流式细胞术

流式细胞术介绍

流式细胞术是一种利用单路或多路激光多参数分析单个细胞的技术。细胞迅速流过各路激光时,可通过可见光散射或荧光分析每个细胞和颗粒。与光散射分析不同,此方法通过转染和表达常见荧光蛋白(例如绿色荧光蛋白,GFP)并采用荧光偶联抗体或荧光染料染色,从而进行荧光测定。流式细胞术是一种强大的技术,常用于分子和细胞生物学研究应用,包括免疫学、癌症生物学和疾病研究。


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流式细胞仪及试剂

流式细胞仪内使用的主要组件概要(包括电子、光学和射流器件)。射流器件用作将样品引导至光学组件的液体输送系统,由激发光学器件(激光器)和收集光学器件(由光电二极管和光电倍增管(PMT))组成。其中关键的是,电子器件可将来自检测器的信息转换为计算机可解读的数字信号。其可结合其他系统开展更深入的样品分析,如纯化和收集样品的细胞分选仪,以及集流式细胞仪和荧光显微镜于一体的多色成像细胞仪。根据应用场合,可选用多种检测试剂,包括核酸染料、细胞活力染料、聚合物染料、量子点、有机小分子和荧光蛋白。

流式细胞术应用

流式细胞术应用于许多研究领域,常用于分析不同细胞群中的多个参数。常见的分子生物学应用包括,重组表达荧光蛋白分析,即在多种类型的细胞中诱导这类蛋白表达,从而探究基因功能或进行 体内 细胞示踪。可借助DNA染色技术进行细胞周期分析,更可利用各种抗体开展更广泛的分析,包括信号转导、RNA和蛋白质表达。但免疫表型分型是流式细胞术最常见的应用之一。在免疫表型分型过程中,可利用结合荧光染料的抗体靶向多种细胞表面抗原,从而鉴定细胞群内的特定免疫细胞。

流式细胞术数据分析

流式细胞术数据分析通常涉及细胞或簇的特定区域鉴定,并需要在实验中运用其他参数(包括研究是否存在其他细胞鉴定因子)以进一步了解细胞类别。许多计算机软件程序可用于此类数据分析和其他细胞周期分析。



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