Merck
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CAS9RFPP

Sigma-Aldrich

CMV-CAS9-2A-RFP质粒

Synonym(s):
Cas9 质粒
NACRES:
NA.51

重组

expressed in E. coli

质量水平

200

包装

vial of 50 μL

浓度

20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)

启动子

Promoter name: CMV

报告基因

RFP

运输

dry ice

储存温度

−20°C

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一般描述

Cas9表达质粒使用CMV启动子实现Cas9强瞬时表达。您可以使用MluI和NheI酶切将CMV替换为其它启动子。而且还可使用XbaI酶切将Cas9表达质粒线性化,以实现基于T7的mRNA表达。加入可与Cas9核酸酶共同表达的荧光团,可在转染成功后更易于观察。

应用

功能性基因组学/靶点验证
  • 在多种细胞系中进行基因敲除
  • 对不适合于RNAi的基因进行完全敲除
  • 建立基因敲入细胞系,将启动子、融合标签或报告基因整合到内源性基因中

组分

1管包含1μg Cas9-2A-RFP 质粒

请注意,该产品不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR产品选项卡单独购买。

原理

CRISPR/Cas 是细菌和古细菌的一种防御系统,可用来对抗入侵的病毒和质粒。来自酿脓链球菌的II型CRISPR/Cas系统包含两种分子元件,即一个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA(gRNA),该系统经过基因改造而被用于真核系统中。Cas9 核酸内切酶可在单个gRNA的引导下,在指定基因组位置上引入DNA双链断裂(DSB)。与锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB相似,细胞随后会激活内源性DNA修复程序,即非同源性末端接合(NHEJ)或同源重组修复机制(HDR),对目标DSB进行修复。

外形

Sigma Cas9-2A-RFP 质粒的浓度为50ng/μl 的溶液20μl。

其他说明

为了介导DNA双链断裂,必须与U6-gRNA质粒一起使用。

文献中使用的标准转染浓度范围为≥1.0 ug/μl且≤5 uL的Cas9质粒结合≥1.0 ug/μl且≤5 ul的U6-gRNA质粒。(上述所有浓度均假设是对0.5~1百万个细胞进行核转染)。

储存分类代码

12 - Non Combustible Liquids

WGK

nwg

闪点(F)

Not applicable

闪点(C)

Not applicable

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