生成、记录和维护方式同样重要。包括美国FDA、欧洲EMA和日本PMDA在内的监管机构要求所有实验室数据均符合ALCOA++原则：数据必须具备可追溯性、可读性、同时性、原始性和准确性，此外还需满足完整性、一致性和可用性等要求。

在美国，《联邦法规》第21篇第11部分（21 CFR Part 11）明确了电子记录和电子签名的要求，使数字化文档在法律上等同于纸质记录。在欧洲，《欧盟附录11》（EU Annex 11）针对GMP环境中的计算机化系统制定了同等标准。这些法规共同为质量控制实验室数据（包括无菌试验）的数据完整性确立了明确的框架：实时数据采集、自动生成审计追踪记录以及完整的端到端数字可追溯性——从操作员身份识别和仪器数据，到样品信息和最终结果——这些在GMP检查中日益受到监管机构的重视，并被视为行业最佳实践。M-Trace®软件及移动应用程序可帮助您的实验室满足这些监管要求。

无菌检测应用：从药品到细胞与基因疗法

无菌检测是众多受GMP监管的行业中一项常规的质量控制要求。尽管基本原理保持一致，但不同细分领域在检测方法的选择、监管框架以及结果产出速度的要求方面存在显著差异：

药品——包括注射剂、眼用制剂和输液——是无菌检测量最大的类别，其检测遵循《美国药典》（USP）<71>、《欧洲药典》（Ph. Eur.）2.6.1和《日本药典》（JP）<4.06>
生物制品、生物类似药及疫苗——作为无菌注射剂，需按照GMP标准进行严格的批次放行检测
医疗器械——根据器械形式调整无菌检测方法，采用直接转移法或产品冲洗法
细胞与基因疗法（CGT）和先进疗法医药产品（ATMP）——这类产品保质期短或极短，快速微生物学方法通常是当日或次日做出放行决策的唯一可行方案
放射性药物——半衰期以小时计的产品，传统14天培养法不可行，且越来越要求采用快速微生物学方法（RMMs）
组织与再生医学——在移植或给药前进行无菌性确认"

无菌检测工作流程

传统药典工作流程——膜过滤法

以下分步工作流程描述了根据《美国药典》（USP）<71>、欧洲药典（Ph. Eur.）2.6.1 和《日本药典》（JP）<4.06> 进行的膜过滤无菌试验。

试验准备 — 在受控环境（层流罩或隔离器）内组装膜过滤装置，并将软管连接至无菌试验泵

膜/滤器的冲洗与预润湿——对膜进行预润湿，以优化过滤效率并最大限度地减少产品对滤器的吸附
样品过滤 — 将等体积的产品分别过滤至两个过滤罐中；微生物将被截留于0.45 µm的膜
上
冲洗 — 使用经验证的冲洗液去除抑制性化合物，以防止出现假阴性结果
培养基灌装 — 将 SCDM（TSB）和 FTM 无菌培养基
注入膜过滤装置
培养——在32.5°C（FTM）和22.5°C（SCDM）下培养14天。这些温度分别代表《美国药典》（USP <71>）、《欧洲药典》（Ph. Eur. 2.6.1）和《日本药典》（JP <4.06>
）中规定的30–35°C和20–25°C药典范围的中点
结果检查 — 目视检查浊度；如有浊度，必须作为潜在微生物污染
进行调查
数字化测试记录——将所有测试步骤、操作员操作及仪器数据实时、自动记录到单一、可审计的电子记录中，有助于符合《联邦法规》第21篇第11部分（21 CFR Part 11）、ALCOA++数据完整性原则，并确保满足监管检查要求

步骤描述符合《美国药典》（USP）<71>、《欧洲药典》（Ph. Eur.）2.6.1 及《日本药典》（JP）<4.06> 的药典要求。步骤 8 反映了 21 CFR 第 11 部分和欧盟附件 11 下的当前数据完整性监管要求，其标准超越了药典要求。

快速无菌检测工作流程——ATP生物发光法

对于保质期较短的产品——包括细胞和基因疗法、放射性药物以及短效生物制品——传统的14天培养期往往与产品放行时间表不符。快速微生物学方法（RMMs）提供了一种经过科学验证且被监管机构认可的替代方案。

ATP 生物发光是无菌检测领域最成熟的 RMM 技术之一。该技术通过检测活微生物与生物发光试剂反应后发出的光，实现快速、灵敏且定量的污染检测。新的《美国药典》（USP）<73>章——“基于ATP生物发光的短效产品污染检测微生物学方法”——为采用RMM提供了明确的监管框架，该章将于2025年8月生效。

典型的 ATP 生物发光快速无菌检测工作流程如下：

样品过滤——将样品通过专用膜进行过滤，保留存活微生物
添加ATP试剂——将生物发光试剂涂布于滤膜上，针对活细胞
自动检测与定量 — 高灵敏度检测相机捕捉并定量分析来自活微生物的光信号
5天内出具结果——比传统的14天药典方法快达75%。实际出结果时间取决于经验证的方法和产品类型。
电子检测记录 — 所有结果均记录在符合 21 CFR Part 11 要求且完全可追溯的数字记录中

该工作流程基于《美国药典》（USP）<73>中所述的ATP生物发光技术。第5步体现了《联邦法规》第21篇第11部分（21 CFR Part 11）和欧盟附件11（EU Annex 11）对数据完整性和电子记录保存的当前监管要求。

采用 ATP 生物发光技术的 RMM 既适用于无菌检测，也适用于生产过程中的生物负荷监测，为实验室在整个生产流程中提供了一种多功能、快速且符合法规要求的解决方案。