蛋白定量

蛋白定量和蛋白测定是准确确定样品中蛋白浓度的关键。有许多蛋白定量的方法,包括紫外线吸收测定法,基于试剂的测定法和免疫测定技术。每种蛋白定量技术都有其独特优势,适用分析何种样品取决于样品类型和/或可用于分析的体积。例如,某些基于染料的测定法可能会干扰缓冲液制剂中的化学物质,故其他测定方法可能更适合。科学家需要考虑每种测定法的局限,确定哪种方法最适合测定其样品。

紫外线吸收测定法

运用紫外线(UV)吸光度测定蛋白浓度是一种相对简单的蛋白定量测定法。含芳香族侧链的氨基酸(如色氨酸,酪氨酸等)使蛋白在280 nm处出现独特的紫外线吸光度。这些氨基酸在280 nm处吸收了紫外线,由此可以通过分光光度计获得该特定波长处的吸光度,用于估算样品中的蛋白浓度。这种相对快速的测定法经常在实验室中使用,通常使用Warburg-Christian法估算蛋白浓度。不过,由于样品中的非蛋白成分可能会干扰吸光度测定,因此使用UV吸光度测定蛋白浓度可能会有很大的变异性。此外,由于氨基酸组成的差异,样品中不同蛋白的混合物可能会导致吸光度读数变化。


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试剂测定法

试剂测定法克服了UV吸收法的兼容性问题。用于蛋白定量的试剂测定法示例包括那些利用比色法的测定法,例如二喹啉甲酸(BCA)法、Lowry法和Bradford测定法。BCA法Lowry法都涉及铜-蛋白复合物的形成。两者都是灵敏的测定方法,与Bradford法相比变异性较小。然而,与BCA法和Lowry法不同,Bradford法快速,易操作且与某些还原剂兼容。

免疫测定法

如果样品中存在多种蛋白或蛋白含量低于检测阈值,则某些测定法可能无法得出准确的蛋白定量结果。运用各种检测方法的强大免疫测定技术,则提供了另一种方法选择,可精确定量各类样品中的蛋白。例如,多重测定法使研究人员可以同时定量样品中的多种蛋白。此外,单分子计数技术可以测定毫微微克级蛋白,帮助鉴定和定量小样本中的低水平蛋白。运用这些技术的研究应用包括测定健康组织中或与疾病进展相关的生物标志物,更好地了解某些疾病状态。



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