Merck

CLL1141

Sigma-Aldrich

A549 细胞 GFP-EGFR

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NACRES:
NA.81

生物来源

human male lung (Source Disease: Lung carcinoma)

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A549 细胞 GFP-EGFR

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A549 Cells GFP-STAT1

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A549 Cells GFP-CTNNB1 RFP-LMNB1

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A549 Cells RFP-STAT3

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OMIM accession no.

131550

OMIM accession no.

600555

OMIM accession no.

116806, 150340

OMIM accession no.

102582

Gene Information

human ... EGFR(1956), ERBB1(1956)

Gene Information

human ... STAT1(6772)

Gene Information

human ... CTNNB1(1499), LMNB1(4001)

Gene Information

human ... STAT3(6774)

一般描述

A549 GFP-EGFR 是肺癌,来自于一个 ZFN 修饰的 58 岁男性白种人的上皮细胞,产生了内源性 EGFR 基因位点表达的 EGFR-GFP 转基因。

该细胞系来自 ATCC 产品号:CCL-185。
糖皮质激素是诱导 A549 细胞对 OSM(抑癌蛋白M)、白细胞介素 (IL-6) 和成纤维细胞条件培养基产生应答所必需的。EGFR 基因定位于人类染色体 7p11.2,编码一个 170属于受体酪氨酸激酶 HER 家族的 kDa 受体蛋白。 Egfr 定位于上皮细胞表面。

应用

A549 细胞 GFP-EGFR 是利用 CompoZr ® 锌指核酸酶技术将基因组 EGFR 基因内源性标记绿色荧光蛋白基因 (GFP) 的 A549 细胞系。整合导致内源性表达融合蛋白,其中 GFP 连接到 EGFR 的 C 端。荧光成像显示特征性 EGFR 膜表达。加入 EGF 后,细胞系显示 EGFR 从细胞膜再分布到核内体,使其可用于化合物的高含量筛选。例如,EGFR 的选择性抑制剂 Tyrphostin AG 1478 可消除再分布。该稳定细胞系从单个克隆中扩增。与通过外源启动子过表达的细胞系相比,该靶标的基因调控和相应的蛋白功能得以保留。

特点和优势

锌指核酸酶 (ZFN) 介导的荧光 GFP 标记靶向集成到染色体 7p11.2 上 EGFR 基因的最后一个编码外显子,以创建一个细胞系,该细胞系表现出用 GFP 标记的转基因在蛋白 C 端稳定表达。

这些 A549 细胞可贴壁,倍增时间约为 22 小时。

质量

检测支原体、无菌性、冷冻后活力、细胞系鉴别的短末端重复序列 (STR) 分析、细胞系种属确认的细胞色素氧化酶 I (COI) 分析。

制备说明

媒介更新每周更换两到三次。

通过在 37°C 水浴中轻轻搅拌(约 2 分钟)快速解冻小瓶,使瓶盖远离水。用 70% 乙醇消毒,加入 9 mL 培养基并离心 125 xg(5-7 分钟)。在完全培养基中重悬,并在 37℃、5% CO2 大气环境中孵育。

传代培养比例:约 1:3-1:6

该细胞系的基础培养基为 RPMI-1640,(产品号:R0883。为制备完全生长培养基,向基础培养基中加入以下组分:胎牛血清, 产品号:F2442 ,至终浓度 (v/v) 10%,L-谷氨酰胺, 产品号:G7513 ,最终浓度为 2 mM。

细胞冷冻培养基-DMSO 1X, 产品号:C6164

法律信息

CompoZr is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

免责声明

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